5.medios Cultivo - Microbiologic¡a

MEDIOS DE
CULTIVO
REQUERIMIENTOS DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
Requerimientos energticos y no
energticos
Salvo excepciones, las bacterias son cultivables en
medios artificiales de laboratorio de tal forma que el
medio de cultivo le proporciona los elementos necesarios
para su crecimiento y multiplicacin. De acuerdo con
esto, siempre se requerir una fuente de energa y una
fuente no energtica como son las sales, factores de
crecimiento, etc., que sin proporcionar energa son
necesarias para su desarrollo.
Los requerimientos energticos son los nutrientes de ese
medio de cultivo, que va a ser utilizado por la bacteria
para su crecimiento. Van a ser fuentes de energa en un
medio de cultivo, al menos, una fuente de carbono y una
fuente de nitrgeno, y fuentes no energticas pueden ser
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
Entre los requerimientos energticos de los

medios de cultivo tenemos:
1. Fuente de Carbono
2. Fuente de Nitrgeno
1. Fuentes de carbono
Existen muchos tipos de fuentes de carbono, ya que esto est
ligado al metabolismo energtico de la especie microbial; por
ejemplo:
Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas
como cido actico, alcohol, citrato sdico, etc.
En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de
carbono corresponde a azcares en forma de mono o disacridos,
como glucosa, lactosa, maltosa, etc.,
Incluso hay microorganismos que pueden utilizar azcares ms
complejos para obtener energa, como es el caso del almidn.
1. Fuentes de carbono
Existen tambin bacterias capaces de
utilizar el gas carbnico CO2 hecho que es
caracterstico
de
las
bacterias
fotosintetizantes y quimiolittrofas.
Otros microorganismos pueden crecer a
expensas del metano, benceno e, incluso,
hidrocarburos como fuente de energa:
Ejemplo: Cladosporium.
Por
ltimo,
existen
especies
como
Pseudomonas, que pueden utilizar como
fuente de energa un gran nmero de
componentes hidrocarbonados diferentes.
En general, conocer el tipo de azcar
utilizado por cada bacteria es muy til para
su identificacin bioqumica y consiguiente
2. Fuente de nitrgeno
Es una fuente bastante menos energtica que la fuente de
carbono pero es necesaria para el metabolismo microbiano,
produciendo tambin energa.
Esta fuente de nitrgeno la van a formar las protenas, pptidos o
aminocidos. Pueden presentarse como protenas completas, que
sera el caso de la gelatina cuya presencia sirve para determinar
la actividad proteoltica o gelatinasa del microorganismo
problema, o incluso protenas an ms complejas, como es el caso
de los extractos de carne, sales de amonio, etc.
Es frecuente encontrar peptonas como fuente de nitrgeno que
corresponden a pptidos o polipptidos dependiendo de su
complejidad pero en cualquier caso son tambin protenas que
estn parcialmente hidrolizadas, aunque no se las deba considerar
como tal.
2. Fuente de nitrogeno
Existen muchos tipos de peptonas y

son excelentes fuentes de nitrgeno.
Entre las ms frecuentes y conocidas
se encuentran los extractos de
levadura
que
son
extractos
hidrosolubles preparados a partir de
un lisado de levadura que se utiliza en
muchos medios de cultivo.
El bio-Thione, es una denominacin
comercial correspondiente a una
peptona ppsica de carne empleada
para la preparacin, por ejemplo, del
medio lquido Sabouraud.
Tiene una alto contenido de azufre y
de ah que en los medios de cultivo
que la contengan se pueda utilizar
para investigar la produccin de
REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
2. Fuente de nitrogeno
La caseina corresponde a una peptona

sometida al proceso de digestin cida
muy utilizada en muchos medios de
cultivo, sobre todo, en forma de peptona
tripsica de caseina; por ejemplo: para
estudiar la formacin de indol por parte
de la bacteria debido al alto contenido de
triptfano que posee este tipo de
peptona.
Tambin es utilizada para estudiar la
reduccin de los nitratos e incluso para el
cultivo de algunos protozoos.
La peptona papanica de soja, es una
fuente de nitrgeno especialmente para
hongos y ciertos grmenes exigentes
como en el caso de las Neisserias.
Otra fuente de nitrgeno sera la
utilizacin
de
nitratos,
nitrgeno
orgnico, amoniaco, sales de amonio,
REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
Entre los requerimientos no energticos de los

medios de cultivo tenemos:
1. Fuente de azufre
2. Fuente de fsforo
3. Iones metlicos
4. Factores de crecimiento
5. Factores de arranque
6. Factores inhibidores
REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
1. Fuente de azufre
Todos los microrganismos que utilizan en su metabolismo
azufre lo hacen mayoritariamente en forma de sulfatos, a
veces en forma de tiosulfatos y en otras ocasiones lo
pueden obtener a partir de algn aminocido, ejemplo:
metionina, cisteina, tiamina, etc.
Agar SIM
Agar TSI
Agar XLD
Agar TSI o KIA
SIM
XLD
REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
2. Fuente de fsforo
En general, las bacterias que utilizan el fsforo lo suelen
hacer en forma de fosfatos.
REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
3. Iones metlicos
Son utilizados por las bacterias bajo la forma de
iones a concentraciones muy bajas. Por ej: el
Sodio, el Potasio, Magnesio, Hierro,etc.
Tambin se encuentra otro tipo de iones metlicos a
Cobalto, Molibdeno.
Estos iones son esenciales para el crecimiento
microbiano y dependiendo de su concentracin
pueden inhibir el crecimiento de otros, como el
caso del sodio que a concentraciones altas inhibe el
crecimiento de un tipo de microorganismo y facilita
el crecimiento de otros.
Agar Manitol Salado contienen 7.5% ClNa permite
el crecimiento de Staphylococous.
Agar Streptococus KF contiene 6.5% ClNa permite
el crecimiento del Enterococus.
REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
4. Factores de Crecimiento
No todas las bacterias son capaces de crecer sobre medios donde se
encuentran cubiertas las necesidades elementales.
Existen bacterias que an as no crecen en tales medios o, si lo hacen, es
muy lentamente. A este tipo de bacterias les hace falta adems una serie de
componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de fabricar por
s solas para su crecimiento.
A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a
corresponder a algn tipo de aminocido de bacterias muy exigentes o
incluso vitaminas, bases pricas o pirimidinicas, etc.
Agar sangre enriquecido con metionina, cido glutmico y cido nicotnico
para el crecimiento de Xanthomonas.
AGAR CHOCOLATE
HAEMOPHYLLUS
El Agar Chocolate permite el desarrollo
de colonias hmedas, lisas y grises del
Haemophylus influenzae.
Este medio contiene hematina (factor
X) y est enriquecido con otros
cofactores, como el NAD (factor V),
que permite el desarrollo de este
microorganismo.
AGAR SANGRE
BORDETELLA
Agar Sangre enriquecido con
Glicerol - papa (Bordet Gengou)
para crecimiento de Bordetella
pertusis.
Se observa colonias en gotas de
mercurio brillantes es fcil de
apreciar.
AGAR SANGRE
FLAVOBACTERIUM
Agar sangre enriquecido con
nitrgeno suplementario y vitaminas
del complejo B para el crecimiento
del Flavobacterium.
REQUERIMIENTOS NO
CULTIVO
5. Factores de Arranque
Son sustancias que van a permitir
a la bacteria en estudio, salir de su
fase de latencia y comenzar su
fase de crecimiento exponencial.
Son fundamentalmente fuentes de
energa glucosa que es utilizado
por las bacterias.
Un factor de arranque puede ser
una fuente no energtica como
algn
in que estimule el
crecimiento.
REQUERIMIENTOS NO
CULTIVO
6. Factores Inhibidores
Son componentes que van a impedir el crecimiento de algn tipo de
microorganismo por bloqueo de sus procesos metablicos.
Los antibiticos son agentes inhibidores o destructores de la propia bacteria.
La azida sdica inhibe el crecimiento de los Gramnegativos.
Algunos colorantes : Eosina Azul de metileno impide el crecimiento
bacteriano de los Grampositivos.
Cristal Violeta impide el crecimiento de los Grampositivos.
Las sustancias inhibidoras son muy tiles para la identificacin y
tipificacin de pruebas bioqumicas de las bacterias.
Agar Mac Conkey :
Agar Eosina Azul de Metileno
Agar Salmonella Shigella
Agar Verde brillante
AGAR MAC CONKEY
TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a
que el microorganismo produce grandes cantidades de cido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeas y
transparentes.
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

El medio EMB contiene
Eosina y azul de metileno
que son colorantes de anilina
y van a inhibir el crecimiento
de los microorganismos
Grampositivos, permitiendo
el crecimiento de todas las
Enterobacterias.
Las colonias que fermentan
la lactosa y/o sacarosa se
observan de un color
prpura.
Las
que
no
fermentan lactosa ni sacarosa
se observan incoloras.
La Escherichia coli se
observa de color prpura y
con brillo metlico.
CLASIFICACION DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
PRINCIPALES TIPOS DE MEDIOS

DE CULTIVO
Existen muchos tipos distintos de medios de cultivo, as
como diferentes clasificaciones. De acuerdo a esto y segn
criterios se podran dividir:
1. SEGN SU PROPORCION EN AGUA
2. SEGN SU USO O UTILIZACIN
3. SEGN LA COMPOSICIN QUE PRESENTEN
4. SEGN SU PRESENTACIN
MEDIOS DE CULTIVO
SEGN SU CONSISTENCIA
1. Medios slidos.
2. Medios lquidos.
3. Medios semislidos
POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Corresponden a aquellos medios donde la proporcin en
agar est siempre por encima del 1.5% . Koch utiliz, en
1881, por primera vez la gelatina para obtener un medio
slido; posteriormente un alumno suyo, Hesse, utilizara en
su lugar agar. En la actualidad, para la solidificacin de los
medios es el agar el utilizado, ya que la gelatina presenta el
inconveniente de fundir a unos 24C, adems existen en
bacteriologa numerosas bacterias gelatinasa positiva que
destruiran tal medio.
La importancia, pues, de los medios slidos es muy grande,
ya que nos permite el aislamiento, purificacin y
visualizacin de su crecimiento en colonias, as como su
posible identificacin a travs de medios especficos y
diferenciales de caracteres slidos, elaboracin de
POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Agar Sangre, observar la morfologa de las colonias y el tipo
de hemolisis.
Agar Mac Conkey, los diferentes tipo de colonias de
acuerdo al consumo de lactosa.
Agar Mueller Hinton, prueba de susceptibilidad a los
antimicrobianos.
AGAR SANGRE
HEMOLISIS
Los Streptococus se clasifican en
base a su propiedades hemoliticas en
agar sangre.
La hemolisis parcial de los eritrocitos
da como un resultado un color
verdoso del medio slido que rodea
las colonias (alfa-hemolisis).
Los que producen hemolisinas que
lisan los eritrocitos, produce un
aclaramiento del medio que rodea las
colonias (beta-hemolisis).
AGAR SANGRE
Cultivo mixto que demuestra la

presencia de dos tipos de
microorganismos:
Un morfotipo de colonias grandes
blancas, brillantes y con bordes
irregulares
pertenecientes
a
bacilos gramnegativos.
El otro morfotipo presenta
colonias
blancas,
pequeas,
enteras,
tipicas
de
un
microorganismo grampositivo.
AGAR SANGRE
Cultivo mixto que demuestra la

presencia de dos tipos de
microorganismos:
Un tipo de colonias grandes,
blancas
pertenecientes
a
Staphyloccous.
El otro tipo de colonias
puntiforme
pertenecientes
a
Streptococus.
AGAR MUELLER HINTON

