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INDUSTRIAL.
OXGENO
Fermentacin Anaerobia:
NITRGENO
UPSTREAM
Medios:
- M. Sintticos: quimicamente definidos.
- M. Complejos: Origen animal o vegetal como
peptonas, extracto de levadura, macerado de
maz, extracto de soja. Quimicamente
indefinidos y de composicin variable.
Componentes:
- Macronutrientes: Fuentes de C, N, S, P, K y Mg,
en g/l.
- Micronutrientes: Elementos traza. Sales de Fe,
Mn, Ca, Zn, Co, en mg/l.
- Factores de Crecimiento:vitaminas, aminocidos,
acidos grasos, etc.
Medio de Cultivo:
Conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y otros componentes que
crean las condiciones necesarias para
el desarrollo de los microorganismos.
Diversidad metablica
medios
Diversidad de
Constituyentes:
- Agar: Ag solidificante. Polisacrido de algas marinas. Las
bacterias no lo degradan.
- Azcares: Fuente de C, glucosa, lactosa, sacarosa.
- Extractos: Preparados de rganos o tejidos animales o
vegetales, extracto de carne, levadura. Preparados con agua
y calor
- Peptonas:Protenas hidrolizadas, obtenidas por digestion
qumica o enzimticas de proteinas animalers o vegetales.
- Fluidos: Sangre, plasma o suero. Se aaden a otros medios.
- Amortiguadores: Sales para mentener el pH en rangos
ptimos. Fosftos de Na y K.
- Indicadores de pH: Indicadores acido-base aadidos para
detectar el cambiuo de pH.
- Agentes Reductores: Sustancias para crear condiciones
apropiadas. Cistena, tioglicolato.
- Agentes Selectivos: A determinadas concentraciones
seleccionan microorganismos. Cristal violeta, sales biliares.
Fuentes de nitrgeno:
Inorgnica u Orgnica, sntesis de protenas, cidos
nucleicos, pared celular
Macronutrientes:
P y S en forma de PO4 y SO4, para formar ADN, ARN, ,
aminocidos azufrados.
K y Mg, ligados al RNA. K acta como coenzima y Mg es
estabilizador de organelos y es cofactor.
Micronutrientes:
- Esenciales: Ca, Mn, Fe, Cop, Cu, Zn.
- Poco esenciales: Na, Al, Si, Cl, Cr, Ni, Se, Mo
Difciles de cuantificar y sus requerimientos aumentan
cuando el cultivo se somete a stress.
Factores de crecimiento:
Aminocidos, tiamina, riboflavina, niacina; la mayora son
constituyentes de coenzimas
Formulacin.
Se refiere a los aspectos cuantitativos de los
medios.
Tener una aproximacin a la composicin de la
biomasa del microorganismo. Una composicin
elemental en peso seco es:
-
Carbono:
Nitrgeno:
Fsforo:
Azufre:
Mg: 0.5
46 48%
7-12
13
0.5 1
1
COMPONENTE
ELEMENTO/FUNCIO
N
MASA. gr
C, energa
22.7
4.37
P+K
1.13
S + Mg
0.232
CaCl2.2H2O
Ca
0.011
FeSO4.7H2O
Fe
0.007
MnS.4H2O
Mn
0.002
ZnSO4.7H2O
Zn
0.002
CuSO4.5H2O
Cu
0.0004
CoCl2.6H2O
Co
0.0004
Quelante
0.394
Glucosa
NH4Cl
KH2PO4
MgSO4.7H2O
EDTA
Agua destilada
1 ml
Log X
2
Microbiologa Industrial
Generalidades de la Fermentacin.
Fermentacin: Proceso realizado en un fermentador
o biorreactor, mediante el cual determinados
sustratos que componen el medio de cultivo son
transformados por accin microbiana en
metabolitos y biomasa.
Microorganismo
Medio
Aumenta concentracin.
Se va modificando
Efectores Internos
(Dotacin gentica)
Efectores
Qumicos
Expresin
Producto
(metabolitos)
(nutrientes)
Efectores Fsicos
(temperatura, agitacin, viscosidad, etc.)
Seleccin, Mantenimiento y
Mejoramiento de MO.
SELECCIN:
- Cepa genticamente estable.
- Velocidad de crecimiento alta.
- Cepa libre de contaminantes
- Requerimientos nutricionales bajos.
- Fcil conservacin por periodos largos de tiempo
- Fermentacin completa en corto tiempo.
- Alto rendimiento de producto y de fcil extraccin
AISLAMIENTO:
a)
b)
Conservacin de cultivos
Inversin
Dao econmico
Prdida del cultivo
logstica
del
almacenamiento
Aislamiento primario
Microorganismo
viable
(gentica/fenotpo)
cultivo
Tipo de propgulo
Estado fisiolgico
Reactivacin
Almacenamiento
Proceso de conservacin
Liofilizacin (freeze-drying)
CRIOCONSERVACIN
Crioconservacin
es la conservacin de
nitrgeno
prctica
lquido
mas
temperatura
baja
de
es
la
temperatura
disponible.
equilibrio,
la
la
difusin
de
que
ocurran
reacciones
CRIOINJURIA
El proceso de congelamiento y descongelamiento produce
cambios en las cluas que pueden resultar letales
Los procesos perjudiciales son: formacin de cristales de
hielo, exosmsis, aumento de la solubilidad de gases,
deshidratacin, aumento de la concentracin de osmolitos,
disminucin del pH, alteraciones de la actividad enzimtica,
acumulacin de metabolitos, incremento del contacto entre
molculas, ruptura de puentes de H, distorsin de
macromolculas, solidificacin, prdidad de la integridad de
membranas, ruptura de emulsiones, etc
La formacin de hielo intra o extracelular es quizs el evento
mas crtico de la crioinjuria.
