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I.

Objectifs: place de l ACP dans la


mdecine actuelle
II. Matriel et mthodes de l
anatomie et cytologie pathologiques
- Etude des tissus = histopathologie
- Etude des cellules = cytopathologie

III. Techniques histo-pathologiques:


Notions gnrales

I. Objectifs: place de l ACP dans la


mdecine actuelle

L'anatomo-cytopathologie (ou pathologie)


est une discipline mdicale qui tudie les
lsions
provoques par les maladies ou associes cellesci, sur les organes, tissus ou cellules, en utilisant
des techniques principalement bases sur la
morphologie macroscopique et microscopique..

Lsions = Les lsions sont des


altrations morphologiques des
organes, dcelables par tout moyen
d'observation. Les lsions sont des signes
des maladies, au mme titre que les
symptmes cliniques.

Objectifs ACP - 2
Causes des lsions varies:
infectieuses, agents physiques ou
chimiques,
anomalies gntiques, immunitaires,
circulatoires, nutritionnelles, snescence.
Mais des lsions ne sont pas connues dans
toutes les maladies.
Ex: certaines maladies neuro-psychiatriques
(mcanismes en coursd'lucidation:
modifications d'amines crbrales...)
Notions daffections"fonctionnelles" =
sans lsion morpho connue affections
"organiques" = lsions visibles connues

2 types d objectifs de l ACP


1. Diagnostic
interprtation des lsions+ confrontation
donnes cliniques, biologiques et d
imagerie = corrlation anatomo-clinique
++++
synthse diagnostique: Dg certain,
probable ou incertain
+/- valuation du pronostic (ex: cancer)
recherche de cibles thrapeutiques
valuation effet des thrapeutiques
(biopsies rptes au cours d un
traitement).

2. Objectif plus thorique: observer,


comprendre les lsions, leurs
mcanismes et leurs consquences la
base de la classification anatomoclinique des maladies,
possible mme lorsque la cause n est
pas connue.

Ainsi, il existe 3 niveaux d'interprtation :


1. niveau smeiologique: observation signes
cliniques, biologiques macro/
Microscopiques.
2. niveau diagnostique: interprtation,
classement,
prvision d'une volution, consquences
thrapeutiques
3. niveau thorique: "concept" thorique,
tenant compte des connaissances
scientifiques actuelles

PLUSIEURS NIVEAUX D'OBSERVATION


des lsions:
macroscopie = observation l'oeil nu
(pices opratoires, autopsie...)
microscopie optique (tissus, cellules,
substances intercellulaires).
lectronique "ultrastructure" (cellule, organites cell )
Profonde volution de l'anatomie pathologique
depuis 20 ans: avec l'introduction de
techniques immunologiques, puis de la biologie
molculaire
importants progrs comprhension
Physiopathologique des maladies

NIVEAU D OBSERVATION DES LSIONS/


2:
immunohistochimie: mise en vidence Ag
cell
ou extracell
Ac spcifiques, sur coupes tissulaires ou cytologie
dtermination phnotype immunologique in
situ
(visualisation du sige exact de l'expression de
l'Ag) CD20
biologie molculaire: dtermination
gnotype
.

LES 2 BRANCHES DE L'ANATOMIE


PATHOLOGIQUE:
anatomie pathologique spciale:
tudie les lsions dans chaque organe ou
systme
Ex: pathologie digestive, gyncologique,
hmatologique, rnale, neuropathologie ...
intgre dans l enseignement des modules

anatomie pathologique gnrale:


tudie les grands processus lsionnels,
indpendt de leur localisation
. Au programme:
. les lsions lmentaires de la cellule et des
tissus
. l'inflammation
. les troubles vasculaires
. les maladies de surcharge
. les tumeurs
. (les maladies des des dsordres
immunitaires)
. (les malformations congnitales)
. (la senescence)

Matriel tudi de 2 types:


. tissus: histopathologie
. cellules: cytologie ou cytopathologie
techniques de prlvement
techniques anatomopathologiques
diffrentes.

Matriel tudi selon la technique de


prlvement:
. biopsie: chantillon pour diagnostic
. pice opratoire: bilan des lsions
aprs acte thrapeutique
. autopsie: bilan des lsions et
diagnostic dfinitif.

prlvements de petits fragments d'organes, pratiqus


chez un sujet vivant dans le but de faire un
diagnostic.
Avec des pinces, trocard, bistouri.
- sous contrle de la vue:
. direct: peau, muqueuses (col utrin...)
. endoscopie: tube digestif, bronches ...
. chirurgical: ganglion, muscle, artre, nerf, sein ...
- " l'aveugle" ou diriges (sous chograhie,
scanner)
ponction-biopsies
foie, molle osseuse, os, rein, tumeur profonde,
encphale...

ex: coloscopie:
1: ilon, 2: colon droit, 2: colon
transverse, 4: colon gauche,
5: sigmoide, 6: rectum.
le plus souvent, pour la technique

histologique standard (inclusion et coupes


en paraffine) :
places immdiatement dans un liquide
fixateur
(formol > liquide de Bouin...) dans un
flacon comportant une tiquette avec
l'identit du patient et le sige des
biopsies

accompagnes d'un bon d'envoi,


comportant: +++
. identit du malade: nom, prnom, sexe, ge
. identit du mdecin ou service
. raisons de ces biopsies: signes cliniques,
biologiques, .
. antcdents du malade: cliniques, biopsies
antrieures
. aspect macroscopique ou endoscopique
. sige exact des biopsies (numrotation des
flacons)

Souvent, interprtation anatomopathologique d'une biopsie


diagnostic

choix thrapeutique.
Importance +++ de la qualit de la biopsie
et de la collaboration anatomo-clinique
troite

des biopsies non fixes sont ncessaires


pour certaines techniques particulires:
Examen extemporan
microscopie lectronique
histo-enzymologie
immunohisto(cyto)chimie
biologie molculaire
cytogntique
Elles doivent tre adresses au laboratoire:
immdiatement l tat frais
dans certains cas, congeles dans lazote liquide
ou -80C

Techniques particulires (1)


Examen extemporan:
Ralis lorsqu'il est ncessaire de connaitre la nature
d'une lsion
pendant l'intervention chirurgicale,pour guider
le geste thrapeutique: diagnostic susceptible
de modifier l acte chirurgical
Ex: tumeurs du sein, de la thyroide...
recherche de mtastases ganglionnaires
examen macroscopique immdiat l'tat frais
coupes la main et au microtome
conglation,
pour un diagnostic microscopique rapide (10 20 mn)
(Dg pas toujours possible: artefacts de conglation.)
Dg toujours vrifi par les techniques
classiques, aprs fixation

Techniques particulires (2)


Microscopie lectronique
rarement utile pour le diagnostic, sauf pour
certaines maladies musculaires, rnales ou de surcharge
fixation trs rapide dans des fixateurs spciaux
(glutaraldhyde...).sur des fragments de trs petite taille (1
mm3)

Histo-chimie et histo-enzymologie:
dtection de certains constituants
cellulaires (lipides, enzymes ...)
possible seulement sur tissus congels
Tissu frais, non fix, adress
immdiatement au laboratoire
spcialis.
NB: Mais, la plupart des techniques
histochimiques sont ralises sur
tissu fix.

Techniques particulires (3)


Immuno-histo(cyto)chimie:
mise en vidence Ag cell ou extracell /
Ac spcifiques coupls un
marqueur fluorescent IF: immunofluorescence
. une enzyme qui est rvle, en prsence
de son substrat
mthodes immuno-enzymatique

Techniques particulires (4)


Immuno-histochimie-2
- Certains Ag dnaturs par fixation et/ou
inclusion en paraffine conglation dans
l'azote liquide d'un fragment de la biopsie
et tude immunohistochimique sur coupes en
conglation.
Autre technique possible: suspension cellulaire
obtenue partir de la biopsie tude
immunologique ( hmatopathologie)
Comptage et tri cellulaire possible en
cryomtrie en flux (faisceau laser)
- Mais de nbx AC utilisables sur tissus fixs
ont t produits:

Techniques particulires (5)


Immuno-histochimie-3
Intrt Dg, pronostique et thrapeutique+++
+
Diagnostic: classification des tumeurs/ Ag de
diffrenciation.
Pronostic: prolifration cellulaire
marqueurs pronostiques (produits d oncognes)

Thrapeutique: expression de cibles


thrapeutiques
(rcepteurs hormonaux, immunothrapie)

Acides nucliques dnaturs par certains fixateurs,


en particulier liquide de Bouin, longtemps utilis .
Le formol tamponn prserve l'ADN
( sensibilit PCR)
mal les ARN.
Ncessit de tissus congels, ventuellement
aprs transport dans
liquide spcial (RNA-later).
obligation de cryoprservation des tissus:
Tissuthque tumorothque Centre de
ressources biologiques

Objectifs: diagnostic
recherche: tude de sries (collections)
NB: Nouveaux fixateurs l tude
Objectifs: prservation acides nucliques
toxicit < formol
bonne morphologie +++

Techniques particulires (7)


Cytogntique
- conventionnelle (caryotype): mise en
culture de tissu frais, pour l obtention de
mtaphases
tude des chromosomes, aprs coloration
spcifique en bandes
- anomalies de nombre: monosomie, trisomie...
- anomalies de structure: translocation,
dltion, inversion...
labo de cytogntique (hmatologie,
sarcomes...)
- molculaire: hybridation in situ

FISH: fluorescent in situ hybridation


possible sur chromosomes ou sur noyaux
interphasiques (sur appositions ou culots
cellulaires ou coupes tissulaires )
hybridation avec des sondes = squences
nuclotidiques mono-brin
complmentaires spcifiques d une squence d
acides nucliques
donne (ADN et ARN)
En dveloppement en anatomie pathologique
sondes fluorescentes ou marques avec un
chromogne = CISH

2/. Pices opratoires:


organes ou segments d'organes enlevs, titre
thrapeutique,
au cours d'une intervention chirurgicale.
L'examen anapath doit confirmer ou prciser le
diagnostic
faire le bilan des lsions.
Toutes les techniques spciales (ME,
histochimie, immunohistochimie,
bio mol...) peuvent tre ralises sur des
prlvements faits sur des pices opratoires, si
les conditions ncessaires sont respectes
(conglation ou fixation particulire).

Pices opratoires- 2
Les organes sont pess, mesurs, dissqus
+/- photographis (ou schma)
prlvements pour conglation (tumeur et
tissu sain)
puis fixs dans le formol, dans des
conditions optimales
(volume, dure, fonction de la taille de la
pice opratoire)

Description macroscopique (dans le compte


rendu, avant la microscopie):
type de pice opratoire (taille, poids)
aspect, taille (ou poids), extension des lsions,
lsions associes
distance des limites de rsection,
recherche des ganglions lymphatiques
(cancer) ...
Des prlvements reprs et numrots
(lsion, ganglions, limites....) sont raliss
pour l inclusion en paraffine et l tude au
microscope
NB: importance des renseignements fournis
par le chirurgien et des repres, en

3/ L'autopsie:
acte mdical bilan complet des lsions et
diagnostic dfinitif.
connaissance dossier clinique, pour
orienter la recherche des lsions.
dissection de tous les viscres
prlvements pour tude microscopique au
niveau des lsions
2 types d autopsie:
autopsie hospitalire
autopsie mdico-lgale

L'autopsie - 2
Autopsie hospitalire = vrification anatomique

Ralise par un pathologiste


A la demande du chef de service hospitalier,
avec l'autorisation administrative du Directeur de l'hpital.
Dlai lgal > 3 h aprs le dcs
Parfois non autorise: opposition de la famille, "mort violente",
certaines religions...
contrle de la qualit des soins: Dg cliniques exacts ou
non.
pidmiologie: tudes des causes de mortalit.
Autopsie mdico-lgale:
N'est pas pratique par un anatomopathologiste, mais par un
mdecin lgiste, sur rquisition du Procureur de la
Rpublique,
en cas de "mort violente": crime, suicide, accident ...

. CYTOPATHOLOGIE
Examen microscopique cellules isoles dposes sur 1
lame de verre.
Techniques de prlvement:
raclage (spatule, brosse...): col utrin, peau,
bronche, oesophage...
ponction l'aiguille:
l'aveugle: ganglion, molle osseuse
dirige (chographie, scanner): sein, thyroide, foie;
pancras, poumon, rein ....
apposition de biopsies, sur lames de verre:
ganglion, molle osseuse,
rate..
centrifugation d'un liquide pathologique
(pleural ,ascite)
culot cellulaire, tal sur lames

Cytopathologie- 2

Les lames peuvent tre:


soit sches l'air: prlvements hmato
(ganglions, molle, rate)
ponctions d'organes
coloration de May Grunwald Giemsa
soit fixes (mlange alcool/ther ou
laque):col utrin...

coloration de Papanicolaou
+++ Nom du malade inscrit sur chaque lame.
Bon d'envoi avec mmes renseigments
cliniques que pour biopsies.
+ Nouvelle technique: cellules en
monocouche (couche mince)
le prlvement cellulaire est adress au laboratoire
dans un liquide conservateur cell remises en
suspension, concentres
cellules en couche mince sur une lame (pastille)
permet la conservation des cellules
la ralisation de techniques complmentaires:
immunocytochimie, biologie molculaire (ex: HPV)

Intrt de la cytopathologie- 3
analyse fine dtails cellulaires,
mais montre mal l'organisation tissulaire.
mthode facile, non traumatisante
rapide
de dpistage (frottis vaginaux),
de diagnostic, isolment ou en complment
de l'histologie:
- hmatologie +++
- cancrologie: lsions difficilement accessibles la
biopsie.

2-Techniques d'tude morphologique


des prlvements cellulaires et
tissulaires:

a) Enregistrement :
numro didentification
retranscription du numro sur les blocs et
les lames
chaque prlvement doit tre accompagn
d'une fiche de renseignements remplie
par le mdecin prescripteur qui doit
mentionner :
l'identit du patient : nom, prnom,

date de naissance, sexe.


le sige, la date et la nature du
prlvement (biopsie ou exrse).

les circonstances cliniques et para

cliniques qui ont motiv le


prlvement, ventuellement les
hypothses diagnostiques.
L'aspect macroscopique ou
endoscopique des lsions
les antcdents pathologiques du
patient
le nom et coordonnes du mdecin
prescripteur et du prleveur

b)Techniques dtude des cellules:


Etalement des cellules sur des lames de
verre : l'talement est fait par le prleveur
lors des cytoponctions d'organes, des
frottis, couvillonage, brossages ou
appositions
La fixation des talements se fait :
soit par simple schage l'air pour la
coloration de May-Grunwald-Giemsa
soit par immersion dans l'alcool-ether ou
par application d'un arosol de laque
fixante
pour les colorations de Harris-Schorr ou de
Papanicolaou (frottis cervicoutrins)

Frottis cervico-utrin : prsence de kolocytes tmoignant d'un condylome viral. coloration de Papanicolaou

c) Techniques dtude
des tissus:

Etude macroscopique:
L'examen macroscopique dtaill est
une partie essentielle de l'tude
d'une pice opratoire : la pice est
examine, mesure, pese, palpe
puis dissque

Une pice doesogastrectomie pour cancer du bas sophage (flche).


A- pice frache. B- pice aprs fixation dans une solution de formol

Examen macroscopique dune pice opratoire d' oesogastrectomie


pour cancer du bas sophage : reprage des
dimensions de la pice

Examen macroscopique dune pice opratoire : dissection d'une


pice d'oesogastrectomie et slection des
prlvements destins ltude microscopique

Pice dexrse de prostate et de vsicules sminales : A- surface


tatoue lencre de chine, B- Tranche de section de
la prostate : lencre ne pntre pas en profondeur

Pice dexrse de prostate tatoue lencre de chine : Lors de


lexamen microscopique, l encre permet de reprer exactement les
limites de la rsection chirurgicale (limite noire gauche)

L'examen macroscopique :
donne des indications pour le pronostic de la maladie
(notamment taille et localisation dun cancer)
permet de slectionner les territoires prlever pour
l'tude microscopique :

_ zones lses,

_zones d'aspect macroscopique sain et


limites d'exrse

Exemple de prlvement destin ltude microscopique : jonction


entre la paroi oesophagienne daspect sain (A) et la tumeur (B)

Aprs le choix des prlvements destins


l'analyse microscopique, les restes de
la pice opratoire sont conservs
pendant quelques jours ou semaines afin
de pouvoir en cas de ncessit effectuer
des prlvements complmentaires.

Fixation:

Indispensable pour conserver la morphologie


cellulaire
Doit tre immdiate ou au moins trs rapidement
dbute aprs l'obtention du prlvement.
Toute fixation dfectueuse rend l'tude anatomopathologique difficile voire impossible (dessiccation
et/ou autolyse du tissu)
Le volume du fixateur: doit tre 10 fois le volume de
la pice.
Le rcipient doit tre de taille suffisamment grande
pour prvenir les dformations des pices
opratoires volumineuses.

La dure de la fixation: au
minimum 2 5 heures pour une
biopsie et 48 heures pour une pice
opratoire.
Nature du fixateur : le fixateur le
plus habituellement utilis est le
formol 10% tamponn

Imprgnation et inclusion:

Tissus dshydrats imprgns de paraffine, avant linclusion

Inclusion manuelle du tissu dans un moule de paraffine

Coupes et colorations:
Le bloc solide de paraffine contenant le
tissu est
coup grce un microtome
les coupes de 3 5 microns d'paisseur
sont tales sur des lames

Technique histologique : tapes manuelles. A : refroidissement des


blocs de paraffine ; B : coupe au microtome ; C : talement

automate coloration

A. Tissu dans le bloc de paraffine aprs la coupe. B


Coupe du tissu tal sur lame et color

La coloration usuelle associe un colorant basique


nuclaire (hmatine, hmatoxyline) et un
colorant acide cytoplasmique (osine,
rythrosine, ou phloxine) ; on y ajoute souvent du
safran qui se fixe sur le collagne.
La coupe colore est protge par une lamelle de
verre colle ou par un film plastique transparent.
Elle est analyse au microscope par un mdecin
anatomo-pathologiste qui tablit un compterendu. Les blocs et les lames sont ensuite
archivs

Coloration hmatoxyline-osine-safran sur une lame intressant la jonction entre la paroi oesophagienne saine (A) et une tumeur (BC). A : muqueuse malpighienne saine de l'oesophage. B : adnocarcinome moyen grossissement. C :adnocarcinome fort
grossissement

Plateau de lecture : Les lames colores accompagnes des renseignements cliniques sont prpares pour le mdecin pathologiste qui les
observe au microscope : dtection et interprtation des lsions pour tablir un diagnostic

Archivage des lames et des blocs

Examen histologique extemporan :

Il s'agit d'un examen anatomopathologique


pratiqu ds que le prlvement est effectu,
non
fix, pendant une intervention chirurgicale, afin
de fournir rapidement au chirurgien un
Diagnostic susceptible de modifier le
droulement
de lacte chirurgical.
La technique utilise la macroscopie et, le plus
souvent, des coupes au microtome conglation
et une coloration rapide, ce qui permet un
rsultat
en moins de 30 minutes.

B-Application des technique de


biologie moleculaire en
anatomie pathologie:
1-Immunohistochimie
: dun
Identification ou localisation
constituant tissulaire in-situ

Raction immunologique de type


ANTIGENE-ANTICORPS
ANTIGENE : Substance dtecter
ANTICORPS: immunoglobuline spcifique
de la cible recherche

Raction Ag-Ac non visible au MO

Lier lAc un marqueur qui rvlera le


complexe Ag-Ac

Grce lmission dun signal

Modles de marquage
Nuclaire

Nuclaire et
cytoplasmique

Cytoplasmique

Membranaire

Golgien

Extra-cellulaire

Marquage
TTF-1: Thyrode Transcription
Factor
nuclaire