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La culture des bactries

CIVEL / Microbiologie

La culture des bactries

I. Multiplication des bactries

Allongement

Bactrie mre

Invagination

Division

2 bactries filles

La scissiparit

La culture des bactries

II. Techniques dtude des caractres culturaux

Lisolement :
Obtention dune colonie pure
(ensemble de clones bactriens)

En milieu solide : mthode des quadrants

mthode des quadrants


2 : Diviser la bote de petri en 4
quadrants
3 : soulever le couvercle de la boite de Ptri et
dposer linoculum ( laide de loese) sur une
petite surface au point initial.
4 : striliser loese et aprs refroidissement faire des
stries serres sur toute la surface des quadrants 1 et 2
5 : striliser de nouveau loese et faire des stries
serres sur les quadrants 2 et 3.
6 : striliser de nouveau loese et faire des stries
serres sur les quadrants 3 et 4.
7 : striliser loese et placer la boite (correctement
identifie) lenvers (couvercle vers le bas) dans
ltuve.

2
1

3
4

Isolement sur milieux solides,


par la mthode des quadrants

Colonies isoles

1
Zone riche

- Le dpt est effectu en zone 12, les colonies y sont serres et


petites.
- La fin de lisolement se fait en
zone 4 : on retrouve des colonies
isoles

Lisolement :
Obtention dune colonie pure
(ensemble de clones bactriens)

Colonie
isole

Lisolement :
Obtention dune colonie pure
(ensemble de clones bactriens)

Variantes

Lisolement :
Obtention dune colonie pure
(ensemble de clones bactriens)

Ne jamais
crire sur le
couvercle !!

Initiales, Nde poste,


rfrence de la souche

La culture des bactries

II. Techniques dtude des caractres culturaux

Lisolement :
Obtention dune colonie pure
(ensemble de clones bactriens)

En milieu solide : mthode des quadrants


En milieu solide : mthode par puisement

Face

Profil

En milieu solide : mthode par puisement

Strie
s

Glose
incline

Vue de
face
Vue de
profil
En milieu solide : mthode par puisement

La culture des bactries

II. Techniques dtude des caractres culturaux

Lisolement :
Obtention dune colonie pure
(ensemble de clones bactriens)
En milieu solide : mthode des quadrants
En milieu solide : mthode par puisement

Lexamen macroscopique
En milieu liquide

Lexamen macroscopique :

En milieu liquide

SURFACE : Voile, Anneau

Importance du trouble +
(bulles ? Homognt, couleur)

CULOT : Couleur, adhrence

Lexamen macroscopique :

En milieu liquide

La culture des bactries

II. Techniques dtude des caractres culturaux

Lisolement :
Obtention dune colonie pure
(ensemble de clones bactriens)
En milieu solide : mthode des quadrants
En milieu solide : mthode par puisement

Lexamen macroscopique
En milieu liquide
En milieu solide

Lexamen macroscopique : Sur milieu solide


Ltude de colonies

Lexamen macroscopique : Sur milieu solide


Ltude de colonies

Taille, forme,
relief, contour,
aspect de la surface,
transillumination,
consistance,
couleur,
prsence dun halo

Halo opaque
Halo clair

Centre noir
(colonie)

La culture des bactries

III. Conditions dune culture


bactrienne et milieux de culture

La culture des bactries

III. Conditions dune culture bactrienne et milieux de culture


III.1. Dfinitions
-Milieux de culture = prparation dans laquelle un microorganisme
peut se multiplier. Il doit donc comporter tous les lments nutritifs et
les conditions physico-chimiques (pH, T, concentration en ions)
ncessaires au dveloppement du germe tudi.
-Ensemencer = cest introduire un microorganisme dans ou sur un
milieu de culture.
-Culture = cest le rsultat de la multiplication dun microorganisme.
-Culture pure = milieu ne contenant quune seule espce
bactrienne. (Notion de clone bactrien)

La culture des bactries

III. Conditions dune culture bactrienne et milieux de culture


III.2 : composition chimique moyenne sche d'une bactrie
lments

Pourcentage (en masse sche)

