Universidad Nacional Autnoma de

Mxico
Facultad de Estudios Superiores Cuautitln
DETERMINACION DE APOPTOSIS EN
CELULAS OVARICAS DE
HEMBRAS DE Rhipicephalus microplus
TRATADAS CON CARBAMATOS
Presenta:
INHIBIDORES
DE
LA REPRODUCCION
Omar Escobar Chavarra
Asesor: Dr. Marco Antonio Muoz Guzmn
Co-Asesor : Dr. Fernando Alba Hurtado

Cuautitln Izcalli, Estado de Mxico, Noviembre 2014

Rhipicephalus
R. microplus es un ectoparsito
microplus
hematfago
que afecta al ganado
bovino.

Produce importantes perdidas

econmicas.
Vector de enfermedades.
Garrapata distribuida en casi todo
el mundo.

CONTROL
Control no
qumico

Control
qumico

RESISTENCIA
Tipo de ixodicida y
ao de introduccin

Reportes de resistencia

Arsnico (1893)

Australia, 1936; Argentina,

1936;
Brasil,
1948;
Colombia,1948;
Uruguay,
1953; Venezuela. 1966.
DDT (1946)
Argentina,
1953;
Brasil,
1953;
Australia,
1953;
Venezuela, 1966)
Organofosforados
y Australia, 1963; Argentina,
Carbamatos (1946)
1964; Brasil, 1963; Colombia,
1967;
Venezuela,
1967;
Uruguay, 1983; Mxico, 1986
Formamidinas (1975)
Australia, 1978; Brasil, 1989;
Mxico, 1994; Venezuela,
1995;
Colombia,
1997;
Argentina, 2000.

Piretroides(1977)
Australia, 1981; Brasil, 1995;
Colombia, 2000
Lactonas
macrociclicas Brasil, 2001; Mxico. 2010.
(1981)

Fluazuron (1990)
Brasil (2014)

(George et al., 2004; Coure et al.,

2007; Castro et al., 2012; Miller et. al
2013; Reck et al. 2014).

ANTECEDENTES
Diseo y
sntesis

Pruebas invitro

Pruebas de
txicicidad

Prueba de inmersin de adultas

LosPrueba
carbamatos
fueron diseados y
de inhibicin de la
sintetizados
oviposicin
En la FES-Cuautitln.

OVIPOSICIN
NORMAL

OVIPOSICIN
AFECTADA

Mecanismo de
accin

Ensayos de toxicidad aguda oral y drmica

Toxicidad subcronica , ensayos de citotoxicidad
Y genotoxicidad.

ANTECEDENTES
Sntesis

Pruebas sobre
garrapatas

OVIPOSICIN
NORMAL

OVIPOSICIN
AFECTADA

Esquema de los diferentes estados de

desarrollo de los ovocitos de R. microp
(Saito et al. 2005)

HIPOTESIS
Los
nuevos
carbamatos
Etil-4bromofenilcarbamato
y
Etil-4clorofenilcarbamato incrementan los procesos de
apoptosis en clulas ovricas de Riphicephalus
microplus.

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

Determinar la presencia de clulas apoptticas,

en el ovario de hembras adultas de R. microplus,
inducidas por el tratamiento con dos nuevos
carbamatos inhibidores de la reproduccin.

OBJETIVOS PARTICULARES
Estandarizar la tcnica de TUNEL, empleando un kit
comercial en ovarios de hembras adultas de R. microplus.
Evaluar en diferentes das post-tratamiento, la presencia y
distribucin de clulas apoptticas en el ovario de hembras
de R. microplus, tratadas con los nuevos carbamatos.
Comparar el numero de clulas apoptticas en ovarios de
hembras de R. microplus, tratadas con los nuevos
carbamatos y hembras no tratadas.

METODOLOGIA

150 Hembras
repletas
Repletas
deRiphicephalus
microplus Cepa
media
joya.

5 grupos de 10 garrapatas para prueba de inmersin de adultas

Etil-4Bromofenilcarbamato
(1mg/mL)

Etil-4Clorofenilcarbamato
(1mg/mL)

Dimetilsulfoxido- Agua
(4%)

Conteo de clulas
apoptticas/mm2

Procesamiento con DeadEndTM

Colorimetric TUNEL System para
Deteccin de clulas apoptticas
Ovarios embebidos en parafina
Y procesados por tcnicas
de histologa convencional para
obtener secciones de 5 m.

Extraccin de los ovarios los das 0,1,3,5 y 7

posteriores a cada tratamiento

RESULTADOS

Media (EEST) del nmero de clulas apoptticas en epitelio ovrico de garrapatas Rhipicephalus microplus en diferentes das pos-tratamiento con el etil-4bromofenilcarbamato.
* Diferencia significativa (p<0.001) entre los grupos de cada da pos-tratamiento.

Media (EEST) del nmero de clulas apoptticas en epitelio ovrico de garrapatas Rhipicephalus microplus en diferentes das pos-tratamiento con el etil-4clomofenilcarbamato.
Un asterisco (*) indica diferencia significativa (p<0.001) entre los grupos de cada da pos-tratamiento.

Ensayo de TUNEL en ovarios de hembras repletas de R. microplus despus de 1 da p.t. con dos diferentes carbamatos. A, ovocitos de hembras testigo;
B, ovocitos de hembras tratadas con 1mg/mL de etil-4-clorofenilcarbamato; C y D, ovocitos de hembras tratadas con 1mg/mL de etil-4-bromofelilcarbamato. II= ovocito II,
III= ovocito III, ep= epitelio ovrico, cap= cuerpo apoptotico, dn= nuclolo daado, v= vacuola.

Ensayo de TUNEL en ovarios de hembras repletas de R. microplus despus de 3 da p.t. con dos diferentes carbamatos. A, ovocitos de hembras testigo;
B, ovocitos de hembras tratadas con 1mg/mL de etil-4-clorofenilcarbamato; C y D, ovocitos de hembras tratadas con 1mg/mL de etil-4-bromofelilcarbamato.
II= ovocito II, III= ovocito III, ep= epitelio ovrico, cap= cuerpo apoptotico, v= vacuola.

Ensayo de TUNEL en ovarios de hembras repletas de R. microplus despus de 7 da p.t. con dos diferentes carbamatos A, ovocitos de hembras testigo;
B, ovocitos de hembras tratadas con 1mg/mL de etil-4-clorofenilcarbamato; C, ovocitos de hembras tratadas con 1mg/mL de etil-4-bromofelilcarbamato.
II= ovocito II, III= ovocito III, IV= ovocito IV, V= ovocitos V, ep= epitelio ovrico, cap= cuerpo apoptotico, nd= nucleo degenerado, v= vacuola.

DISCUSIN

Deteccin de apoptosis en
clulas de garrapata por
prueba de TUNEL con el kit
DeadEndTM Colorimetric TUNEL
System.

Existen diversos frmacos que

producen apoptosis.

Los procesos de apoptosis son

normales en diversos
organismos, sin embargo las
garrapatas tratadas con los
nuevos carbamatos Etil-4bromofenilcarbamato y Etil-4clorofenilcarbamato
presentaron un numero mayor
de clulas apoptoticas.

Presencia de
apoptosis en
pedicelo y
ovocitos sin
apoptosis .

Disminucin
en el
desarrollo de
ovocitos de
garrapatas
tratadas.

Daos
morfolgicos
observados en
cortes
histolgicos
en los ovarios

CONCLUSIONES
Los carbamatos Etil-4-bromofenilcarbamato y Etil-4clorofenilcarbamato inducen apoptosis en clulas del
ovario de R. microplus, principalmente en las clulas del
pedicelo lo cual puede alterar la nutricin de los
ovocitos.
Existen alteraciones morfolgicas como la vacuolizacin
del citoplasma y las alteraciones de la membrana de
ovocitos de R. microplus sugerentes de otros efectos de
los carbamatos sobre los ovocitos.