Universidad de Carabobo

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Medicina Dr. Witremundo Torrealba
Departamento de Morfologa Normal y Patolgica

Tcnica de Estudio en
Morfologa Microscpica

USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO PTIC

Br .Contramaestre Roiman

Microscopio ptico
Este es un
instrumento
que nos sirve
para visualizar
estructuras
pequeas
cuyas
dimensiones
son inferiores
al lmite del
poder de
resolucin del
ojo humano

Partes del microscopio ptico

Parte Mecnica
BASE

BRAZO

PLATINA

TORNILLO MACROMTRICO.

TORNILLO MICROMTRICO.

Parte ptica
OCULARES

EL CONDENSADOR

REVOLVER
OBJETIVOS

FUENTE DE LUZ
ARTIFICIAL

LOS OBJETIVOS
En nmeros de 3 a 5 estn insertados en la parte inferior del
tubo, este sistema ptico proporciona una imagen real,
aumentada e invertida.
Los objetivos poseen un valor grabado 10x, 40x y 100x que
indica el aumento del objetivo.

EL CONDENSADOR
Es una combinacin de lentes ubicados por debajo
de la platina, que enfoca la luz sobre el objeto.
EL ESPEJO
Refleja los rayos de la fuente luminosa sobre el
objetivo.
LA FUENTE DE LUZ ARTIFICIAL
Esta colocada por debajo del espejo dentro de la
base del microscopio.

Propiedades del microscopio

AMPLIACIN de la imagen que se va a observar, se
recomienda comenzar por el objetivo de menor
aumento.
DEFINICIN es la nitidez que nos proporciona el uso
adecuado de los lentes.
RESOLUCIN cuanto mayor sea el poder de
resolucin del objetivo, ser ms clara la imagen y
aumentar la capacidad de poner en manifiesto
detalles estructurales.
PROFUNDIDAD DE FOCO es la capacidad de los
objetivos de permitir observar varios planos en una
misma posicin de enfoque.
DISTANCIA FOCAL es la disancia que existe entre
el lente
frontal del objetivo y el portaobjetos cuando la
OBJETIVO 10x de 5-6mm
imagen
est
enfocada.
OBJETIVO
40x de
0.5-1.5mm
OBJETIVO 100x de 0.15-0.20mm

Tipos de microscopio
CAMPO OSCURO Bacteriologa con preparaciones
hmedas, para detectar espiroquetas u otros
microorganismos con movilidad.
CONTRASTE DE FASE Permite el estudio de material
vivo no teido.
POLARIZACIN Sirve para identificar cuerpos
extraos, tales como partculas de talco, suturas y pelos
en los tejidos.
FLUORESCENCIA

INMUNOFLUORESCENCIA

ELECTRNICO Permite investigar detalles

ultraestructurales de las clulas y los tejidos al
ofrecernos un incremento al aumento y del poder de
resolucin, utiliza como fuente de luz un haz de
electrones.

Tipos de microscopio electrnico

ELECTRNICO DE
TRANSMISIN (MET)
Este tipo de microscopio nos
proporciona imgenes
ultraestructurales.

ELECTRNICO DE
BARRIDO (MEB)
Rastrea la superficie de la
muestra.

Pasos de la tcnica histolgica

para microscopa ptico
RECOLECCIN DE MATERIAL
Material muerto (necropsia) o material vivo (biopsia).
FIJACIN
Tiene como finalidad preservar las estructuras de la
clula.
AUTLISIS
Es el proceso por el cual, despus de la muerte, se
produce la autodigestin enzimtica celular, tras la
salida de contenido lissomico al citoplasma por
rotura de la membrana delimitante de estos
orgnulos.
PUTREFACCIN
Es el efecto ejercido por determinadas toxinas y
enzimas bacterianas sobre los tejidos.

Autlisis

Temperatura
ambiente

y
putrefacci
37C y 42C
n
IMAGEN HISTLOGICA REAL

Velocidad de autlisis
y putrefaccin

Es la que mostrara ese tejido cuando estaba vivo.

IMAGEN HISTLOGICA EQUIVALENTE
Obtenida despus de la manipulacin histolgica
(fijacin, inclusin, corte y coloracin).
PRINCIPIOS GENERALES DE LA FIJACIN
No existe un mtodo universal fijacin.
No todos los fijadores conservan indefinidamente el
tejido.
Un defecto de fijacin jams puede ser corregido.
Es intil un estudio histolgico sobre un material con
graves defectos de fijacin.

