UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUMICA
BIOLGICA Y FISIOLOGA ANIMAL
T1. Factores Fsicoqumicos que influyen en la
actividad enzimtica
T2. El modelo de Michaelis-Menten. Significado de los
valores valores de Km y Vmax. El criterio de Kcat/Km.
Sustratos mltiples en las reacciones bioqumicas.

Ms.C. Patricia Elizabeth Torres Plasencia .

FACTORES FISICOQUMICOS QUE

INFLUYEN EN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La actividad enzimtica se puede medir

en trminos de la velocidad de reaccin
enzimtica: Cantidad de producto
formado (en M mM) por unidad de
tiempo (s min.).

La actividad enzimtica puede estar

afectada por:
El Tiempo de incubacin
El pH
La temperatura
La Concentracin de enzima
La Concentracin de sustrato

TIEMPO DE INCUBACIN
La cantidad de producto
formado en una reaccin
enzimtica es proporcional
al tiempo de incubacin (a >
t > P formado).

Pero: La relacin es lineal

hasta
un
periodo
determinado ya que las
reacciones
son
generalmente reversibles y
tienden al equilibrio.

Efecto del pH
La mayor parte de los
enzimas tienen un pH
caracterstico en el cual su
actividad es mxima:

pH

ptimo.
Por encima debajo de
este pH: la actividad
disminuye.
El pH genera la ionizacin
(carga + -) tanto del
generalmente
acampanada,
sustrato como de los grupos Curva
funcionales de los Aas ptes en algunas presentan una meseta: Papana
el centro activo, lo que (entre pH 4 y 9).
favorece
la
actividad
cataltica.
Valores de pH muy cidos alcalinos: altera estructura 3:
desnaturalizacin: prdida de act. enzimtica.

Efecto de la Temperatura
Cuando
aumenta
T,
aumenta la energa de
molc. reaccionantes, se
favorece la colisin.
La V de las reacciones
enzimticas incrementa
con el aumento de la T
hasta un margen que no
comprometa la estabilidad
y activ.
La velocidad de reaccin de los enzimas se duplica
aproximadamente por un incremento de cada 10C (Q10:
coeficiente de temperatura). El Q10 vara segn
los enzimas (dependiendo de la energa de activacin).
La mayor parte de los enzimas se inactivan a T superiores a
55 60C, excepto
algunas bacterias termoflicas (85C). Algunos enzimas
inactiv. trmica que luego revierte.

Efecto de la Concentracin de Enzima

Efecto de la concentracin del sustrato

Michaelis
y
Menten
observaron que cuando se
mantiene
constante
la
concentracin de enzima (E) y
se
va
incrementando
la
concentracin del sustrato (S),
se
obtiene
una
grfica
hiperblica.
Inicialmente
V
reaccin
proporcional a [S] obtenindose
una lnea recta. Luego V reacc.
disminuye (independiente de [S])
hasta hacerse constante.

Orden cero

Primer Orden

CINTICA
ENZIMTICA
Concentracin de enzima,
sustratos
y
productos
(incluyendo inhibidores y/o
activadores)

pH

La cintica enzimtica estudia la

velocidad
de
las
reacciones
catalizadas por los enzimas, as
como tambin los factores que
intervienen.
Temperatura

Qu significa velocidad cuando hablamos de una reaccin

qumica?
Si tenemos la siguiente reaccin:

La velocidad (V) es la cantidad de A que desaparece en una

unidad de tiempo concreta; es igual a la velocidad de aparicin
de P, es decir, la cantidad de P que aparece en una unidad de
tiempo completo.
La velocidad de la reaccin est relacionada directamente con
la concentracin de A mediante una constante de
proporcionalidad k, denominada constante de velocidad:
Primer orden
Muchas reacciones bioqumicas importantes incluyen dos reactantes:
V = k[A][B]
Pseudo primer orden
Orden cero

Segundo orden

La concentracin del sustrato afecta la velocidad

de
reaccin catalizada por enzimas
Para investigar la velocidad de reaccin el mtodo ms
sencillo es seguir el incremento del producto de la reaccin en
funcin del tiempo.

Se alcanza un equilibrio, el enzima

activo y transforma el P en S y vice

Sin embargo, las cinticas enzimticas son ms fcilmente

comprendidas si se considera solamente la reaccin directa
(conversin del S a P).
Velocidad de catlisis (V0) : nmero de moles de producto
formado por segundo cuando la reaccin acaba de empezar
(t = 0).