ANTIBIOGRAMA
Se basa en la difusin del
antibitico sobre el agar, y
determinar la sensibilidad
(formacin de halo alrededor
del
antibitico)
y/o
resistencia
(crecimiento
alrededor del antibitico).
POR SU CONSISTENCIA
2. MEDIOS LIQUIDOS.
Corresponden a los que tambin se denominan caldos, no
contienen agar y su composicin, adems de agua suele
contener al menos una fuente de carbono, sales minerales,
y, en algunas ocasiones segn las caractersticas del
medio, factores de crecimiento, vitaminas, peptonas,
ciertos aminocidos, etc. Son de gran utilidad para la
realizacin de recuentos bacteriolgicos por turbidimetra,
especialmente til en levaduras, para la realizacin de
inculos, para obtener productos metabolitos primarios o
secundarios, creados por los propios microorganismos
como, por ejemplo, antibiticos, cidos lcticos, etc.
Caldo MRVP, para investigar la ruta utilizada en la
degradacin de glucosa
Caldo Peptona, para investigar la produccin de Indol.
INDOL
La formacin de indol a partir

del triptofano se indica por un
color rojo despues del agregado
del reactivo de Kovac.
El tubo del la izquierda es
negativo.
El tubo de la derecha demuestra
un halo de color rojo lo que
indica la presencia de Indol.
POR SU CONSISTENCIA
3. MEDIOS SEMISLIDOS.
Son medios intermedios entre los medios lquidos y los
slidos donde su proporcin en agar suele ser inferior al
0.5% pero siempre suelen presentar una cierta cantidad
que le proporcione una consistencia semislida.
Son tiles para ciertas pruebas bioqumicas como por
ejemplo, la prueba de oxidacin- fermentacin, que
permiter conocer el tipo de metabolismo oxidativo o
fermentativo de la bacteria problema.
Agar O-F Hugh Leiffson
Agar SIM, estudiar movilidad, Produccin de H 2S, Indol.
Agar MIO, estudiar movilidad, Produccin de Indol y
Ornitina.
SIM
Tubo con medio para motilidad

y
produccin
de
cido
sulfihidrico.
Los microorganismos mviles
muestran desarrollo difuso hacia
fuera de la lnea de siembra.
Los microorganismos inmviles
crecen solamente a lo largo de
la linea de siembra por puncin
exterior.
Se observa un color Negro
debido a la produccin de H2S
O-F (Hugh Leifson)
Utilizacin oxidativa de la glucosa.

Dos tubos con el medio O-F.
El tubo de la derecha se encuentra
abierto a la atmsfera, mientras que el
de la izquierda se encuentra cubierto
con aceite mineral para evitar la
exposiicn con el oxgeno atmosfrico.
Solo se ve cido (amarillo) en la
porcin superior del tubo abierto,
indicando que el microorganismo es
capaz de oxidar la glucosa, pero no de
fermentarla.
MEDIOS DE CULTIVO
SEGN SU PRESENTACION
1. Medios deshidratados o liofilizados.
2. Medios ya preparados:
A. Slidos en placa petri.
B. Slidos en tubo.
B.1. Inclinado
B.2. Semi-inclinado (pico de flauta)
C. Lquidos en tubo.
D. Semislidos en tubo.
E. De doble fase en frasco o tubo.
POR SU PRESENTACION
1. MEDIOS DESHIDRATADOS
Son medios que se comercializan
tal cual y una vez en el laboratorio
deben ser preparados adicionando
la
cantidad
de
agua
correspondiente en condiciones
totalmente aspticas o una vez
preparados en estas condiciones lo
esterilizaramos en el autoclave.
Su composicin es muy variable y
puede ser de tipo bsico o ms
complejo.
POR SU PRESENTACION
2. MEDIOS YA PREPARADOS
Son medios que han sido elaborados por las casas
comerciales presentando un determinado control de calidad
y caractersticas especficas adecuadas a cada tipo de
cultivo. Este tipo de medios pueden presentarse en forma
de placas, en tubo, como formas slidas, en frascos, como
medios semislidos o lquidos, en sistemas de doble fase,
etc.
POR SU PRESENTACION
A. Medios slidos en Placa
Petri
Son medios slidos que ocupan

una
superficie
lo
suficientemente grande como
para
poder
visualizar
perfectamente
las
colonias
microbianas (mucho mejor que
en tubo).
Estos medios se utilizan mucho
para obtener cultivos puros
partiendo
de
una
colonia
previamente aislada.
El sistema en placa es uno de
los medios que permite mejor el
POR SU PRESENTACION
B. Medios slidos en tubo
Los medios slidos en tubo corresponden a tubos:
B.1. Con agar inclinado
Este medio solidficado tiene por finalidad
aumentar la superficie donde se va a producir el
crecimiento microbiano una vez sembrado.
Las siembras se realizarn por estra.
Agar Citrato de Simmons
Agar Urea
Agar Manitol rojo fenol.
POR SU PRESENTACION
B.2. Con agar semi-inclinado o
Pico de flauta
Estos tipos de medios son tiles para
observar el crecimiento aerobio
microbiano si se ha sembrado por
estra, el crecimiento anaerobio
microbiano si se ha sembrado por
picadura (anaerobiosis facultativa).
Agar KIA
Agar LIA
Tambin es til para la conservacin
de cepas, porque la desecacin es
menor en medios slidos en tubo
que en las placas petri.
POR SU PRESENTACION
C. Medios lquidos en tubo
Estos medios no permiten
visualizar colonis pero tienen
muchas aplicaciones como, por
ejemplo, pruebas bioqumicas
que permiten:
La determinacin del Indol.
La reduccin de nitratos a
nitritos
La fermentacin de la glucosa,
lactosa u otro azcar, etc.
Pueden servir para aumentar la
concentracin
del
microorganismo inoculado, es
decir, realizar un inculo, y
otras aplicaciones.
POR SU PRESENTACION
D. Medios semislidos en tubo
Se siembran por picadura y corresponden a un trmino
medio entre los lquidos y los slidos. Se utilizan en ciertas
pruebas bioqumicas como:
La prueba de la movilidad
La prueba de oxidacin-fermentacin o de Hugh-Leiffson.
POR SU PRESENTACION
E. Medios de doble fase en frasco
Son frascos constituidos por una fase slida y
otra lquida, por ejemplo, para la determinacin
rpida de microorganismos en sangre. Ambas
fases crecen en el mismo medio y pueden tener
un carcter aerobio o anaerobio. Suelen
contener obturadores de caucho manteniendo
completamente aislado el medio.
Medio de Ruiz Castaeda para el aislamiento de
Brucella.
Medio para Hemocultivo
MEDIOS DE CULTIVO
SEGN SU USO O UTILIZACION
1. Medios para aislamiento.
A. Enriquecidos
B. Selectivos
C. Diferenciales
2. Medios para crecimiento general.
3. Medios para identificacin.
4. Medios para mantenimiento de cepas.
POR SU USO O UTILIZACIN

1. MEDIOS PARA AISLAMIENTO
Son medios muy diversos pero con la particularidad comn
de poder obtener a partir de ellos colonias aisladas. Estos,
segn sea su composicin, se pueden a su vez dividir en:
A. Medios enriquecidos
Son medios a los cuales, como su nombre indica, se les
aade ademas de los componentes bsicos, uno o varios
elementos, como por ejemplo casena soja, triptfano, etc.,
que facilitan el crecimiento de algn tipo de
microorganismo generalmente exigentes, lo que nos
permite aislar el microorganismo que buscamos.

B. Medios selectivos
Son medios en cuya composicin presentan algn
componente o componentes que van a impedir el
crecimiento de algn tipo bacteriano, estableciendo con
ello una seleccin en el tipo de microorganismo que s
puede crecer; por ejemplo, el medio Rothe se caracteriza
porque en su composicin aparece azida sdica confiriendo
al medio propiedades selectivas ya que tal componente va
impedir
el
crecimiento
de
todas
las
bacterias
Gramnegativas, permitiendo el crecimiento de algunas
Grampositivas como Streptococus faecalis.
Medio Salmonella Shigella, contiene en su composicin
sales biliares, citrato de sodio y el verde brillante que inhibe
a la flora Grampositiva y los hacen con el grupo coliforme.

C. Medios diferenciales
Corresponden a aquellos medios que presentan las mismas
propiedades que los medios selectivos, es decir, tienen
componentes que inhiben el crecimiento de algunas
bacterias y, lo que es ms caracterstico de este medio,
presentan sustancias que al ser utilizadas, o no, por las
bacterias que van a crecer en dicho medio, dan una
informacin suplementaria y especfica, es decir,
diferencial; por ejemplo:
El medio Levine (EMB) es te medio presenta en su
composicin eosina y azul de metileno que inhibe el
crecimiento de los Grampositivos y algunas Gramnegativas,
facilitando el crecimineto de la enterobacterias, que segn
utilicen o no la lactosa darn lugar a una coloracin
caracterstica para cada tipo de microorganismo.
Los medios diferenciales suelen ser tambin selectivos y se

2. MEDIOS PARA CRECIMIENTO EN GENERAL
Son medios ya sea en forma liquida o slida que sirven para
el cultivo de la mayor parte de las bacterias. Su
composicin va a corresponder a una fuente de carbono,
una fuente de nitrgeno, sales y agua. Dentro de los
medios generales ms empleados tendramos el caldo
comn, que est compuesto por extracto de carne,
peptona, glucosa, cloruro de sdico y agua.

3. MEDIOS PARA IDENTIFICACIN
Son medios que pueden tener las mismas caractersticas
que los diferenciales tanto, nos van a servir para identificar
el crecimineto y caractersticas de algn tipo de
microorganismo.
Tambin podra corresponder a medios generales ms o
menos enriquecidos conalgn componente como, por
ejemplo, peptona, urea, glucosa, etc., hecho que nos va a
servir para visualizar el tipo de metabolismo microbiano,
por ejemplo:
El caldo peptonado para saber si el microorganismo es indol
+.
El medio urea para la ureasa +.
El caldo glucosado para saber la fermentacin de la
glucosa.
Este tipo de pruebas permite clasificar taxonomicamente el
MRVP (CALDO GLUCOSADO)
Permite investigar que ruta metablica ha

utilizado el microorganismo para consumir la
glucosa.
Si utiliza la va de fermentacin de los cidos el
pH resultante es menor de 4.4, y el
microorganismo ser Rojo de metilo (+) el cual
se va a evidenciar por el agregado del indicador
rojo de metilo y dar un color rojo (+) y
amarillo anaranjado (-).
Los microorganismos que utilizan la va de la
acetoina sern Voges Proskauer (+) y se
evidencian por un color rojo al cabo de los 10
minutos despus de agregar el KOH y el alfanaftol.
INDOL
La formacin de indol a partir

del triptofano se indica por un
color rojo despus del agregado
del reactivo de Kovac.
El tubo del la izquierda es
negativo.
un halo de color rojo lo que
indica la presencia de Indol.
UTILIZACION DE LA GLUCOSA
Tres tubos con caldo y con
tubos de Durham.
El tubo de la izquierda muestra
formacin de cido a partir de
glucosa (amarillo) y formacin
de gas..
El tubo del centro muestra
formacin de cido a partir de
glucosa (amarillo).
El tubo de la derecha es
negativo (rojo).
AGAR UREA
un color rojo, lo que indica una
reaccin positiva.
El tubo de la izquierda no
presenta viraje de color
AGAR CITRATO DE SIMMONS
El tubo de arriba demuestra un

color verde y ausencia de
crecimiento.
El tubo de abajo muestra un
color azul, lo que indica una
reaccin positiva.
AGAR KIA (KLIGER)
Muestra una serie de reacciones.

Pico de color amarillo indica
fermentacin de lactosa.
Fondo de color amarillo indica
fermentacin de glucosa.
Ruptura del agar y/o burbuja, indica
formacin de CO2.
Presencia de un color negro indica
produccin de H2S.
El pico rojo indica que no hay
fermentacin de lactosa.
El Pico rojo y fondo rojo indica que no
hay fermentacin de glucosa ni lactosa.

