MICROBIOLOGA

MICROBIOLOGA
Caractersticas anatmicas de clulas
procariotas y eucariotas

Nutricin bacteriana.

Estructurainterna
internade
declulas
clulasmicrobianas
microbianas
Estructura

Diagrama de un procariota

Diagrama de un eucariota

Micrografa electrnica de un
procariota (1m dimetro)

Micrografa electrnica de un eucariota

(clula animal; 25m dimetro)

Formascelulares
celularesrepresentativas
representativasde
dediferentes
diferentes
Formas
morfologasde
deprocariotas
procariotas
morfologas
Coco:Thiocapsa
Thiocapsaroseopersicina
roseopersicina
Coco:

Bacilo:Desulfomonas
Desulfomonasacetoxidans
acetoxidans
Bacilo:
Espirilo:Rhodospirillum
Rhodospirillumrubrum
rubrum
Espirilo:
Espiroqueta:Spirochaeta
Spirochaetastenostrepta
stenostrepta
Espiroqueta:
Organismocon
conyemas
yemasyyapndices:
apndices:
Organismo
Rhodomicrobiumvanielii
vanielii
Rhodomicrobium
OrganismoFilamentoso:
Filamentoso:
Organismo
Chloroflexusaurantiacus
aurantiacus
Chloroflexus

Algunasagrupaciones
agrupacionescaractersticas
caractersticas de
deprocariotas
procariotas
Algunas
Cocosen
encadena:
cadena:Streptococcus
Streptococcus
Cocos

Cocosque
queforman
formanracimos:
racimos:
Cocos
Staphylococcus
Staphylococcus

Bastonesen
encadena:
cadena:
Bastones
Streptobacillus
Streptobacillus

Qucomponentes
componentes mnimos
mnimosdebe
debe
Qu
contener una
unaclula
clula bacteriana
bacteriana
contener
para ser
ser funcional
funcional ??
para
DNA

Membrana

Pared

Estructuradel
delDNA
DNAen
enprocariotas
procariotas
Estructura

El cromosoma procaritico no tiene membrana que lo separe del resto de la clula.

Es una molcula circular. En E coli tiene 4.700 kilopares de bases (4,7 millones de pares de
bases).
Est superenrollado, con forma compacta.
Tiende a agregarse en el interior de la clula (nucleoide)

Micrografa electrnica de una

seccin fina de E. coli
Igual, pero con el nucleoide
coloreado

DNA bicatenario de E. coli contiene 50 dominios

superenrollados, estabilizados por la unin a
protenas especficas

Los procariontes son organismos haploides, es decir que tienen

una sola copia del cromosoma por clula.

Diagrama de
dela
laestructura
estructura de
de la
lamembrana
membrana
Diagrama
plasmtica
plasmtica

Las protenas intrnsecas poseen una zona muy hidrofbica que

atraviesa la bicapa lipdica

Funcionesde
de la
lamembrana
membrana citoplasmtica
citoplasmtica
Funciones
Barrera de permeabilidad: impide el paso libre de compuestos polares. Compuestos
pequeos no polares y sustancias hidrofbicas atraviesan libremente la membrana
Cadena de transporte de electrones y componentes de la maquinaria de sntesis
de ATP
Transporte de sustancias: a travs de protenas transportadoras:

Antiportadores: Transportan una en un

sentido y otra en sentido opuesto

Simportadores: Transportan dos

sustancias en la misma direccin

Uniportadores: Transportan una sustancia de un lado al otro

Existendos
dostipos
tiposde
detransporte
transporteque
queconsumen
consumenenerga
energa
Existen
Transporte activo: La sustancia se transporta sin modificacin alguna. Azcares,
aminocidos, cidos orgnicos, sulfato, fosfato, potasio etc. se transportan por esta va
Translocacin de grupo: La sustancia que se transporta se modifica qumicamente. Sistema
fosfotransferasa . La sustancia se fosforila durante el transporte. Glucosa, manosa, fructosa,
N-acetil glucosamina, -glucsidos se transportan as

El fosfato se transfiere desde el PEP hasta la Enz IIc que es la

verdadera responsable de la fosforilacin y del transporte
En este proceso la energa se consume para fosforilar el azcar

Estructura de
de las
lasparedes
paredesbacterianas
bacterianas
Estructura

Gram positivas

Micrografa electrnica de Arthrobacter

crystallopoietes (G. positivo)

Gram negativas

Micrografa electrnica de Leucothrix

mucor (G. negativo)