FIJACIN HISTOLGICA
Conserva la arquitectura y estructura de los tejidos y
clulas sin considerar los cambios moleculares sobre
sus componentes bioqumicos.
FIJACIN HISTOQUMICA
Es ms importante preservar la composicin
molecular y bioqumica de los tejidos.
CLASES DE AGENTES FIJADORES SEGN SU
MECANISMO DE ACTUACIN
Se clasifican en dos grupos:
Fijadores por mtodos fsicos: congelacin.
Fijadores por mtodos qumicos: agentes fijadores.

CARACTERSTICAS FUNDAMENTALES QUE DEBE

POSEER UN LQUIDO FIJADOR IDEAL
Capacidad para bloquear de inmediato la autlisis.
Efecto microbicida.
No provocar retracciones o distorsiones del tejido.
Alta velocidad de penetracin.
TIPOS DE FIJADORES
FIJADORES SIMPLES
Alcohol etlico.

Dicromato potsico.

Acetona.

cido pcrico.

cido actico.

Acetato de uranilo.

cido tricloro
actico.
cido crnico.
Cloruro de

Formol o formaldehido.

MEZCLAS FIJADORAS
Lquido de BOUIN (cido pcrico, formol y cido actico).
BOUIN Hollander (Acetato, cido pcrico, formol, agua
destilada y cido actico).
BOUIN Alcohlico (Duboscq - Brasil) (Alcohol etlico,
cido pcrico, formol y cido actico).
Fijador de Mller (Dicromoto potsico, sulfato sdico,
agua destilada).
Fijador Orth (Mller - formol).
Solucin de Zenker.
FIJACIN EN MICROSCOPIA ELECTRNICA
Glutaraldehdo.
Tetrxido de osmio.

Procesamiento del material

histolgico
Deshidratacin
Aclaramiento
Inclusin

Extraer toda el agua de los tejidos.

Consiste en eliminar el exceso de alcohol.

Consiste en sustituir con parafina todos los
espacios ocupados por el agua.

Confeccin de bloques de parafina

PARAFINA

Se saca la muestra del

procesador de tejidos.

Se llena el molde de
metal con parafina.

Bloque de parafina terminado

listo para el corte.

Orientacin de la muestra.

Corte del bloque de parafina

Obtencin de la tira de
parafina.

Se saca la tira de parafina

extendida de bao de
flotacin en una lmina
portaobjetos.

Se extiende la tira de parafina

en el bao de flotacin para
eliminar las arrugas del tejido.

Las lminas portaobjetos conteniendo las tiras de parafina

son introducidas en una estufa, para fijar los cortes a la
lmina. Son introducidas por un mnimo de quince minutos en
la estufa.

Coloracin
ALCOHOL

XILOL

XILOL

XILOL

ALCOHOL
Despus
de fijadas
las tiras de
parafina en
la estufa
se sacan y
se dejan
enfriar por
cinco
minutos y
luego se
procede a
la
coloracin
.

ALCOHOL

XILOL

EOSINA

ALCOHOL HEMATOXILINA

XILOL

ALCOHOL

TIPOS DE COLORANTES
cidos.
Bsicos.
Neutros.
Indiferentes.

ALCOHOL

Basofilia.
Segn su afinidad
Acidofilia.
Ortocromtica
Metacromtica

Mismo color.
Color diferente.

Coloracin vital
Intravital

Supravital

Clulas
parietales
con
citoplasma
eosinfilo
(teido de
rojo).

Clulas
principales con
citoplasma
basfilo (teido
de azul)

Preparaciones de cortes
para microscopa
electrnica
1) Tejidos de menor tamao.
2) Bloques ms pequeos.
3) El tejido tiene que ser lo ms fresco posible.
4) Procesamiento ms rpido.
5) Fijadores (formol, tetroxido de osmio y glutaraldehido).
6) Medio de inclusin: Resina epon.
7) Colorantes sales de metales pesados como el citrato
de plomo y uranio.
8) Mtodo de preparacin para los tejidos se utiliza la
criofractura (congelacin y fractura).

Mtodos de investigacin
histolgica
Existen dos mtodos de estudio:
Material muerto.
Material vivo.
Ventajas de material muerto
Permite la aplicacin de gran variedad de tcnicas.
Nos proporciona un material de estudio permanente para
la docencia e investigacin (preparaciones histolgicas).