Modelo de Michaelis - Menten

Leonor
Michaelis
y
Maud
Menten
propusieron un modelo
sencillo que explica
estas
caractersticas
cinticas mediante la
formacin
de
un
complejo
E-S
intermediario en la
catlisis.

E+S

k1
k-1

ES

k2
K-2

E+P

Teniendo en cuenta la
velocidad de reaccin cercana
a 0:
k1
k2
E+P
E+S
ES
k-1
En el estado estacionario la [ES]
permanece
invariable
y
las
concentraciones del S y P van
cambiando.
Se
obtiene
una
constante
que
relaciona
las
constantes
de
velocidad
de
destruccin
y
formacin
del
complejo [ES]
Si K1 >> K2, Km = cte disociacin del
complejo ES, es decir es una medida
de la estabilidad del complejo ES:
Una Km baja indica una unin fuerte.
Una Km alta indica una unin dbil.

s diferente para cada enzima y depende del sustrato, pH, temperatura y fuerza i

Obteniendo la ecuacin de
Michaelis Menten:

Si [S] es <<< que Km, Vo = (Vmax/Km)

Si [S] es >>> que Km, Vo = Vmax
Si [S] es igual a Km, Vo = Vmax/2
Baja
concentrac
in de
sustrato
ALTA
concentracin
de sustrato
SATURACION

En resumen, los valores de Km y Vmax significan:

Km:
Es aquella concentracin de sustrato a la cual la velocidad de
reaccin se hace la mitad de su valor mximo o aquella concentracin
a la cual la mitad de los centros activos estn ocupados.

la medida de la estabilidad del complejo ES, es decir indica la afinidad del E por

Vmax:

ela el nmero de recambio de un enzima, que es el nmero de molculas de sust

ertidas en producto por unidad de tiempo por una molcula de enzima totalmen
rada de sustrato. Es igual a la cte cintica K2 o Kcat.

Determinacin de los valores de Km y Vmax

Representacin recproca doble

(Lineweaver - Burk)
0.04

1/v
0.03

0.02

0.01

0.00
-0.4

-0.2

0.0

0.2

0.4

0.6

1/s

NUMERO DE RECAMBIO: Kcat

K cat = Vmax/ [E]T

Kcat = numero de molculas de sustrato
convertidas en producto por unidad de
tiempo por una molcula enzimtica en
condiciones ptimas ( saturada por el
sustrato).
[ E]T = concentracin total de la enzima

Kcat/Km
Es una medida de la eficiencia cataltica:
Cuando la [S] >>> Km, la V = Kcat.
Cuando la [S] <<< Km, la V <<<Kcat y [E] es
parecida a [E]T .

a mayora de las reacciones bioqumicas incluye mltiples sustra

Las reacciones en los sistemas biolgicos incluyen normalmente dos S
y dos P. Reaccin bisustrato:
A+B

P+Q

La mayora de estas reacciones supone la transferencia de un grupo

funcional (fosforilo, amonio) o de electrones (reacc. Redox) de un
sustrato a otro.
Las reacciones de mltiples sustratos, se dividen
en dos clases:
Desplazamiento secuencial y desplazamiento
doble.

DESPLAZAMIENTO SECUENCIAL
Todos los sustratos se unen al enzima antes de que se libere
cualquier producto.
Se forma un complejo ternario entre el enzima y ambos
sustratos (o productos).
Existen dos tipos: ordenado (S se une al E en una secuencia
Mecanismo
secuencial
ordenado:
definida)
y al azar.

ecanismo secuencial al azar:

orden de adicin de sustratos y la liberacin de productos es al azar.

DESPLAZAMIENTO DOBLE O PING-PONG

Uno ms productos se liberan antes de que todos los sustratos se
unan al enzima.
La caracterstica de estas reacciones es la existencia de un
intermediario del enzima sustituido (que modifica al enzima
temporalmente).
Son ejemplo las reacciones de transaminacin (transferencia de
grupos amino de un Aa a un -cetocido).

Los enzimas alostricos no siguen la cintica de Michaelis-Mente

Los enzimas alostricos contienen mltiples subunidades y mltiples
centros activos.
Muestran curvas sigmoideas en vez de las hiperblicas.

La interaccin de las subunidades hace a la unin del sustrato

cooperativa, es decir la unin del S a un centro activo del enzima
facilita la unin a otros centros activos.
Adems la actividad de estos enzimas se puede modificar por la
unin de molculas reguladoras (que se unen reversiblemente a
otros centros que no son los catalticos). Estos enzimas son

GRACIAS POR SU
ATENCIN