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En la respiracin celular, el cido pirvico

formado
en
la
gluclisis
se
oxida
completamente a CO2 y agua en presencia de
oxgeno.
Se desarrolla en dos etapas sucesivas: el ciclo de
Krebs y la cadena respiratoria, asociada a la
fosforilacin oxidativa.
En las clulas eucariotas el ciclo de Krebs tiene
lugar en la matriz de la mitocondria en
presencia de oxgeno.
La membrana mitocondrial externa es permeable

La cadena respiratoria como se conoce al


flujo energtico que se da en las mitocondrias
( matriz, membranas y crestas); acontece en
las crestas mitocondriales.
All se encuentran las enzimas necesarias y
especficas que permiten el acoplamiento
energtico y la transferencia de electrones.
Para este proceso se necesita oxgeno en la
clula.

Despus de la gluclisis es que el cido pirvico


pasa desde el citoplasma a la matriz
mitocondrial. Luego se oxida liberando una
molcula de CO2 y se formando un grupo acilo
(CH3-COO).
En esta reaccin se forma una molcula de NADH.
Como en la gluclisis el producto final eran dos
molculas de cido pirvico, entonces, se
formarn dos de NADH por cada molcula de
glucosa.
Cada grupo acilo se une a un Coenzima A y se
forma acetilCoenzimaA. En este momento

ETAPAS DEL
CICLO DE
KREBS

Reaccin 1: Citrato sintasa (De


oxalacetato a citrato)
El sitio activo de la enzima, activa el acetil-CoA para hacerlo
afn a un centro carbonoso del oxalacetato. Como
consecuencia, el grupo tioster (CoA) se hidroliza, formando
as la molcula de citrato.

La reaccin es sumamente exergnica (G'=-31.4 kJ/mol),


motivo por el cual este paso es irreversible. El citrato
producido inhibe competitivamente la actividad de la
enzima, y la citrato sintasa puede ser perfectamente
regulada.
Este aspecto tiene una notable importancia biolgica, puesto
que permite una completa regulacin del ciclo de Krebs
completo, convirtiendo a la enzima en una especie de
marcapasos del ciclo.

Reaccin 2: Aconitasa (De


citrato a isocitrato)
La aconitasa cataliza la isomerizacin del citrato a
isocitrato, por la formacin de cis-aconitato.
La enzima cataliza tambin la reaccin inversa,
pero en el ciclo de Krebs tal reaccin es
unidireccional a causa de la ley de accin de
masas:
las concentraciones (en condiciones estndar) de
citrato (91%), del intermediario cis-aconitato (3%)
y de isocitrato (6%), empujan decididamente la
reaccin hacia la produccin de isocitrato.

En el sitio activo de la enzima est


presente un clster hierro-azufre
que, junto a algunos residuos de
aminocidos polares, liga el sustrato.
En concreto, la unin al sustrato se
asegura por la presencia de un resto
de serina, de arginina, de histidina y
de aspartato, que permiten slo la
unin estereospecifica del citrato
1R,2S, rechazando la forma opuesta.

Reaccin 3: Isocitrato
deshidrogenasa (De isocitrato
a oxoglutarato)
La isocitrato deshidrogenasa mitocondrial es una
enzima dependiente de la presencia de NAD+ y
de Mn2+ o Mg2+. Inicialmente, la enzima cataliza
la oxidacin del isocitrato a oxalsuccinato, lo que
genera una molcula de NADH a partir de NAD+.
Sucesivamente, la presencia de un in bivalente,
que forma un complejo con los oxgenos del
grupo carboxilo en posicin alfa, aumenta la
electronegatividad de esa regin molecular.

Esto genera una reorganizacin de los


electrones en la molcula, con la consiguiente
rotura de la unin entre el carbono en posicin
gamma y el grupo carboxilo adyacente.
De este modo se tiene una descarboxilacin,
es decir, la salida de una molcula de CO 2 que
conduce a la formacin de -cetoglutarato,
caracterizado por dos carboxilos en las
extremidades y una cetona en posicin alfa
con respecto de uno de los dos grupos
carboxilo.