4. MEDIOS PARA MANTENIMIENTO DE CEPAS.
Son medios que suelen tener los nutrientes necesarios para
mantener a las cepas vivas durante perodos de tiempo
relativamente
largos
mantenindose
tales
medios
generalmente a temperaturas lo suficientemente bajas en
cada caso como para impedir su crecimiento. Ejemplo,
Leche descremada que congelada se utiliza a menudo para
mantener cepas durante meses.
MEDIOS DE CULTIVO SEGN

LA COMPOSICION QUE PRESENTEN
1. Medios naturales.
2. Medios semisintticos.
3. Medios sintticos.
4. Medios complejos.
POR SU COMPOSICIN QUE

PRESENTAN
2. MEDIOS SEMISINTETICOS
Son medios donde parte de su composicin
corresponde a extractos naturales como
levadura, malta, patata, sangre, leche, etc.,
a los que se aaden constituyentes
sintticos o qumicamente definidos para el
crecimiento bacteriano.

PRESENTAN
1. MEDIOS NATURALES
Son aquellos cuyos componentes orgnicos e
inorgnicos se encuentran en la naturaleza, se suelen
preparar artesanalmente y, en general, pueden estar
constituidos por ciertos tejidos, lquidos orgnicos,
etc., por ejemplo: la leche, que constituye un medio
natural de conservacin y cultivo favorable para
numerosas bacterias. Se suele utilizar en forma de
leche simple descremada, leche tornasolada y leche
con azul de metileno. Otros medios naturales son el
huevo entero, clara o la yema, o incluso la patata, que
es ampliamente utilizada en bacteriologa para el
aislamiento de muchos hongos.

PRESENTAN
3. MEDIOS SINTETICOS
Corresponden a estructuras sintticas ms o menos puras y
qumicamente definidas, que estn o pueden estar disueltas
en agua destilada en proporciones determinadas de forma
que se obtenga una solucin adecuada para permitir el
crecimiento de microorganismo que se desee.
Estos medios sintticos son los ms utilizados en
bacteriologa y, en general. Su uso puede ser para
aislamiento, identificacin, crecimiento, determinacin,
ensayo, mantenimiento, etc. Siempre debern contener en
su composicin los siguientes elementos:
Una fuente de Carbono o azcar.
Una fuente de nitrgeno en forma inorgnica como iones NO +4
3, NH , o en forma orgnica, como peptona, aminocidos,
aminas, etc.
Compuestos minerales, y entre ellos, oligoelementos.

PRESENTAN
4. MEDIOS COMPLEJOS
Son los primeros que se utilizaron en bacteriologa, aunque
en la actualidad su uso est ms restringido. Sin embargo,
en parasitologa y virologa se utilizan habitualmente. Se
preparan de forma compleja a partir de tejidos animales y
ms raramente de vegetales. Su composicin no est
exactamente definida como sucede en los medios
sintticos, es decir, no es rigurosamente constante, y sus
materias primas suelen ser carne de msculo, de hgado,
de corazn, clara o yema de huevo, azcares, peptonas,
etc.
Medio de Lowenstein Jenssen.
Infusin cerebro corazn (BHI)
MEDIO LOWENSTEIN JENSSEN

1. COMPOSICION
Fosfato monopotsico
4.0 g
Sulfato de magnesio 0.4 g
Citrato de magnesio 1.0 g
Asparragina
6.0 g
Glicerol
20.0 g
Agua destilada
1000 ml
2. PREPARACION
Disolver los ingredientes y hervir durante 2 horas.
Luego aadir 50 g de almidn de papa.
Cascar 5 huevos en condiciones aspticas en un
matraz y con ayuda de perlas de vidrio.
Agregar 50 ml de verde malaquita en solucin al 2%
Distribuir en condiciones aspticas en tubos con
tapa de rosca y dejar solidificar.
3. FINALIDAD
Permitir el crecimiento del Mycobacterium.
INFUSION CEREBRO CORAZON
1. COMPOSICION
Infusin cerebro de ternera 20.0 g
Infusin corazn de res 25.0 g
Peptonas
10.0 g
Fosfato disdico
2.5 g
Glucosa
2.0 g
Cloruro de sodio
5.0 g
Agua destilada
1000 ml
2. FINALIDAD
Permite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles

de cultivar, en l los grmenes mantienen su virulencia , antigenicidad
y otras caractersticas serolgicas.
AGAR NUTRITIVO
1. COMPOSICION
Peptona
17.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Cloruro de sodio
5.0 g
Agar - Agar 12.5 g
Agua destilada1000 ml
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energtico:
B. Requerimiento no energtico
C. Segn su proporcin en agua
D. Segn su uso o utilizacin
E. Segn la composicin que presenta
F. Segn su presentacin
AGAR VERDE BRILLANTE

1. COMPOSICION
Extracto de levadura
3.0 g
Peptona o polipeptona 10.0 g
Lactosa
10.0 g
Sacarosa
10.0 g
Cloruro de sodio
5.0 g
Rojo fenol
0.08 g
Verde brillante
0.0125 g
Agar - Agar 20.0 g

AGAR MAC CONKEY

1. COMPOSICION
Peptona de caseina
17.0 g
Peptona de carne
3.0 g
Lactosa
10.0 g
Sales biliares
1.5 g
Cloruro de sodio
5.0 g
Rojo neutro 0.03 g

Cristal violeta 0.001 g
Agar - Agar 12.5 g

AGAR MAC CONKEY
TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a
que el microorganismo produce grandes cantidades de cido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeas y
transparentes.
AGAR TCBS
1. COMPOSICION
Peptona de caseina
5.0 g
Citrato de sodio
10.0 g
Peptona de carne
5.0 Tiosulfato de sodio
10.0 g
Bilis de buey desecada 5.0 Colato de sodio
3.0
Sacarosa
20.0 Citrato hierro (III)
1.0
Cloruro de sodio
10.0 Azul de timol
0.04
Agar-agar
14.0 Azul de Bromotimol
0.04
AGAR TCBS
Las colonias amarillas, se
deben a la utilizacin del
citrato y a la formacin de
cido por la utilizacin de la
sacarosa del medio.
Vibrio Cholerae.
V. Algynolyticus
V. Cincinatiensis
V.fluvialis
V. Furnisii
V. metsnichnikovii
AGAR TCBS (pH del medio 8.6 +/- 0.1)
El pH alcalino inhibe notablemente a las enterobacterias.
AGAR TCBS
Las colonias gris verdosa
semitranslcida indica que el
microorganismos no utiliza la
sacarosa.
Vibrio parahaemolyticus
V. Mimicus.
V. Damsela
V. hollisae
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

1. COMPOSICION
Peptona de caseina
Lactosa
5
Sacarosa
5
Fosfato dipotsico
10.0g
Eosina amarilla
0.3 g
Azul de metileno 0.065
Agar-agar
13.5
2

Agar Eosina Azul de

Los colorantes de Eosina y azul de
metileno inhiben
a las bacterias(EMB) de
Metileno
Grampositivas
y
a
las
Gramnegativas exigentes. Tambin
Levine
se combinan precipitando
a pH
cido, actuando como indicadores
de produccin de cidos.
Los
fermentadores
fuertes
de
lactosa: Escherichia coli, producen
colonias color negro verdoso con
brillo metlico. El brillo metlico
indica una fuerte produccin de
cido con una cada de pH a 4.5 o
menos.
Los productores dbiles de cidos,
producen
colonias
violeta,
Klebsiella, Enterobacter, Serratia,
Hafnia.
Los no fermentadores de lactosa,
forman
colonias
incoloras.
Salmonella,
Proteus..
Shigella,
AGAR SALMONELLA SHIGELLA

1. COMPOSICION
Extracto de carne
Proteosa peptona
Lactosa
10
Bilis de buey
8.5
Citrato de sodio
Tiosulfato de sodio
5.0 g
Citrato de fierro amoniacal
5
Verde brillante
0.0003
Rojo neutro
0.025
Agar-agar
13
8.5 Agua destilada
1000 ml
8.5

1.0 g
Agar Salmonella
Shigella
El agar SS es un medio altamente selectivo, que inhibe el desarrollo de la mayora de los
coliformes y permite el crecimiento de Salmonella y Shigella.
La alta concentracin de sales biliares y citrato de sodio inhibe a todas las bacterias
Grampositivas y muchas Gramnegativas, incluyendo a los coliformes.
La lactosa es el nico carbohidrato y el rojo neutro detecta la produccin de cido.
El tiosulfato de sodio es una fuente de S, permitiendo la deteccin del H 2S por el
precipitado negro formado con el citrato frrico.
Colonias incoloras, son no fermentadores de lactosa y H2S (-), Salmonella y Shigella.
Las Colonias fermentadoras de lactosa se colorean de rojo, Escherichia coli.
Colonias incoloras con centro negro, son no fermentadores de lactosa y H2S (+), Proteus,
Salmonella.
AGAR MANITOL SALADO ROJO FENOL
1. COMPOSICION
Extracto de carne 1.0 g
D-Manitol
10 g
Agar agar
15 g
Peptona
10.0
Rojo fenol
0.025 g
Cloruro de sodio 75 g
TRIPLE AZUCAR HIERRO

T.S.I.
A. INTRODUCCION
La configuracin del medio en pico de flauta (Pico y
Fondo) determina la existencia de 2 compartimientos
La
porcin
inclinada,
expuesta
al
oxgeno
atmosfrico es aerobia.
- La porcin inferior llamada fondo esta protegida del
aire y es relativamente anaerobia.
La porcin expuesta al oxigeno (INCLINADA), tiende a
tornarse alcalina por la descarboxilacin oxidativa de
protenas, y se desarrolla un pH alcalino y se vuelve
rojo.
En el fondo del tubo donde no hay oxgeno , la
degradacin proteica es mnima y se pueden
detectar incluso pequeas cantidades de cido por la
aparicin
de un
amarillo.
La produccin
decolor
H2S se
manifiesta por la produccin de un color negro.
La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio.

La acidez del medio se pone de manifiesto por un color amarillo y se representa por la letra A.
La alcalinidad del medio se pone de manifiesto por un color rojo y se representa por la letra K

T.S.I.
A/A Microorganismo fermentador de lactosa y glucosa
Estos microorganismos que degradan lactosa y glucosa producen
cantidades grandes cido por que la concentracin de lactosa es de
10/1 con respecto a la glucosa. Esta cantidad de cido es suficiente
para contrarrestar la reaccin alcalina producida por la degradacin
de las protenas. Dando un color amarillo en todo el medio.
CO2: Se observa resquebrajamiento del medio.
H2S: Se evidencia la produccin de H2S por un precipitado de color
negro.

T.S.I.
INTERPRETACION
K/K: Microorganismo no fermentador
Son incapaces de producir cido por fermentacin
de la glucosa o lactosa, no hay cambio en el
medio.
K/A Microorganismo no fermentador de

lactosa
El microorganismo es capaz de utilizar la glucosa
pero no a lactosa, por lo cual produce una
pequea cantidad de cido, ya que la
concentracin del medio es de 0.1% de glucosa,
por lo cual al comenzar a degradarse las
protenas del pico se comienza a liberar aminas lo
que da un color rojo en el pico. En el fondo del

T.S.I.
INTERPRETACION
K/K: Microorganismo no fermentador
Son incapaces de producir cido por fermentacin
de la glucosa o lactosa, no hay cambio en el
medio.
K/A Microorganismo no fermentador de
lactosa
El microorganismo es capaz de utilizar la glucosa
pero no a lactosa, por lo cual produce una
pequea cantidad de cido, ya que la
concentracin del medio es de 0.1% de glucosa,
por lo cual al comenzar a degradarse las
protenas del pico se comienza a liberar aminas lo
que
da un color rojo
en el pico.
En ely glucosa
fondo del
A/A Microorganismo
fermentador
de lactosa
tubo
la degradacinque
proteica
insuficiente
para cantidades grandes cido por que
Estos microorganismos
degradanes
lactosa
y glucosa producen
contrarrestar
se mantiene
la concentracineldecido
lactosaformado
es de 10/1y con
respecto a ladeglucosa. Esta cantidad de cido es
color
rojo.para contrarrestar la reaccin alcalina producida por la degradacin de las protenas.
suficiente
Dando un color amarillo en todo el medio.
CO2: Se observa resquebrajamiento del medio.
H2S: Se evidencia la produccin de H2S por un precipitado de color negro.

T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION
:
Lactosa:
Glucosa:
CO Gas:
2
H S:
2
AGAR LIA
1. COMPOSICION
Peptona
3.0 g
Extracto de levadura
3.0 g
Dextrosa
1.0 g
Lisina
10.0 g
Citrato amonio frrico 0.5g
Tiosulfato de sodio
0.04 g
Prpura de bromocresol 0.02g
Agar - Agar
15.0 g
Agua destilada
1000 ml

LISINA HIERRO AGAR

LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
DESCARBOXILACIO
NDESAMINACION
LISINA
H2S
CALDO PEPTONA
1. COMPOSICION
Peptona
10.0 g
Cloruro de sodio 9 g
INTRODUCCION:
El indol, un bencilpirrol, es uno de los productos de
degradacin metablica del aminocido triptofno. Las
bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de
hidrolizar y desaminar el triptofno con produccin de indol,
cido pirvico y amoniaco.
La prueba de indol esta basada en la formacin de un
complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo del pdimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del
reactivo de Kovac y Erlich. Debe emplearse un medio rico
en triptofno.
COMPOSICION:
REACTIVO DE KOVAC
Alcohol amlico o isoamlico puro
150 ml
p-dimetilaminobenzaldehido
10 g
HCl concentrado
50 ml
TECNICA:
Inocular el caldo peptonado e incubar a 37C por 24 horas.
Luego aadir 5 gotas del reactivo por la pared del tubo.
INTERPRETACION:
Positivo: El desarrollo de un color rojo fucsia en la interfase
del reactivo y el caldo, indica la presencia del indol.
INDOL
AGAR CITRATO SIMMONS

1. COMPOSICION
Citrato de sodio
Fosfato monoamnico
Cloruro de sodio
Sulfato de magnesio
2.0 g
1.0 g
5.0 g
0.2 g
Azul de bromotimol 0.08 g

Fosfato dipotsico
1.0 g
Agar - Agar
12.5 g
Agua destilada
1000 ml

Citrato de Simmons
C.S.
INTRODUCCION
El citrato de sodio es una sal del cido ctrico,
un compuesto simple que constituye uno de
los metabolitos del ciclo de Krebs . Algunas
bacterias pueden obtener energa por va
distinta de la de fermentacin de hidratos de
carbono, utilizando citrato como nica fuente
de carbono. La determinacin de esta
caracterstica importante para la identificacin
de muchas enterobacterias.
TECNICA
Tomar una colonia bien aislada de la superficie
de un medio e inocular en una sola ,estra en
el pico del agro citrato e incubar a 37C por 24
- 48 horas.
INTERPRETACION
El desarrollo de un color azul intenso en 24 a
48 horas indica una prueba positiva y revela
que el organismo en estudio ha sido capaz de
utilizar el citrato contenido en el medio, con la
formacin de productos alcalinos.
AGAR SIM
1. COMPOSICION
Peptona de caseina
20.0 g
Peptona de carne
6.6 g
Tiosulfato de sodio
0.2 g
Citrato hierro(III) amonio
0.2 g
Agar - agar
3.0 g
Agar S.I.M.
PRODUCCION DE H2S
Se evidencia la formacin de cido
sulfihidrico por la formacin de un
Este medio de cultivo permite comprobar la formacin de sulfuro, la produccin de
precipitado negro. Esto se logra
indol y observar la movilidad.
mediante las siguientes etapas:
Liberacin de sulfuro a partir del
tiosulfato por accin enzimtica de la
bacteria.
Acoplamiento del sulfuro (S-2) con el
ion hidrogeno (H+) para formar gas
H2S.
Deteccin del gas H2S mediante
sales de metales pesados como
hierro, logrando la forma de sulfuro
del hierro, que es un precipitado
negro.
MOVILIDAD
Los medios para detectar movilidad
contienen concentraciones de agar de
0.4% o menos. A mayor concentracin
del gel es demasiado firme como para
permitir la diseminacin de los
organismos.
La Motilidad se pone de manifiesto por
la turbidez difusa del medio de cultivo
alrededor del canal de la picadura.
La no motilidad se caracteriza por el
crecimiento producido exclusivamente
a lo largo de dicho canal.
Agar S.I.M.
INDOL
Despus de agregar unas gotas del
reactivo de kovacs, si aparece un color
rojo-cereza dela capa del reactivo indica
la presencia de Indol.
CALDO MRVP
1. COMPOSICION
Peptona de caseina
7.0 g
Dextrosa
5.0 g
Fosfato dipotsico
5.0 g
Agua destilada
1000 ml
INTRODUCCION
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6.0
(amarillo) y 4.4. (rojo). El pH al cual el rojo de metilo detecta cido
es considerablemente menor que el de otros indicadore. A fin de
provocar un cambio de color, el organismo en estudio debe
producir grandes cantidades de cido a partir del sustrato
hidrocarbonado que emplea.
La prueba del R.M. detecta la produccin de cido y requiere de
organismos positivos que produzcan cidos fuertes (lctico,
frmico, actico) a partir de glucosa, por la va de la fermentacin
cida mixta.
COMPOSICION
CALDO MRVP:
ROJO DE METILO (Indicador)
Rojo de metilo 0.1 g
Etanol al 95% 300 ml
Agua destilada 200 ml.
TECNICA
Inocular el caldo MRVP e Incubar a 37C por 24 horas, agregar 5
gotas del reactivo rojo de metilo.
INTERPRETACION
Positivo: El desarrollo de un color rojo en el medio indica que la
produccin de cido es suficiente como para bajar el pH a 4.4.
Rojo de Metilo R.M.
Voges Proskauer V.P.

INTRODUCCION
El cido pirvico, componente fundamental formado en la degradacin
fermentativa de la glucosa, es metabolizado luego a travs de varias
vas, de acuerdo con los sistemas enzimticos que poseen las diferentes
bacterias. Una de dichas vas lleva a la produccin de acetona
(acetilmetilcarbinol), un subproducto de reaccin neutra de la va
Butilenglicol. Los organismos que producen acetona como principal
subproducto del metabolismo de la glucosa y forman cantidades
menores de cidos mixtos. En presencia de oxgeno atmosfrico e KOH al
40% , la acetoina se convierte en diacetilo y el alfa naftol acta como
catalizador para revelar un complejo de color rojo.
COMPOSICION
ALFA-NAFTOL
KOH
Alfa naftol
5g
KOH 40 g
Alcohol etlico absoluto 100 ml
Agua
100 ml
TECNICA
Inocular caldo MRVP e incubar a 37C por 24 horas. Luego aadir alfa
naftol e KOH al 40%. agitar el tubo y dejarlo en reposo por l0 minutos.
INTERPRETACION
I.M.V.I.C.
INDOL
ROJO DE METILO
VOGES PROSKAUER
CITRATO DE SIMMONS
I.M.V.I.C.
Cuando se realizan estas cuatro pruebas simultneamente,

constituyen las clasicas reacciones IMVIC.
Indol: la formacin de Indol a partir del triptfano se indica por un
color rojo despus del agregado del reactivo Kovacs.
Rojo de Metilo: la aparicin de un color rojo en el tuno con caldo
MRVP, despus de agregar unas gotas del reactivo rojo de metilo
indica un descenso del pH a 4.4 o menos, indicativo de la
presencia de fuertes fermentadores productores de cidos mixtos.
Voges Proskauer: la aparicin de un color rojo en el tubo con
caldo MRVP, despus de agregar alfa-naftol e KOH al 40%, indica
la presencia de acetona producida a partir del piruvato por la va
del butilenglicol.
Citrato de Simmons: el viraje del indicador azul de bromotimol a
un color azul alcalino indican que el microorganismo puede utilizar
el citrato de sodio como nica fuente de carbono.
I.M.V.I.C.
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
DIFERENCIACION
BIOQUIMICA
TSI
LIA
Indol
Rojo de Metilo
Voges Proskauer
INFUSION CEREBRO CORAZON (BHI)

1. COMPOSICION
Infusin cerebro de ternera 20.0 g
Fosfato disdico
Infusin corazn de res 25.0 g
Glucosa
2.0 g
Peptonas
10.0 g
Cloruro de sodio
5.0 g
2.5 g
AGAR SANGRE
1. COMPOSICION
Peptona de caseina
17.0 g
Peptona de carne
3.0 g
Lactosa
10.0 g
Sales biliares
1.5 g
Cloruro de sodio
5.0 g
Rojo neutro 0.03 g

Agar - Agar 12.5 g

AGAR CHOCOLATE
1. COMPOSICION
Peptona de caseina
17.0 g
Peptona de carne
3.0 g
Lactosa
10.0 g
Sales biliares
1.5 g
Cloruro de sodio
5.0 g
Rojo neutro 0.03 g

Agar - Agar 12.5 g

AGAR SABAURAUD
1. COMPOSICION
Peptona
10.0 g
Dextrosa
40.0 g
Agar - Agar 12.5 g
Agar Xilosa Lisina

Agar XLD con colonias de especies de
Desoxicolato XLD
Enterobacterias fermentadoras de
lactosa.
Los hidratos de carbono son: Xilosa,
Lactosa y Sacarosa.
El indicador es el rojo fenol.
Las colonias que fermentan uno o
ms de estos hidratos de carbono
producen cido, son de color amarillo
claro, debido a que hacen virar el
color del agar adyacente del rosa al
amarillo.
Los
microorganismos
como
Escherichia
coli,
Klebsiella
y
Enterobacter pueden utilizar ms de
un hidrato de carbono y forman
colonias color amarillo brillante.

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MEDIOS DE

Entre los requerimientos energticos de los

Existen muchos tipos de peptonas y

La caseina corresponde a una peptona

Entre los requerimientos no energticos de los

Agar TSI o KIA

AGAR MAC CONKEY

AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

PRINCIPALES TIPOS DE MEDIOS

Cultivo mixto que demuestra la

Cultivo mixto que demuestra la

AGAR MUELLER HINTON

La formacin de indol a partir

Tubo con medio para motilidad

O-F (Hugh Leifson)

Utilizacin oxidativa de la glucosa.

Son medios slidos que ocupan

POR SU USO O UTILIZACIN

POR SU USO O UTILIZACIN

POR SU USO O UTILIZACIN

POR SU USO O UTILIZACIN

POR SU USO O UTILIZACIN

MRVP (CALDO GLUCOSADO)

Permite investigar que ruta metablica ha

La formacin de indol a partir

AGAR CITRATO DE SIMMONS

El tubo de arriba demuestra un

AGAR KIA (KLIGER)

Muestra una serie de reacciones.

POR SU USO O UTILIZACIN

MEDIOS DE CULTIVO SEGN

POR SU COMPOSICIN QUE

POR SU COMPOSICIN QUE

POR SU COMPOSICIN QUE

POR SU COMPOSICIN QUE

MEDIO LOWENSTEIN JENSSEN

INFUSION CEREBRO CORAZON

Permite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles

AGAR VERDE BRILLANTE

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

AGAR MAC CONKEY

Rojo neutro 0.03 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

AGAR MAC CONKEY

AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

Agar Eosina Azul de

AGAR SALMONELLA SHIGELLA

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

AGAR MANITOL SALADO ROJO FENOL

TRIPLE AZUCAR HIERRO

La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio.

TRIPLE AZUCAR HIERRO

TRIPLE AZUCAR HIERRO

K/A Microorganismo no fermentador de

TRIPLE AZUCAR HIERRO

TRIPLE AZUCAR HIERRO

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

LISINA HIERRO AGAR

AGAR CITRATO SIMMONS

Azul de bromotimol 0.08 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIO

Rojo de Metilo R.M.