Carbone

50

Oxygne

20

Azote

14

Hydrogne

Phosphore

Soufre

Potassium

Sodium

Calcium

0,5

Magnsium

0,5

Chlore

0,5

Fer

0,2

divers

0,3

La culture des bactries

III. Conditions dune culture bactrienne et milieux de culture


III.3. Composition dun milieu de culture
- Source de C et N et dnergie (glucides (C), lipides (C et P),
protides (C et N = peptone)) = elles fournissent de lnergie et des
matriels cellulaires aux bactries.
Peptones (muscles, cervelle d'animaux, casine, glatine, soja...) :
contient des aa, fact de croissance, ions, glucides !!
- Elments minraux = Na+, K+, Cl-, PO42-, Mg2+ Ils ont un rle
dans lquilibre physico-chimique (pression osmotique) et les
besoins en minraux de la bactrie (+ CoEnzyme)

La culture des bactries

III. Conditions dune culture bactrienne et milieux de culture


III.3. Composition dun milieu de culture
-Eau = (solvant indispensable la vie sur terre) rle majeur dans les
ractions de solvatation, hydratation, ractions chimiques et
enzymatiques se ralisent majoritairement en milieu aqueux.
-Facteurs de croissance = ils stimulent la croissance et sont
indispensables certaines bactries dites exigeantes (lments que
les bactries ne savent pas synthtiser).
-Agar = compos prsent dans les milieux solides. Cest un
polyoside extrait dalgues japonaise (=glose) qui la proprit
dtre liquide >56C et solide 40C.
(- Autres : indicateur de pH, agents slectifs)

La culture des bactries

III. Conditions dune culture bactrienne et milieux de culture

Exemple : la glose ordinaire (GO)


Peptones = hydrolysat de
protines (source daa)

5g
source dA, N, nergie +
facteurs de croissance +
apporte des ions

Extrait de viande =
macration de viande
contenant des protines,
glucides, vitamines et sels
minraux.

1g

NaCl

5g

Maintien de
osmotique

Agar

15g

Solidifiant,
colonie

Eau

Qsp 1L

la
support

Solvatation,
permet
les
biochimiques

pression
pour

hydratation,
ractions

La culture des bactries

III. Conditions dune culture bactrienne et milieux de culture

Exemple : le citrate de Simmons


Citrate de Sodium

1g

Seule source de C

NaCl

5g

Maintien de
osmotique

Sulfate de magnsium

0,2g

Dihydrogenophosphate

1g

Hydrognophosphate
potassium
Bleu de bromothymol
Agar

Eau

de

1g
0,08g
15g

Qsp 1L

la

pression

Cofacteur enzymatique
Systme tampon
(limite les variations de pH)
Indicateur de pH
Solidifiant,
colonie

support

Solvatation,
permet
les
biochimiques

pour

hydratation,
ractions

La culture des bactries

IV. Les diffrents types de milieux


de culture

Milieux empiriques
Milieux synthtiques
Milieux semi-synthtiques

La culture des bactries

IV. Les diffrents types de milieux


de culture
Exemple : la glose ordinaire (GO) Nature du milieu : Milieu
Empirique
Peptones = hydrolysat
protines (source daa)

de

5g

Extrait
de
viande
=
macration
de
viande
contenant
des
protines,
glucides, vitamines et sels
minraux.

1g

NaCl

5g

Maintien de la pression osmotique

Agar

15g

Solidifiant, support pour colonie

Eau

Qsp 1L

source dA, N, nergie + facteurs de


croissance + apporte des ions

Solvatation, hydratation, permet les


ractions biochimiques

La culture des bactries

IV. Les diffrents types de milieux


de culture
Exemple : le citrate de Simmons Nature du milieu : Milieu
synthtique
Citrate de Sodium

1g

Seule source de C

NaCl

5g

Maintien de la pression osmotique

Sulfate de magnsium

0,2g

Dihydrogenophosphate

1g

Hydrognophosphate
potassium
Bleu de bromothymol

de

1g
0,08g

Agar

15g

Eau

Qsp 1L

Cofacteur enzymatique
Systme tampon
(limite les variations de pH)
Indicateur de pH
Solidifiant, support pour colonie
Solvatation, hydratation, permet
les ractions biochimiques