Reaccin 4: -cetoglutarato
deshidrogenasa (De oxoglutarato
a Succinil-CoA)
Despus de la conversin del isocitrato en cetoglutarato se produce una segunda reaccin de
descarboxilacin oxidativa, que lleva a la formacin
de succinil CoA.
La descarboxilacin oxidativa del - cetoglutarato es
muy parecida a la del piruvato, otro -cetocido.
Ambas reacciones incluyen la descarboxilacin de un
-cetocido y la consiguiente produccin de una unin
tioster a alta energa con la coenzima A.

Los complejos que catalizan tales reacciones son


parecidos entre ellos.
La
-cetoglutarato
deshidrogenasa
(o,
correctamente, oxoglutarato deshidrogenasa),
compuesta de tres enzimas diferentes:

ms
est

* Subunidad E1: las dos cetoglutarato deshidrogenasas.


*Subunidad E2: la transuccinilasa. (La subunidad E1 y
E2 presentan una gran homologa con las de la piruvato
deshidrogenasa.)
* Subunidad E3: la dihidrolipoamida deshidrogenasa,
que es el mismo polipptido presente en el otro
complejo enzimtico.

Reaccin 5: Succinil-CoA sintetasa


(De Succinil-CoA a succinato)
El succinil-CoA es un tioster a alta energa (su G de hidrlisis
est en unos -33.5 kJ mol-1, parecido al del ATP que es de -30.5
kJ mol-1).
La citrato sintasa se sirve de un intermediario con tal unin a
alta energa para llevar a cabo la fusin entre una molcula con
dos tomos de carbono (acetil-CoA) y una con cuatro
(oxalacetato).
La enzima succinil-CoA sintetasa se sirve de tal energa para
fosforilar un nuclesido difosfato purinico como el GDP.
La energa procedente del tioster viene convertida en energa
ligada a una unin fosfato. El primer paso de la reaccin genera
un nuevo intermediario a alta energa, conocido como succinil
fosfato.

Sucesivamente, una histidina presente en el sitio


cataltico remueve el fosfato de la molcula
glucdica, generando el producto succinato y una
molcula de fosfohistidina, que dona velozmente el
fosfato a un nuclesido difosfato, recargndolo a
trifosfato.
Se trata del nico paso del ciclo de Krebs en el que
se produce una fosforilacin a nivel de sustrato.
El GTP est implicado principalmente en las rutas de
transduccin de seales, pero su papel en un
proceso energtico como el ciclo de Krebs es, en
cambio, esencialmente trasladar grupos fosfato
hacia el ATP, en una reaccin catalizada por la
enzima nuclesid difosfoquinasa.

Reaccin 6: Succinato
deshidrogenasa (De succinato a
fumarato)
La parte final del ciclo consiste en la reorganizacin de molculas a
cuatro tomos de carbono hasta la regeneracin del oxalacetato.
Para que eso sea posible, el grupo metilo presente en el succinato
tiene que convertirse en un carbonilo. Como ocurre en otras
rutas, por ejemplo en la beta oxidacin de los cidos grasos, tal
conversin ocurre mediante tres pasos:
una primera oxidacin, una hidratacin y una segunda oxidacin.
Estos tres pasos, adems de regenerar oxalacetato, permiten la
extraccin ulterior de energa mediante la formacin de FADH2 y
NADH.

La primera reaccin de oxidacin es catalizada por el


complejo enzimtico de la succinato deshidrogenasa, la
nica enzima del ciclo que tiene como aceptor de
hidrgeno al FAD en vez de al NAD+.
El FAD es enlazado de modo covalente a la enzima por un
residuo de histidina. La enzima se vale del FAD ya que la
energa asociada a la reaccin no es suficiente para
reducir el NAD+.
El complejo enzimtico tambin es el nico del ciclo que
pasa dentro de la membrana mitocondrial. Tal posicin se
debe a la implicacin de la enzima en la cadena de
transporte de los electrones.
Los electrones pasados sobre el FAD se introducen
directamente en la cadena gracias a la unin estable
entre la enzima y el cofactor mismo.

Reaccin 7: Fumarasa (De


fumarato a L-malato)
La fumarasa cataliza la adicin en trans de
un protn y un grupo OH- procedentes
de una molcula de agua. La hidratacin
del fumarato produce L-malato.

Reaccin 8: Malato
deshidrogenasa (De L-malato a
oxalacetato)
La ltima reaccin del ciclo de Krebs consiste en la
oxidacin del malato a oxalacetato.
La reaccin, catalizada por la malato deshidrogenasa,
utiliza otra molcula de NAD+ como aceptor de
hidrgeno,
produciendo
NADH.
La energa libre de Gibbs asociada con esta ltima
reaccin es decididamente positiva, a diferencia de las
otras del ciclo.
La actividad de la enzima es remolcada por el consumo
de oxalacetato por parte de la citrato sintasa, y de NADH
por parte de la cadena de transporte de electrones.

Generalidades del ciclo de


Krebs
El ciclo de Krebs, es la ruta central comn para la
degradacin de los restos acetilo (de 2 tomos de
C) que derivan de los glcidos, cidos grasos y
aminocidos.
Es una ruta universal, catalizada por un sistema
multienzimtico que acepta los grupos acetilo del
acetil-CoA como combustible, degradndolo hasta
CO2 y tomos de Hidrgeno, que son conducidos
hasta el O2 que se reduce para formar H2O (en la
cadena de transporte de electrones).

La oxidacin del piruvato a Ac-CoA es


catalizada
por
el
complejo
multienzimtico
de
la
piruvato
deshidrogenasa (PDH), el proceso que es
muy complicado, se resume en:
G= - Ac-CoA + NADH + H+ + CO2
Piruvato + NAD+ + CoA 8.0kcal/mol

Esta reaccin irreversible en tejidos


animales, no forma parte del ciclo de
Krebs,
pero
constituye
un
paso
obligatorio para la incorporacin de los
glcidos al ciclo.

El trabajo acoplado del ciclo del cido ctrico y la


cadena de transporte de electrones es la mayor
fuente de energa metablica.
El metabolismo aerobio del piruvato por el ciclo
del cido ctrico y la cadena de transporte de
electrones produce mucha mas energa que la
simple conversin aerobia del piruvato a lactato o
etanol.
En condiciones aerobicas, el piruvato sufre una
descarboxilacion oxidativa con la formacin de
AcCoA. El grupo acetilo del AcCoA es transferido
al oxaloacetato para dar citrato.

En reacciones subsecuentes, dos de los


tomos de Carbono del citrato se oxidan a
CO2 y el oxaloacetato es regenerado.
La reaccin neta de ciclo del cido ctrico
tambin produce tres molculas de NADH,
una de FADH2 y una molcula del compuesto
trifosfato de guanosina (GTP) altamente
energtico (en algunos organismos es
directamente ATP) por cada molcula de
AcCoA oxidada.
AcCoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi + H 2O

"CoASH + 3NADH + FADH2 + GTP +


2CO2 + 3H+

Las molculas de NADH y FADH2 son oxidadas en la


cadena de transporte de electrones con la formacin de
ATP en la fosforilacin oxidativa.
El ATP puede ser producido a partir del GTP va una
fosforilacin a nivel de sustrato, que es la transferencia de
un grupo fosforilo de un compuesto rico en energa como
el GTP, al ADP.
La conversin anaerbica de glucosa a lactato por la
gluclisis ocurre con un cambio en la energa libre
estndar de 30 kcal mol-1
D-glucosa + 2Pi + 2ADP

2lactato + 2ATP + 2H2O

La oxidacin completa de la glucosa a


bioxido de Carbono y agua por la
gluclisis, el ciclo del cido ctrico y la
cadena de transporte de electrones
ocurre con un cambio en la energa
libre estndar de 686 kcal mol-1, un
cambio de ms de 20 veces:
G= - 686kcalmol.
6CO2 + 6H2O C6H12O6 + 6O2

Alrededor del 40 % de la energa liberada por la


oxidacin de los alimentos es conservada en
forma de ATP.
Aproximadamente tres molculas de ATP son
producidas por cada molcula de NADH oxidada
a NAD+ y aproximadamente dos molculas de
ATP son producidas por cada molcula de FADH2
oxidada a FAD por la cadena de transporte de
electrones.
Un mximo de 38 molculas de ATP pueden ser
producidas por la oxidacin completa de la
glucosa.

Regulacin
Muchas de las enzimas del ciclo de Krebs son reguladas
por retroalimentacin negativa, por unin alostrica del
ATP, que es un producto de la va y un indicador del nivel
energtico de la clula.
Entre estas enzimas se incluye el complejo de la piruvato
deshidrogenasa que sintetiza el acetil-CoA necesario para
la primera reaccin del ciclo a partir de piruvato,
procedente de la glucolisis o del catabolismo de
aminocidos.
Tambin
las
enzimas
citrato
sintasa,
isocitrato
deshidrogenasa y -cetoglutarato deshidrogenasa, que
catalizan las tres primeras reacciones del ciclo de Krebs,
son inhibidas por altas concentraciones de ATP. Esta
regulacin frena este ciclo degradativo cuando el nivel
energtico de la clula es bueno.

Algunas enzimas son tambin reguladas


negativamente cuando el nivel de poder
reductor de la clula es elevado.
El mecanismo de esta inhibicin es una
inhibicin competitiva por producto (por
NADH) de las enzimas que emplean NAD+
como sustrato.
As se regulan, entre otros, los complejos
piruvato deshidrogenasa y citrato sintasa.
FWTFGRF.

Principales vas que convergen


en el ciclo de Krebs
La mayora de las vas catablicas convergen en el
ciclo de Krebs, como muestra el diagrama. Las
reacciones que forman intermediarios del ciclo se
conocen como reacciones anaplerticas.
El ciclo de Krebs contituye la segunda etapa del
catabolismo de carbohidratos. La glucolisis rompe
la glucosa (6 carbonos) generando dos molculas
de piruvato (3 carbonos). En eucariotas el piruvato
se desplaza al interior de la mitocondria (gracias a
un transportador especfico de membrana interna).
En la matriz mitocondrial produce acetil-CoA que
entra en el ciclo de Krebs.

En el catabolismo de protenas, los enlaces


peptdicos de las protenas son degradados
por accin de enzimas proteasas en el tracto
digestivo
liberando
sus
constituyentes
aminoacdicos. Estos aminocidos penetran
en las clulas, donde pueden ser empleados
para la sntesis de protenas o ser degradados
para producir energa en el ciclo de Krebs.
Para su entrada al ciclo deben eliminarse sus
grupos amino (terminales y laterales) por
accin de enzimas aminotransferasas y
desaminasas, principalmente.

En el catabolismo de grasas, los


triglicridos son hidrolizados liberando
cidos grasos y glicerol.
En el hgado el glicerol puede ser
convertido
en
glucosa
va
dihidroxiacetona
fosfato
y
gliceraldehdo-3-fosfato,
por
la
gluconeognesis (ruta anablica).

En muy diversos tejidos, especialmente


en msculo cardiaco, los cidos grasos
son
degradados
en
la
matriz
mitocondrial mediante sucesivos ciclos
de beta oxidacin que liberan unidades
de acetil-CoA, que pueden incorporarse
al ciclo de Krebs.
En ocasiones, el ciclo de Krebs puede
rendir propionil-CoA (3 carbonos), que
puede emplearse para la sntesis de
glucosa en la gluconeognesis heptica.

El ciclo de Krebs siempre es seguido por la


fosforilacin oxidativa.
Este proceso extrae la energa en forma de
electrones de alto potencial de las molculas de
NADH y FADH2, regenerando NAD+ and FAD,
gracias a lo cual el ciclo de Krebs puede continuar.
Los electrones son transferidos a molculas de O2,
rindiendo H2O. Pero esta transferencia se realiza a
travs de una cadena transportadora de
electrones capaz de aprovechar la energa
potencial de los electrones para bombear protones
al espacio intermembrana de la mitocondria.

Esto genera un gradiente electroqumico de H +,


que es utilizado para la sntesis de ATP
mediante la enzima ATP sintetasa.
De este modo el ciclo de Krebs no utiliza
directamente O2, pero lo requiere al estar
acoplado a la fosforilacin oxidativa.
Por cada molcula de glucosa la energa
obtenida mediante el metabolismo oxidativo,
es decir, glucolisis seguida del ciclo de Krebs,
equivale a unas 36 molculas de ATP.