Bacterias Gram
Gramnegativas
negativas
Bacterias
Capa externa de la pared

La capa externa de la pared de las Gram negativas contiene lipopolisacrido (LPS) que
asociado a varias protenas forma la mitad externa.
La mitad interna contiene lipoprotenas que sirven de anclaje entre la membrana externa y el
peptidoglicano

BacteriasGram
Gram positivas
positivas
Bacterias
El cido teicoico es un polmero de ribitol fosfato que atraviesa la pared de
las Gram positivas y les confiere carga neta negativa

Quotros
otroscomponentes
componentesse
se pueden
pueden agregar
agregaraaesa
esa
Qu
clulamnima
mnima??
clula
Internos

Externos

Flagelos
Fimbrias

Endosporas.
Vacuolas de gas
PHB

Pilis
C

Cpsulas

Materiales
de reserva

glucgeno

grnulos de S

Fe

xidos de hierro,
magnetosomas

polifosfatos

Flagelosyymovilidad
movilidad
Flagelos
Los flagelos son apndices largos y finos que estn fijos a la clula por un extremo.
Pueden tener distribucin polar: en uno o ambos extremos.
A veces de un extremo sale un penacho de flagelos (lofotrica).
En la distribucin peritrica: se insertan alrededor de la clula.
La forma es helicoidal.
Est compuesto de flagelina.

Microscopa de campo
oscuro de bacilos con
penachos flagelares

Micrografa de contraste
de fase de Rhodospirillum
photometricum

a) Peritrico
b) Polar
c) Lofotrico

Estructuradel
del flagelo
flagelo yysu
suunin
uninaala
lapared
paredyymembrana
membrana
Estructura
celularesde
de una
unabacteria
bacteriaGram
Gram negativa
negativa
celulares

Anillo L insertado en la capa de LPS

Anillo P insertado en el peptidoglicano
Anillos S-M insertado en la membrana plasmtica
Protenas Mot gobiernan el motor flagelar, provocando la
rotacin del filamento
Protenas Fli protenas estructurales y regulatorias

Estructurasde
dela
lasuperficie
superficiebacteriana
bacteriana
Estructuras
Fimbrias y pilis

Contacto directo de dos bacterias en

conjugacin a travs del pili sexual
Micrografa electrnica de una clula
en divisin de Salmonella typhi

Las fimbrias favorecen la fijacin a tejidos animales (patgenos) y

formacin de pelculas (fijacin a lquidos)
Los pilis son receptores para virus.
El pili sexual interviene en la transferencia de material gentico

Estructurasde
dela
lasuperficie
superficiebacteriana
bacteriana
Estructuras
Cpsulas bacterianas

Tincin negativa con tinta china de

una cpsula de Acinetobacter sp

Microfotografa electrnica de un corte fino de

Rhizobium trifolii

Confiere mayor resistencia a fagocitosis y a la desecacin

Participa en la adherencia de las bacterias a superficies

Endosporasbacterianas
bacterianas
Endosporas
Las endosporas son clulas diferenciadas extremadamente resistentes al calor, a las
radiaciones y a muchos compuestos qumicos y son, adems, refringentes al
microscopio ptico
Las bacterias que forman esporas se encuentran habitualmente en el suelo
Tiene una estructura muy compleja
Capa externa o exosporium (proteica)
Cubiertas de la espora (proteicas)
Corteza (peptidoglicano)
Ncleo o protoplasto de la espora (estructura similar a la clula vegetativa)
Acido dipicolnico es exclusivo de la espora, se localiza en el ncleo. Se une al calcio para
formar dipicolinato clcico

Espora terminal

Espora subterminal

Espora central

Estructurade
dela
laendospora
endospora
Estructura
Microscopa electrnica de una espora bacteriana.

Formacin de esporas dentro de clulas

de B.megaterium

Espora libre madura

Inclusionescelulares
celulares
Inclusiones

Microfotografa de campo claro de Chromatium sp

conteniendo grnulos de azufre

Microfotografa electrnica de Rhodospirillum sp

con grnulos de PHB

Microfotografa electrnica de Aquaspirillum magnetotacticum con

partculas de Fe3O4 (magnetita) llamadas magnetosomas

Nutricinyyalgunos
algunosfactores
factoresque
quemodifican
modificanel
el
Nutricin
desarrollode
delos
losmicroorganismos
microorganismos
desarrollo
Las reacciones catablicas suministran
la energa necesaria para las funciones
celulares.
Las reacciones anablicas (biosntesis)
llevan a cabo la sntesis de componentes
celulares a partir de nutrientes.
En el anabolismo: los nutrientes del
medio exterior son convertidos en
componentes celulares.
En el catabolismo: las fuentes de
energa del medio, entre otras cosas,
son convertidas en productos de
desecho.

Clasificacin de
de los
los medios
medios de
de cultivo
cultivo
Clasificacin
Segn su composicin

Medios qumicamente definidos: se conoce la composicin qumica exacta

Medios indefinidos o complejos: contienen productos comercialmente

disponibles cuya composicin exacta no se conoce. Se emplean: lisados de
casena (protena de la leche), de carne, de soja, de levadura

Clasificacin de
de los
los medios
medios de
de cultivo
cultivo
Clasificacin
Segn la diversidad de microorganismos que puedan
desarrollar en l
Generales

Contiene componentes que permiten el crecimiento de la mayora

de los microorganismos
Contiene

algunos

componentes

que

favorecen

De enriquecimiento crecimiento de algunos microorganismos frente a otros

el

Los componentes han sido aadidos selectivamente para inhibir el

Selectivos crecimiento de ciertos microorganismos y no de otros

Es aquel al que se ha aadido un componente (generalmente un

Diferenciales colorante) que permite diferenciar entre distintas reacciones
qumicas que se producen durante el crecimiento

Algunosmedios
mediosde
decultivo
cultivoson
sonselectivos
selectivosyydiferenciales
diferenciales
Algunos
almismo
mismo tiempo
tiempo
al

El agar eosina-azul de metileno: se utiliza para el aislamiento de

enterobacterias Gram negativas.
El Azul de metileno y la eosina inhiben a las bacterias Gram
positivas. Adems responden a cambios de pH,
virando de incoloro a negro en medio cido.
Contiene lactosa y sacarosa para distinguir Salmonellas y
Shigellas que son lactosa y sacarosa negativas,
frente a flora acompaante que son lactosa
negativa pero sacarosa positiva (Proteus vulgaris,
Citrobacter, Aeromonas hydrophila)

Las bacterias fermentadoras de lactosa: entricas como E. coli acidifican el

medio y dan colonias negras con brillo verdoso metlico.

Klebsiella y Enterobacter producen menos cidos y dan colonias rosa con

centro oscuro.

Las bacterias no fermentadoras de lactosa y sacarosa (Salmonella y

Shigella) dan colonias incoloras y transparentes.

Requerimientos nutricionales
nutricionales yycapacidades
capacidades biosintticas
biosintticas
Requerimientos
Medio definido para
E. coli
Fosfato dipotsico
Fosfato monopotsico
Sulfato de amonio
Sulfato de magnesio
Cloruro de calcio
Glucosa
Trazas (Fe, Co, Mn,
Zn. Cu, Ni, Mo)
Agua destilada
pH 7.0

7g
2g
1g
0.1g
0.02g
6g
4-10g
c/u
1L

Medio complejo para

E. coli y
L. mesenteroides
Glucosa
Extracto de levadura
Peptona
Fosfato monopotsico
Agua destilada
pH 7.0

15g
5g
5g
2g
1L

Medio definido para

L. mesenteroides
Fosfato dipotsico
Fosfato monopotsico
Cloruro de amonio
Sulfato de magnesio
Glucosa
Acetato de sodio
Aminocidos (los 20)
(Alanina, arginina, asparragina,
aspartato, cisteina, glutamato,
glutamina, glicina, histidina,
isoleucina, leucina, lisina, metionina,
fenilalanina, prolina, serina, treonina,
triptofano, tirosina, valina)
Purinas y pirimidinas
(adenina, guanina, uracilo, xantina)
Vitaminas
(biotina, folato, nicotnico, piridoxal,
piridoxina, riboflavina, tiamina,
pantotenato, p_ABA
Trazas
(Fe, Co, Mn, Zn. Cu, Ni, Mo)
Agua destilada
pH 7.0

0.6g
0.6g
3g
0.1g
25g
20g
150g
c/u
10mg
c/u
0.01-1mg
c/u
4-10g
c/u
1L

Cul de
de las
las dos
dos bacterias
bacterias tiene
tiene mayor
mayor
Cul
capacidadbiosinttica??
biosinttica??
capacidad

Obviamente
E.
coli
tiene
menores
requerimientos nutricionales por tener mayor
capacidad biosinttica que L. mesenteroides

Clasificacinde
delos
losmicroorganismos
microorganismos
Clasificacin
Segn el modo de obtencin de energa y la naturaleza del
dador de electrones
Fototrofos: Utilizan la luz como fuente de energa
Fotoorganotrofos: Utilizan
dadores de electrones

compuestos

orgnicos

como

Fotolitotrofos: Utilizan compuestos inorgnicos como dadores

de electrones

Quimiotrofos: Utilizan compuestos qumicos como fuente de energa

Quimioorganotrofos: Utilizan compuestos orgnicos como
dadores de electrones
Quimiolitotrofos: Utilizan
dadores de electrones

compuestos

inorgnicos

como

Clasificacinde
delos
losmicroorganismos
microorganismos
Clasificacin
Segn la fuente de carbono utilizada
Autotrofos
Hetertrofos

Utilizan una fuente de carbono inorgnica

Utilizan una fuente de carbono orgnica

Combinando ambas cosas (fuente de energia y fuente carbono)

Fotoauttrofos

Quimioauttrofos

Fotohetertrofos

Quimiohetertrofos

TAXONOMA Y
EVOLUCIN
BACTERIANA

TEMARIO
Taxonoma y concepto de especie en procariotas
Taxonoma clsica, numrica y polifsica
Caracteres fenotpicos: clsicos y quimiotaxonmicos
Caracteres genotpicos: clsicos y modernos (fingerprinting)
Filogentica: clasificacin y relacin evolutiva
gen del ARNr 16S, rbol filogentico y definicin de dominos
Relacin entre taxonoma clsica y filogentica.
Diversidad bacteriana.
Identificacion de una cepa

TAXONOMA
Clasificacin
estructura los organismos en grupos (taxones) en base a su
similitud

Nomenclatura
asigna nombres a los taxones

Identificacin
determina a que taxones pertenece un organismo que se
aisla

Taxonoma

Caracterizacin exhaustiva
Aplicacin de teora y mtodo de clasificacin
Formacin de grupos taxonmicos (taxones)
Nomenclatura

Identificacin

Caracterizacin por nmero limitado de tests

adecuados al problema
Comparacin con spp conocidas
Asignacin a una sp
No identificado: estudio taxonmico

ESPECIE
unidad taxonmica bsica
grupo de cepas que tiene un alto grado de similitud
en sus propiedades y que difieren en forma
significativa de otros grupos de cepas
Cepa: poblacin de organismos que desciende de un
nico organismo

ESPECIE BACTERIANA

Concepto en revisin continua

Definicin metodolgica estndar:

- % de hibridacin ADN1-ADN2 > 70%
- Tm < 5C (estabilidad trmica del hbrido ADN 1ADN2)

Actualmente el criterio es POLIFSICO

(combinacin de caractersticas fenotpicas y
genmicas)

RANGOS TAXONOMICOS EN
CLASIFICACION BACTERIANA
Taxones:

Dominio
Phylum
Clase
Orden
Familia
Gnero
Especie
Sub-especie

importancia en estudios
clnicos y ecolgicos

Sistema binomial de nomenclatura

(Linneo)
Escherichia coli

Escherichia coli o E. coli

Dominio
Phylum
Clase
Orden
Familia
Genero
Especie
Bacteria
Proteobacteria
Gamma Proteobacteria
Zymobacteria
Enterobacteriales
Enterobacteriaceae
Escherichia
Escherichia coli

Categoras de clasificacion a nivel de subespecie (tipificacin)

Variedades o tipos
serovariedad o serotipo (antgenos distintos)
fagovariedad (tipificacin por fagos)
biovariedad (diferencias bioqumicas y fisiolgicas)
patovariedad (patogenicidad)
morfovariedad (diferencias morfolgicas)
genomovariedad (grupos con ADN similares)

Taxonoma bacteriana
CLSICA

caracteres fenotpicos (morfologa, nutricin, etc.)

algunos genotpicos: % G+C, hibridacin ADN-ADN

ponderacin de caracteres (llaves dicotmicas)

Caractersticas fenotpicas clsicas

de valor taxonmico
Morfologa: forma, tamao y tincin
Nutricin y fisiologa: fottrofo, quimitrofo,
aerobio o anaerobio, temperatura y pH ptimos,
fuentes alternativas de C, N y S

Movilidad: tipo y disposicin de flagelos

Otros: pigmentos, inclusiones celulares, sensibilidad
a antibiticos, patogenicidad

Caractersticas genotpicas clsicas

Contenido

G+C

% G+C =

G+C
x 100
G+C+A+T
determinacin por gradiente de CsCl, desnaturalizacin
trmica o cromatografa
Amplio rango en procariotas: 20 al 80%
Poca informacin para la caracterizacin taxonmica
criterio de exclusin: %GC > 3, probablemente especies diferentes
%GC > 10, probablemente gneros diferentes

 Hibridacin

ADN-ADN

- depende de la secuencia completa del genoma

- til en organismos estrechamente relacionados
- determinacin por:
% hibridacin de ADN1 - ADN2
Tm del hbrido
- es el criterio actual de definicin de especie

NUMRICA
Agrupacin de unidades taxonmicas o taxones
por mtodos numricos
Se basa en un gran nmero de caracteres
Cada carcter tiene igual peso
La similitud es funcin de la proporcin de
caracteres comunes

Clasificacin natural
Estructura los organismos en taxones
cuyos miembros reflejan tanto como sea
posible su naturaleza biolgica.
Es ventajosa si adems establece
relaciones evolutivas

POLIFSICA
Es la tendencia moderna. Consenso en la
integracin de distintos tipos de caracteres:
Fenotpicos:

- clsicos (morfologa, nutricin, etc)

- marcadores quimiotaxonmicos
- perfil de protenas totales y enzimas

Genotpicos: clsicos: % G+C

hibridacin DNA-DNA
nuevos:
Filogenticos:

fingerprinting (ej. perfiles moleculares

por restriccin o amplificacin de ADN)

basados en el gen del ARNr 16S

CARACTERES FENOTIPICOS
Marcadores quimiotaxonmicos
Caractersticas
- anlisis qumico con equipamiento especializado
- no son universales, muy tiles dentro de algunos
grupos
- alto grado de discriminacin
- presentes en distintas estructuras celulares

 Pared: peptidoglicanos en todas las bacterias salvo en

Planctomyces y Mycoplamas
Membrana externa Gram negativos: lipopolisacridos
Membrana citoplasmtica: acidos grasos (Fatty Acid
Methyl Ester), cidos miclicos en un grupo de bacterias
Gram positivas (Actinomicetes), pigmentos carotenoides
en bacterias fottrofas anoxignicas.
Cadena de transporte electrnico: citocromos, quinonas.
Sistema fotosinttico: bacterioclorofilas.
Citoplasma: poliaminas en metanognicas y Gram
negativas

CARACTERES FILOGENETICOS

Plantean hiptesis de evolucin (determina relaciones

de parentesco entre las especies)

Compara la secuencia de molculas (cronmetros

evolutivos) y establece la relacin entre ellas

Las secuencias de las molculas son el registro

histrico de la evolucin

ARBOL FILOGENETICO UNIVERSAL

Caractersticas diferenciales entre Bacteria, Archaea y Eukarya

Bacteria Archaea
Peptidoglicano
Lpidos
Ribosomas
tRNA iniciador
Intrones en tRNA
RNA polimerasa
Ribosoma sensible a:
Toxina diftrica
Cloranfenicol
Kanamicina
Estreptomicina

Eucarya

No

No

Enl. ester

Enl. eter

Enl. ester

70S

70S

80S

Formilmetionina
No

Metionina

Metionina

Una
(4 subun)

Varias
Tres
(8-12 subun) (12-14 subun)

No

Sensible

Sensible

Sensible

No

No

Por qu hay tanta diversidad entre

los Procariotas (Archaea y
Bacteria)?
son ancestrales
son ubicuos: ambientes extremos, parsitos o
simbiontes de Eukarya
representan la mayor diversidad de seres vivos,
mucha de la cual esta an inexplorada

Ejemplos de diversidad: estructura y

funcin
Pared: bacterias sin pared (Mycoplasmas, Thermoplasmas)
Membranas: diferente composicin (Mycobacterium)
Forma: Espiroquetas, bacterias con prostecas (Caulobacter),
formacion de hifas (Streptomyces)
Mecanismos de movimiento: bacterias deslizantes (Beggiatoa)
Diferenciacion celular: microcistos de Cyanobacterias,
comportamiento social (Myxobacterias)
Comportamiento frente a otras bacterias: predacin (Bdellovibrio)
Obtencin de energa independiente del trasporte de electrones
(fosforilacin oxidativa o fotosntesis) y la fermentacin,
ej.decarboxilasas en Oxalobacter formigenes

BIBLIOGRAFA
Brock, Biologa de los microorganismos, 8a, 9a o 10a
ed. (Evolucin microbiana y sistemtica, Diversidad de
Archaea y Bacteria)
Reviews
Rosell-Mora R & Amann R. (2001). The species concept for prokaryotes.
FEMS Microb Rev 25, 39-67.
Vandamme P. et al (1996). Polyphasic taxonomy, a consensus approach
to bacterial systematics. Microbiol Rev 60, 407-438.