La culture des bactries

III. Conditions dune culture bactrienne et milieux de culture


III.4. Caractristiques physico-chimiques
- pH = voisin de la neutralit (7 < pH < 7,5).
RQ : certaines bactries peuvent soit alcaliniser soit acidifier le
milieu au cours de leur croissance ce qui peut finir par entraver leur
multiplication. On a donc recours des systmes tampons pour
limiter les carts de pH (Ex : systme KH2PO4 et K2HPO4)
+ Conditions dincubation :
- TC = elle doit tre choisie en fonction du germe tudi (en gnral
37C)
- atmosphre = prsence ou absence dO2

La culture des bactries

IV. Les diffrents types de milieux


de culture

La culture des bactries

IV. Les diffrents types de milieux de culture


IV.1. Conditionnement
- Les milieux liquides = on parle de bouillon de culture.
- Les milieux solides = on parle de glose. Ils peuvent tre
conditionns en boite de Ptri ou en tube (glose incline) / agaragar
Isolement : Macroscopie / vrification de puret

La culture des bactries

IV. Les diffrents types de milieux de culture


IV.2. Classification
421. Selon la composition
- Milieux empiriques = composition non connue exactement (extrait
de viande)
- Milieux synthtiques = composition qualitative et quantitative
exactement connue.
- Milieux semi-synthtiques = la base est empirique et on additionne
une molcule connue.

La culture des bactries

IV. Les diffrents types de milieux de culture


IV.2. Classification
422. Selon lutilisation
- Milieux de conservation = milieu en gnral trs pauvre
- Milieux didentification = milieux servant identifier le germe (un
caractre)
- Milieux disolement = milieux servant sparer les bactries
contenues dans un chantillon polymicrobien pour pouvoir, par la
suite, les tudier sparment.

La culture des bactries

IV. Les diffrents types de milieux de culture


IV.2. Classification
On distingue :
a) les milieux disolement non slectifs : permettent la
culture de la plupart des bactries.
(GO, GTS, BCP)
Milieux usuel ou ordinaire : pour les microorganismes non exigeant
(peptones, glucide, ions, eau)
Milieux enrichis : addition de vitamines, sang...
b) les milieux slectifs = contiennent un inhibiteur ou de
conditions de culture dfavorable qui empche la culture des germes
sauf celui quon tudie.

Les milieux slectifs : Prsence dagents slectifs


Agents
slectifs

nature

Cristal violet

Colorants

Desoxycholate

Driv des sels


biliaires

Bile
Azide (de
Sodium)

Ex de
milieux

Bactries inhibes

Drigalski

Bactries Gram
positif

BEA

Bactries Gram
ngatif (et certaines
Gram positif)

Drigalski

BEA

Les milieux slectifs : Prsence dagents slectifs


Agents
slectifs

nature

Cristal violet

Colorants

Desoxycholate

Driv des sels


biliaires

Bile
Azide (de
Sodium)

Acide
nalidixique +
colimycine

Antibiotiques

NaCl 75g/L

Ctrimide

Sel

Antiseptique

Ex de
milieux

Bactries inhibes

Drigalski

Bactries Gram
positif

BEA

Bactries Gram
ngatif (et certaines
Gram positif)

GS +
ANC

Bactries Gram
ngatif

Chapman

Gram- et certains
Gram +
(Enterococcus et
Streptococcus)

Glose au
Ctrimide

Toutes bactries
sauf les
Pseudomonas (et
quelques exeptions)

Drigalski

BEA

Chapman

Les milieux slectifs : Prsence dose et dindicateur de pH

La culture des bactries

IV. Les diffrents types de milieux


de culture
Milieux empiriques
Milieux synthtiques
Milieux semi-synthtiques
Milieux de conservation
Milieux didentification
Milieux disolement non slectifs
Milieux disolement slectifs
Milieux denrichissement

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