Desventajas de material muerto

Puede producir artefactos.
Estos artefactos pueden ser causados por:
Muescas en las cuchillas (por falta de filo).
Precipitacin del fijador.
Restos de colorantes.
Autlisis.
Arrugas.
Retraccin de los tejidos.

Ventajas de material vivo

Nos da informacin directa sobre estructuras
vivas, se puede estudiar la fisiologa animal.
Se observan estructuras que con la muerte
desaparecen.
Desventajas de material vivo
No se obtienen preparaciones permanentes.
No se pueden aplicar muchas tcnicas de
estudios (se utilizan solo coloraciones
vitales).

Otros mtodos de estudio

histolgico
Citoqumica e histoqumica.
Inmunohistoqumica.
Histoautorradiografa.
Cultivo de tejido.
Microciruga.
Fraccionamiento celular.

UNIVERSIDAD DE CARABOBO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE MEDICINA WITREMUNDO TORREALBA
DEPARTAMENTO DE MORFOLOGIA NORMAL Y PATOLOGICA
MORFOLOGIA MICROSCOPICA

La Clula
Prof(a) Morella de Rolo
Marzo 2013

Agenda
Definicin de clula
Conocer los componentes celulares
Describir la organizacin general
Definir tejidos, rganos y sistemas
Composicin qumica
Tamao celular
Identificar al M.O. las diversas formas
celulares
Propiedades fisiolgicas de las clulas

Es la unidad estructural y funcional fundamental de

los seres vivos.
Membrana plasmtica
Protoplasma
Ncleo
Citoplasma

Clasificacin de los organismos y las clulas

Reino

Mneras

Organismos
representativ
o

Bacterias
Algas
Azules

Clasificacin
celular

Procariotas

Protista

Protozoos
Crisfitas

Hongos

vegetales

Animales

Hongos
Hongos
verdes

Algas verdes
Algas rojas y
pardas
Brioflas
Traquefila

Metazoos

Eucariotas

Las clulas se pueden dividir en dos grupos

EUCARIOTAS
Hombre,
multicelulares.
material gentico
concentrado en
el ncleo

PROCARIOTAS
Material genetico
disperso en el
Citoplasma
(NUCLEOIDE)
Bacterias, rickettsias

Diferencias entre las procariotas y eucariotas

C. Procariotas

C. Eucariotas

Envoltura nuclear

Ausente

Presente

ADN

Desnudo

Combinado con
protenas

Cromosomas

nico

Mltiples

Nuclolo

Ausentes

Presentes

Ribosomas

70S (50S+30S)

80S (60S+40S)

Endomembranas

Ausentes

Presentes

Mitocondrias

Enzimas
respiratorias y
fotosintticas en
la membrana
plasmtica

Presentes

Pared celular

No celulsica

Celulsica en las c.
vegetales

Exocitosis y
endocitosis

Ausente

Presente

Locomocin

Fibrilla nica
flagelo

Cilios y flagelos

CONSTITUCIN
Ncleo
Membrana
plasmtica

Citoplasma:
Organoides
Inclusiones
Citoesqueleto

CITOPLASMA
Organoides
Metablicamente activos
Desempean una funcin
especfica
Inclusiones
Acmulos transitorios
sustancias alimenticias,
productos inertes o depsitos
de sustancias (pigmentos
melanina, gotas lpidos)
Citoesqueleto
NO visible al MO
slo visible al ME
Elementos fibrilares
Microtbulos, microfilamentos
y filamentos Intermedios)

Organizacin general de una clula eucariota

Principal componente

Subcomponentes

Funcin

Membrana celular

Membrana plasmtica

Proteccin
Interaccin celular
Permeabilidad
Endo y Exocitosis

Ncleo

Cromosomas
Nuclolo

Genes
Sntesis de ribosomas

Citoplasma
Citosol

Enzimas solubles
Ribosomas

Glicolisis
Sntesis proteica

Citoesqueleto

Microtbulos
Microfilamentos

Forma y movilidad celular

Organoides
microtubulares

Centrosomas y Centrolos
Cuerpos basales y cilios

Divisin celular
Motilidad celular

Sistema de
Endomembranas

Membrana nuclear
R. Endoplsmico
Aparato de Golgi
Endosomas y lisosomas

Permeabilidad nuclear
Sntesis y procesamiento
Secrecin
Digestin

Organoides de Membrana

Mitocondrias
Peroxisomas

Sntesis de ATP
Proteccin

Inclusiones

Grnulos de glucgeno
Gotas de lpidos
Pigmentos de Melanina
Grnulos de Lipofuscina

Reserva Energtica
Deposito de Sustancias
Cuerpos residuales

Composicin Qumica de las Clulas

Inorgnicos
Agua 75-85%
95% en forma libre
5% ligada a las protenas
Minerales 2 3 %
Cl-, Na+ y K+
Mg+2
Ca+2
Fe
Vestigios:
Manganeso,
cobalto, yodo, selenio,
molibdeno y zinc