INJURIA POR
CONGELAMIENTO
Congelamiento lento (efecto soluto)
exosmsis
Hielo extracelular
Hielo intracelular
Dao mecnico
CRIOPROTECCIN
Control de la velocidad de enfriamiento
Balance ptimo entre el efecto soluto y la formacin e hielo. En la
prctica es aceptable 10 C/min. El descongelamiento debe
ser lo mas rpido posible
Principios de la liofilizacin
muestra +
protectores
en ampollas
manifold
-70 C - 5 C
congelamiento
etilenglicol + hielo seco (- 40 C)
etanol + hielo seco (-70 C)
trampa de agua
La muestra colocada en una ampolla estril con un plug de algodn, se congela entre
- 40 C y -70 C. Una vez colocada la muestra en el manifold del equipo se comienza
con el vaco y se retira el enfriamiento. La temperatuyra sube hasta -5 C. A esta
temperatura y con un vaco entre 30 y 60 militorrs, el secado es rpido. El tiempo es
variable y depende del volumen de muestra. Al finalizar el proceso se sella la ampolla
al vaco
L-Drying
Impregnacin en
soporte
Muestra
Ventajas
Desventajas
Agar
0.5-2
Aceite mineral
2-20
Mtodo
Congelamiento
4-5
N lquido
infinito
Suministro regular de N
lquido
Liofilizacin
15-20
Bajo riesgo de
contaminacin, buena a
regular estabilidad gentica
Agua
1-5
L-drying
3-10
estabilidad gentica?
BIBLIOGRAFIA:
Texto Base:
CRUEGER, Wulf. CRUEGER, Anneliese. Manual de Microbiologa Industrial. Editorial
Acribia. Tercera Edicin. Zaragoza, 2000.
Textos Complementarios:
PRESCOTT, Lansign. HARLEY,John. KLEIN, Donald. Microbiologa. McGraw-Hill.
Cuarta Edicin.Madrid, 1999.
RHODES,Alan. FLETCHER, Derek. Principios de Microbiologa Industrial. Editorial
Acribia. Zaragoza 1994.
SCRAGG, Alan. Biotecnologa para Ingenieros. Editorial Limusa. Primera Edicin.
Mxico, 1997.
www.ncbi.nlm.nih.gov (NCBI Data Base)
www.ejbiotechnology.info (Electronic Journal of Biotechnology)
Que es.
Parte de la Microbiologa que se ocupa de las aplicaciones industriales
de los microorganismos (bienes y/o servicios).
Son aquellos procesos industriales catalticos basados en el uso de
microorganismos.
Microbiologa industrial
Biotecnologa Industrial
AREA
MICROORGANISMO
S
PRODUCTOS
Salud
Clostridium,
Penicillium,
Bacillus..
Vacunas, vitaminas,
penicilina - antibiticos, .
Alimentos
Saccharomyces,
Lactobacillus,
Penicillium
Produccin
Vegetal
Rhizobium, Giberella
Bioinsecticidas, cido
giberlico, inoculantes
Produccin
Animal
Insumos
Industriales
Xanthomonas,
Saccharomyces,
Clostridium
Acidithiobacillus,
Pseudomonas..
Biolixiviacin, biooxidacin
Aerobios sp,
anaerobios sp
Biorremediacin de
efluentes
Minera
Servicios
Observaciones y recetas
sobre la generacin
espontnea...
restricciones
el
conflicto
El desarrollo de un proceso
de produccin a gran escala
(BIOPROCESOS), en forma
exitosa, es el resultado de
acelerar e intensificar un
concepto original,
generalmente un
procedimiento de laboratorio
o a pequea escala.
La Ingeniera Gentica
actualmente permite aislar una cierta
caracterstica (contenida en uno o varios genes), y transferirla a otro
organismo. Esto es lo que se conoce como biotecnologa moderna.
La biotecnologa mdica permite el cultivo de tejidos in vitro y su
implante en sustitucin de tejidos daados.
La biotecnologa industrial permite el mejoramiento de tcnicas de
fermentacin para optimizar la produccin de antibiticos, enzimas,
cidos orgnicos, alimentos, nuevos materiales.
La biotecnologa agrcola permite obtener plantas tolerantes a
herbicidas, resistentes a insectos y enfermedades, as como plantas
que pueden sobrevivir mejor a suelos difciles (secos o salinos).
La biotecnologa ambiental permite adaptar especies microbianas o
vegetales a hbitats contaminadas para permitir la degradacin de
metales pesados, hidrocarburos, polmeros, recuperacin de metales.
La biotecnologa animal y vegetal permite la generacin de micro
fbricas de sustancias de inters como productos metablicos,
hormonas, enzimas, pigmentos.
El desarrollo
Microbiolgico /
Biotecnolgico se centra en
tres aspectos
fundamentales: