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FACULDADE DE CIENCIAS BIOLOGICAS E DA SAUDE

Engenharia Qumica

Validao de mtodo para determinao

de cotinina
em urina por cromatografia lquida de alta
eficincia
EQU107- Mtodos e Analises Instrumentais
Professora: Ligia Vieira
Alunos:
Carolina Ladeira
Fernanda Barreto
Gabryela Nardy
Kamila Lacerda
Mariana Tito Teixeira

1. Introduo 3

1. Introduo
CROMATOGRAFIA:

SEPARAAO

IDENTIFICAAO

QUANTIFICAAO

Slide do esquema de Carol

1. Introduo 5

HPLC (Cromatografia
liquida de alta eficincia)

1. Introduo 6

Umas das maiores

causa de morte no
mundo

Cncer pulmonar

Danos a sade

Demanda por
analises
laboratoriais

1. Introduo 7

O consumo de tabaco representa a

segunda maior causa de mortes no mundo.

Estrutura da nicotina, um alcalide do tabaco extremamente

venenoso

1. Introduo 8

Grande parte da nicotina

absorvida biotransformada em
cotinina, seu principal metablito.

2. Objetivo

2. Objetivo
Validar um mtodo por CLAE precendida por
extrao lquido-lquido para mensurar os nveis de
cotinina na urina, com a finalidade de monitorar a
exposio ao tabaco, incluindo a exposio
ambiental.

3. Materiais e Mtodos 10

3. Materiais e Mtodos:
Cotinina ,

Nicotina,

2-fenilimidazol

Sigma-Aldfrich

3. Materiais e Mtodos 11

Hidroxido de sodio ,
NaOH
Diclorometano ,
H2CCl2
Metanol
H3C-OH
Acetonitrila
CH3CN
Acido Citrico
C6 H8 O 7
Trietilamina
N(CH2CH3)3
Acetato de sodio
( CH3COONa )

Merck

3. Materiais e Mtodos 12

Parmetros cromatogrficos
Fase mvel: Agua Milli-Q
pH: 4,4 com acido actico

3. Materiais e Mtodos 13

Procedimentos de extrao
Foram pipetados amostra de urina centrifugada. Posteriormente
adicionado de hidrxido de sdio , padro interno e diclorometano.
Posteriormente esta soluo sofreu agitao em um homogeneizador e
centrifugada . Aps a fase orgnica foi transferida para um frasco
evaporador e colocados em termobloco, sob corrente de nitrognio e
temperatura ambiente, at secura. A seguir o resduo foi reconstitudo com
com a fase mvel e injetado na CLAE.

3. Materiais e Mtodos 14

Validao analitica,
Limite de
deteco

Linearidade

Exatido

Preciso
inter-ensaio

Estabilidade

4. resultados e discurses15

4. Resultados:

Os 3 GRAFICOs:

4. resultados e discurses16

Tabela

4. resultados e discurses17

4.1- Discusses

Devido meia-vida, a estabilidade e o fato de ser o

metabolito mais abundante, tornam a cotinina o
biomarcador mais adequado para determinar a
exposio do tabaco.

4. resultados e discurses18

A CLAE exige um pr-tratamento das amostras

por extrao liquido-liquido ou extrao em fase
solida. Devido ao menor e a boa qualidade dos
resultados obtidos com extrao liquido-liquido,
foi empregado diclorometano como solvente de
extrao.

5. Concluso
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5. Concluso
Conclui-se que este trabalho apresentou um
metodo sensicel e especifico para a

determinao de cotinina em urina por CLAE

precedida da extrao liquido-liquido.

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OBRIGADO !