cobre,
nquel,

Composicin Qumica de las Clulas

Orgnicos
Hidratos de Carbono
Protenas
Lpidos
cidos Nucleicos

Protenas

Son cadenas de aminocidos ligados por uniones peptdicas

Pueden existir como solucin gel
Simple Fibrosas y globulares
Combinadas
Aminocidos
cido orgnico con un
Funciones
grupo amino (NH2), uno
Sntesis de ms protenas
carboxilo (COOH) y un Forman parte de las membranas
radical (R). Existen 20
celulares
aa diferentes
Matriz fundamental

Material gentico
Enzimas
Hormonas
Metabolismo celular

Lpidos
Compuestos insolubles en agua.
Triglicridos: fuente de reserva
Fosfolpidos: componente estructural
de las membranas biolgicas
Hidratos de carbono
Principal fuente de energa de las
clulas en forma de glucgeno y
glucosa.
Constituyentes estructurales de la
pared celular y de las sustancias
intercelulares

cidos Nucleicos
ADN
ARN

ADN doble hlice (ncleo)

ADN lineal (mitocondria)
ARN mensajero
ARN de transferencia
ARN ribosomal

Bases nitrogenadas
Un azcar:
ADN: Desorribosa
ARN: Ribosa

Formas y tamao de las clulas

1.-Presin que ejercen las
clulas vecinas
2.-Tensin superficial
3.-Rigidez de la
membrana celular
4.-Viscosidad del
citoplasma

Plana
Cbica
Prismtica
Esfrica
Estrellada
Fusiforme
Cilndricas
Caliciforme
LEY DEL VOLUMEN CELULAR
CONSTANTE
Piriforme
la en la masa total de un rgano se debe al nmero de clulas y
no al tamao de las clulas
HIPERPLASIA aumenta nmero celular
HIPERTROFIA aumenta tamao celular

Hoja parietal de la cpsula

de Bowman Rin Planas

Raspado Vaginal Planas

Hoja parietal de la cpsula
de Bowman Rin Planas

Tiroides Cbicas

TCP o TCD
Rin Cbicas

Leucocitos Esfrica

C. caliciforme

Prismtica

Clulas musculares lisas

Fusiforme

Clulas musculares estriadas esquelticas

Cilndrica

Motoneuronas
Mdula Espinal
Estrellada

Clulas de Purkinje Piriforme

Cerebelo

Neurona Piramidal
Cerebro

Eritrocito
Biconcava

POLIDRICAS
Hgado

Propiedades fisiolgicas de las clulas

Irritabilidad: Respuesta a estmulos
Conductividad: Onda de excitacin, sitio de estmulo,
cambio potencial elctrico, se propaga, se trasmite a
otras clulas
Contractilidad: Acortamiento de las clulas
Absorcin y asimilacin: Captar alimentos y sustancias
del ambiente, modificarlas y transformarlas
(metabolismo)
Secrecin: Utilizar sustancias absorbidas para sntesis
de nuevas sustancias que van a ser eliminadas

Propiedades fisiolgicas de las clulas

Excrecin: Eliminacin de sustancias que no se
necesitan o que su alta concentracin puede ser
nociva (urea, creatinina)
Respiracin: El O2 absorbido se usado para oxidar
sustancias alimenticias en su interior obteniendo
energa necesaria para funcionamiento
Crecimiento y reproduccin: Constante renovacin
de elementos estructurales de rganos y tejidos
Polaridad funcional: Polo Basal, Polo Apical.
En cel secretoras de protenas, acino pancretico,
citoplasma basal abundante RER y mitocondrias,
citoplasma apical Golgi muy desarrollado
supranuclear con grnulos de zimgeno

Resme
n
Tipos celulares procariotas y eucariotas
Constitucin celular, ncleo, membrana y

citoplasma (organoides, inclusiones y

citoesqueleto)
Composicin qumica (orgnicos e
inorgnicos)
Formas y tamao celular
Propiedades fisiolgicas de las clulas