Se realizan pruebas que brindan informacin acerca de la funcin

renal y heptica, valores lipdicos o colesteroles, niveles de

glucosa, entre otros.
Cuenta con autoanalizadores de ltima generacin para analizar
componentes qumicos de lquidos biolgicos como sangre y orina.
Entre las pruebas que se realiza en esta rea se encuentran:
Prueba de Funcin renal
Prueba de funcin heptica
Prueba para el diagnstico y seguimiento de pacientes con
hiperglicemia
Prueba para valorar riesgo CV
Electrolito

Los seres humanos (y algunos animales) apreciamos una amplia

gama de colores que, por lo general, se deben a la mezcla de
luces de diferentes longitudes de onda. Se conoce como color
puro al color de la luz con una nica longitud de onda o una
banda estrecha de ellas.

El color de un cuerpo depende de la luz que

recibe, refleja o transmite. Por ejemplo, el color
rojo se da cuando absorbe en casi su totalidad,
todas las radiaciones menos las rojas, las cuales
refleja o deja pasar dependiendo su estructura
(slida o transparente).

Una solucin que absorbe el rojo pero no el amarillo y

el azul con la combinacin de estos dar un color
verde.
Luz incidente

Luz absorbida

Luz emergente

Rojo
Amarillo
Azul

Amarillo
Azul

Verde
VERDE

FUNDAMENTOS
Espectro
Conjunto de rayos

procedentes de la
composicin de una luz
compuesta.

Fotometra
Es el procedimiento de
efectuar una medicin de
intensidad de luz
independiente a la longitud
de onda.

La espectrofotometra Es el anlisis qumico que

utilizan la luz para medir la concentracin de las
sustancias qumicas. Se conocen como mtodos
espectrofotomtricos y, segn sea la radiacin utilizada,
como
espectrofotometra
de
absorcin
visible
(colorimetra), ultravioleta, infrarroja.

ESPECTROFOTOMETRA
LA LONGITUD DE ONDA DE LA LUZ: Se define
como la distancia que existe entre los picos cuando la
luz recorre su camino de manera ondulatoria. Tambin
es la distancia que divide dos crestas adyacentes.

La distancia entre dos picos

(o dos valles) de una onda se
llama longitud de onda

Aplicaciones de la espectrofotometra
visible y ultravioleta.
La espectrofotometra es de gran utilidad en el anlisis de especies

qumicas sobre todo para el qumico analtico.

En bioqumica se utiliza por ejemplo para:

Identificar compuestos por su espectro de absorcin.

Conocer la concentracin de un compuesto en una disolucin.
Determinar los analitos en sangre en un laboratorio de anlisis
qumico.
Seguir el curso de reacciones qumicas y enzimticas.

- El espectrofotmetro es de gran utilidad en anlisis cuantitativo de

protenas, en la determinacin de cidos nucleicos incluyendo ADN /

ARN, enzimas.

Qu relacin guardan la transmitancia y la

absorbancia?
De acuerdo a las caractersticas de la sustancia
analizada, la luz que no se absorbe atraviesa la
solucin.

I0

LUZ

Luz transmitida

ABSORBIDA

Por lo tanto la absorbancia es

reciproca de la transmitancia.

T = I/I0
Absorbancia
Concentracin

Absorbancia contra concentracin (comportamiento lineal)

Los fundamentos de la
interrelacin de la luz que se
absorbe y la que se transmite:

Casi todas las sustancias en solucin tienen la capacidad de

absorber en forma selectiva determinadas radiaciones
luminosas unas ms que otras, dejndolas pasar.

La longitud de onda en la que las molculas de dicha

sustancias absorben con mayor intensidad la luz, se
denomina longitud de mxima absorcin o lambda
mximo.
Y depende de dos leyes :

La ley de Lambert y La Ley de Beer

Expresa la proporcionalidad que existe entre la

absorbancia de una solucin coloreada y la
distancia que recorre el haz de luz monocromtica
en ella (sin variacin de la concentracin).

Expresa la proporcionalidad que existe entre la

absorbancia de una solucin coloreada y la
concentracin de esta en un haz de luz monocromtica
(sin variacin de la longitud que recorre el haz).

Cuando un rayo de luz monocromtica con una intensidad I0 pasa a

travs de una solucin, parte de la luz es absorbida resultando que la
luz emergente I es menor que I0
Luz incidente (I0)

Luz absorbida

I0

Luz emergente (I)

a=
absortividad

I
c = concentracin.
b

(nmero de partculas por

cm3)

Longitud del medio absorbente

o ancho de la celda

Ley de
Lambert y
Beer
relacionan
observando

La medida de la absorcin
El espesor de la sustancia absorbente
La cantidad de sustancia que absorbe

crecimiento exponencial de la
absorcin de radiacin

En Funcin de
Espesor de la regin absorbente

La cantidad de esa especie

Es la determinacin de la naturaleza de una

sustancia a travs del anlisis de la radiacin
que sta puede emitir o absorber.

Un espectrofotmetro es un instrumento que descompone un haz de

luz (haz de radiacin electromagntico), separndolo en bandas de
longitudes de onda especficas, formando un espectro atravesado
por numerosas lneas oscuras y claras, semejante a un cdigo de
barras del objeto, con el propsito de identificar, calificar y
cuantificar su energa.

Se distinguen dos tipos:

Fotmetro o Colormetro: Se caracterizan porque utilizan filtros

que solo permiten el paso de una determinada longitud de onda.

Espectrofotmetros: Utilizan cromadores. Con ellos se obtiene un

haz de luz monocromtico cuya longitud de onda se vara a voluntad.

COMPONENTES DEL
ESPECTROFOTMETRO
1. Fuente de luz: proporciona energa radiante en forma de luz visible o no visible.

2. Rendija de entrada Tiene como funcin reducir al mximo la luz difusa y evitar que
la luz dispersa entre en el sistema de seleccin de longitud de onda.
3. Monocromadores: Se utiliza para dispersar la luz blanca en sus distintos componentes
uno de los cuales se selecciona para la medicin fotomtrica.
4. Rendija de salida: tiene como funcin impedir que la luz difusa atraviese la cubeta de la
muestra, que provocara desviaciones a la Ley de Beer.
5. Cubeta: Es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin.
6. Detector: Sistemas que amplifican y transforman la energa radiante no absorbida por la
muestra en energa elctrica y la convierten en una seal elctrica y cuantificable.
7. Medidor: Son sistemas de lectura de la Energa elctrica que recoge el detector.

Distribucin de la luz en el
espectrofotmetro

MEDIDAS FOTOMTRICAS

INSTRUMENTACIN
FLUOROMTRICA:
FLUORMETRO: emplea filtros de vidrio o

filtros interferenciales para seleccionar la longitud

de onda de excitacin y de emisin.
ESPECTROFLUORMETRO: emplea
prismas o redes de difraccin para seleccionar las
longitudes de onda.
Ambos aparatos tienen como componentes
bsicos:
Fuente
de energa radiante: son dos
lmparas de arco de Xenn o lmparas de
Mercurio. Emiten energa radiante de intensidad
elevada.
Rendijas de entrada y salida .
Monocromadores: pueden ser filtros o
prismas o redes de difraccin.

MONOCROMADOR
Es un instrumento ptico que sirve para separar de una fuente de radiacin
continua, un haz de luz de elevada pureza espectral y de cualquier longitud
de onda.
Monocromadores de excitacin
o primario: que selecciona las
longitudes de onda de excitacin.

Monocromadores de emisin o
secundario: que selecciona la
longitud de onda de emisin antes que
la luz llegue al detector.

 En todas tcnicas espectrofotomtricas se requiere de recipientes

para colocar las muestras. La celda debe transmitir la energa

radiante en la regin espectral que nos interesa.
Cuyas caractersticas son:
Sensibilidad elevada en la regin espectral.
Respuesta lineal para la energa radiante.
Tiempo de respuesta rpida.
Buena disponibilidad para la amplificacin y
El procesador de seal es
la alta estabilidad o bajo nivel de ruido.
un dispositivo electrnico
que amplifica la seal
elctrica que es generada
en un detector.

Cada compuesto (de complejo a simple) presenta un espectro de

absorcin caracterstico
Absorbancia

Las longitudes de onda con mayor absorcin (picos) correspondern

de forma general a aquellas con las que se leer la muestra para
determinar su concentracin
Absorbancia

La relacin entre la absorbancia por una sustancia a una

determinada y su concentracin es directamente proporcional es
decir: a mayor concentracin mayor proporcin de luz absorbida.
Absorbanci
a

La muestra se coloca en una

cubeta de forma prismtica

Se asume que el tubo, celda o cubeta en la cual se

vierte la solucin a leer no debe desviar la trayectoria de
la luz como requisito para el cumplimiento de la ley de
Beer.

150

100120

90 90

80

60
70

mg/dl

 El factor de calibracin es un trmino que relaciona la

concentracin de una sustancia con su absorbancia.

Tiene la caracterstica de ser un nmero constante o muy
aproximado entre si, a lo largo de la curva de calibracin y
se cumple slo en la zona lineal de la misma.
Matemticamente el factor de calibracin es la inversa de la
pendiente de la recta generada en la curva de calibracin.
El factor de calibracin es la relacin entre la concentracin
del estndar (St) y la absorbancia del mismo
Fc[ ]=[St]/DOst
Si hay ms de un estndar, entonces se obtendr un
promedio de los Fc.

Tipos de Espectrofotmetro
Existen en la actualidad diversos tipos
de aparatos con los mismos principios
los hay mecnicos y digitales; unos
miden solo la luz visible, otros son
ms precisos y miden tambin luz
U.V. , Infrarroja, de absorcin atmica
(AA), fluorescencia de rayos-X de
emisin
de
plasma
(ICP),,
multipropsitos
(para
medir
directamente
la
solucin
con
suspensin, muestras slidas y
biolgicas), acoplado a masas,etc..

Espectrofotmetro
de haz simple:

Consta
de
los
mismos
elementos
(Ej.
Bilirrubinmetro: para determinar bilirrubina
directa en capilar).

Espectrofotmetro de haz
doble en el tiempo:
Dos haces de luz pasan por los mismos
componentes pero no al mismo
tiempo. Emplean un Chopper, Un
sistema de espejos dirige la porcin de
luz reflejada por el chopper a travs
de una cubeta de referencia y de ah al
detector comn. El detector lee
alternativamente el haz procedente de
la muestra y el de la cubeta de
referencia.

Espectrofotmetro de
doble haz en el espacio:

Dos haces de luz pasan al mismo tiempo

por los distintos componentes separados
en el espacio. Esto compensa las
variaciones de intensidad de luz y de
absorbancia.

Manejo de espectrofotmetro
Prender el equipo (a)10 minutos antes de utilizarse, se

activar la luz roja de encendido (b).

Seleccionar la longitud de onda con el botn (c).
Ajuste (con a) a 0% de transmitancia, con la tapa cerrada y
sin muestra.
Insertar la cubeta con el blanco en su seccin (d).
b
d
c
a

 Ajustar (con e) a 100% transmitancia (0 absorbancia)

Retirar el blanco de la cubeta, agregarle la muestra

problema, e insertar en su espacio, bajar la tapa.

La aguja (d) del lector se deslizar sobre la escala (f) , se lee
en % de transmitancia en unidades de absorbancia
f
d

CUIDADOS
Las muestras no deben tener burbujas, encontrarse

turbias o con precipitados.

El volumen de la muestra en la cubeta, no debe ser
excesivo para evitar que se desborde.
La cantidad a adicionar es, mximo, hasta partes
de la cubeta.
No se deben derramar lquidos, sobre todo solventes,
cidos o lcalis.

DETECCIN DE LUZ
DISPERSADA

Se utilizan dos mtodos para detectar la dispersin:

TURBIDIMETRA: : Es la medicin de la luz transmitida

a travs de una suspensin

NEFELOMETRA: Mide la luz dispersada en direccin

distinta a la luz emitida.

NEFELOMETRA Y
TURBIDIMETRA
PRINCIPIOS:
Dispersin De La Luz
Reflexin
Absorcin
Transmisin

LA DISPERSIN: de la luz depende de varios factores, que son:

Tamao y peso molecular de las partculas
Longitud de onda de la luz incidente
Distancia del detector a la cubeta
Concentracin de partculas
Todos estos factores se relacionan mediante complejas frmulas

matemticas, por la Ley de Rayleigh.

TIPOS DE AUTOANALIZADORES
REPERTORIO DE PRUEBAS: Son las pruebas que

puede llevar a cabo un autoanalizador.

Nmero de pruebas totales

realizar.
Nmero de pruebas que
inmediata.

que el autoanalizador puede

puede realizar de forma

TIEMPO

DE RETARDO: Es el tiempo mnimo

requerido para obtener un resultado despus del
procesamiento inicial de la muestra.
CAPACIDAD: Es el nmero de determinaciones que se

pueden procesar en 1 hora. Depender del tiempo de

retardo.

Analizadores Selectivos: Tambin se llaman

analizadores de acceso al azar.

Analizadores
de
Flujo
Continuo: Son
instrumentos
que
bombean
continuamente
reactivos a travs de tuberas para formar una
corriente de flujo, bombeando despus la muestra a
esta corriente. Para ello se utilizan bombas
peristlticas.

 Cada

muestra es transportada
contenedores individuales.
Hay tres tipos:

en

Analizadores monoclonales por lotes:

Realizan una nica determinacin de forma

simultnea sobre varias muestras.
Analizadores

monoclonales
selectivos:
Realiza varias pruebas
distintas, seleccionables sobre cada
muestra, pero solo tienen un sistema de
muestra y un solo canal de lectura
espectrofotomtrica.

Analizadores multicanales: Realizan

varias determinaciones simultneas en una

misma muestra.

Consiste en un autoanalizador,
random access, con reactivos
refrigerados y cubeta de reaccin
y lectura termostatizada. Capaz
de
ejecutar
tcnicas
turbidimtricas a bajo costo ,
equipo compacto y de fcil
mantenimiento,
Comunicacin
bidireccional
con
PC,
Refrigeracin de reactivos.

Software inteligente, multitareas basado en software operativo WIN XP.

Visualizacin en lnea, brinda informacin sobre el anlisis inmediato.
Autocontrol y auto-alarma para asegurar el buen funcionamiento del equipo.
Lavado automtico de la celda del flujo y sistema de lavado de la sonda entre cada

prueba para optimizar la efectividad de las pruebas

Caractersticas:

Capacidad de muestras : 64 muestras, estndar y

de control.
Volumen de muestra : 1 - 100ul, 1ul/paso.
Capacidad de reactivo : 30 reactivos con
refrigerado si se requiere.
Capacidad de almacenamiento : memoria de 200
programas y 1 milln de resultados de pruebas.
Rangos de longitud de onda : ente 300 nm y -700
nm
Filtros : 340, 405, 492, 510, 546, 578 y 620 nm.
Rendimiento : 140 pruebas por hora

Precio:$ 700-800

Analizador de bioqumica KD720

Modos analticos : cintica, tiempo

fijo, absorbancia longitudes de onda: 7

estndar filtros: 340, 405, 492, 510, 546,
578, 630nm, ms filtro opcional.
Completo sistema reactivo abierto
Pantalla: LCD con brigthness alta
Entrada: teclado, pantalla tctil
Grficos en tiempo real visualizacin e
impresin.
Gran capacidad de almacenamiento,
hasta 10.000.000 resultados

Modular PEE Roche

Equipo con tecnologa Electro Quimio Luminiscencia. Realiza exmenes
bioqumicos, inmunolgicos, marcadores tumorales y hormonas en un
mismo tubo de sangre, permitiendo con slo una muestra, realizar ms de
150 exmenes a la vez.

Nueve dcimas partes de la

sabidura provienen de ser
juicioso a tiempo."
Henry Davis Thoreau