C U R S O :IN FEC C I N E

IN M U N IDPRACTICA
A D N 01
MTODOS INMUNOQUMICOS
Blga Nilda Aurea Apayco Espinoza

introduccin
Los anticuerpos poseen una alta
especificidad y afinidad para un
antgeno especfico. Es la unin
especfica de un anticuerpo a un
antgeno lo que permite la deteccin
de analitos por medio de una variedad
de tcnicas de inmunoensayo.

Inm unoanlisis
A. Inmunoanlisis con reactivos no
marcados
1. Reaccin de precipitacin
. Reaccin de precipitacin en medio
lquido
a) Precipitacin en tubo
b) Floculacin
c) Turbidimetra
d) Nefelometra

Reaccin de precipitacin en gel

a) Inmunodifusin doble
b) Inmunodifusin radial
c) Inmunoelectroforesis
d) Inmunofijacin
e) Contrainmunoelectroforesis
f) Rocket inmunoelectroforesis
g) Inmunoelectroforesis cruzada o

bidimencional de Laurell

2.Reaccin de aglutinacin
a) Aglutinacin directa
b) Aglutinacin indirecta
c) Aglutinacin pasiva

3.Reaccin con participacin delcom plem ento

a) Fijacin del complemento

b) Actividad hemoltica del

complemento

B.Inm unoanalisis con reactivos m arcados

Inmunoanlisis fluorescente
a) Microscopa inmuflorescente
b) Inmunoanlisis de fluorescencia
polarizada
c) Inmunoanlisis de fluorescencia
unida a enzimas

EN ZIM AIN M UN O AN ALISIS (EIA)

a) EIA homogneo
b) EIA heterogneo
c) Electroinmutransferencia o Western

blot o inmunoblotting

Radioinm unoanalisis (ria)

a) RIA en fase soluble
b) RIA en fase slida
c) Deteccin inmunorradiomtrica para

antgeno.
- QUIMILUMINISCENCIA
- BIOLUMINISCENCIA

precipitacin
Se forman complejos antgeno-anticuerpo
insolubles por la reaccin entre
antgenos
y
anticuerpos
solubles
(denominados
precipitinas)

aglutinacin
Agregacin o agrupacin de clulas como resultado de su
interaccin con anticuerpos especficos denominados
aglutininas (antgenos = aglutingenos, en este caso).
Existen varios tipos de aglutinacin en donde se destacan:
AGLUTINACIN ACTIVA-: anticuerpos dirigidos contra
componentes de las partculas (eritrocitos, bacterias).
- ejemplo determinacin de grupos sanguneos.
AGLUTINACIN PASIVA: los anticuerpos se dirigen contra
molculas que se han adherido intencionalmente a una
partcula que acta como medio de soporte pasivo (ltex).
Una variante es la aglutinacin pasiva reversa, en donde lo
que se detecta es el antgeno y las partculas estn
recubiertas por el anticuerpo.

Inm unoanlisis con reactivos m arcados

Tcnicas que utilizan la reaccin antgeno-

anticuerpo para el anlisis cualitativo y

cuantitativo de diversas sustancias.
En general se utiliza un anticuerpo como

reactivo para detectar o cuantificar lo que

nos interesa, el antgeno.
Los anticuerpos pueden ser policlonales o

monoclonales

enzim ainm unoanalisis

En EIA, las marcas de las enzimas se usan en
lugar de las marcas radioactivas. Las marcas
tpicas de enzimas son la fosfatasa alcalina,
peroxidasa de rbano picante, y la galactosidasa
B. Mientras que RIA usa radioactividad para
medir la concentracin del analito, EIA
tpicamente usa un cambio de color, emisin de
luz, u otra seal. Se requiere un equipo
especfico para obtener la concentracin de
enzimas
presentes
midiendo
el
cambio
especfico que ocurri.

ELISA

La tcnica ELISA ("Enzym e-Linked Im m unoSorbent Assay" Ensayo

inm unoabsorbente ligado a enzim as) se basa en la deteccin de un
antgeno inm ovilizado sobre una fase slida m ediante anticuerpos que
directa o indirectam ente producen una reaccin cuyo producto, por
ejem plo un colorante, puede ser m edido espectrofotom tricam ente.
Este m todo ha tenido una enorm e aplicacin en todos aquellos cam pos
en los que se precisaba la cuantifi
cacin de productos m ediante
anticuerpos : diagnstico

clnico, deteccin

viral, clasifi
cacin

anticuerpos en isotipos,bsqueda de anticuerpos m onoclonales, etc..

de

radioinm unoanalisis
RIA: an se usan en la actualidad,
particularmente para la deteccin de
cantidades muy bajas de analitos. Sin
embargo, debido a las complicaciones
inherentes al manipuleo y desecho de los
materiales radioactivos en el laboratorio
clnico, RIA se usa con menos frecuencia
que otro tipo diferente de inmunoensayo,
denominado inmunoensayo enzimtico
(EIA).

quim iolum iniscencia

Es el fenmeno que ocurre en las lucirnagas y consiste en:
una reaccin qumica con un muy alto rendimiento energtico
produce una molcula potencialmente fluorescente.
(No hay excitacin luminosa como en la fluorescencia)
Usualmente son reacciones redox catalizadas por enzimas que
involucran O2 o H2O2 y un sustrato orgnico oxidable. La
energa se libera como luz visible.
Se utiliza para detectar concentraciones muy bajas de
molculas, menor lmite de deteccin que en los mtodos
isotpicos y en otros enzimticos.

biolum iniscencia
En bioluminiscencia, una reaccin
qumica medida por enzimas es
responsable por la excitacin, y esta
reaccin est siempre emparentada a
organismos vivos.

IN M U N O BLO T

El Inmunoblot o Western blot es una

tcnica mediante la cual se separan
protenas por electroforesis en gel de
poliacrilamida y despus se transfieren
electroforticamente a un papel de
nitrocelulosa o una membrana similar,
donde son detectadas con anticuerpos
que reconocen los antgenos que hay en
ellas.

INMUNOFLUORESCENCIA
Utiliza Ac marcados
Conjugados)
Con colorantes fluorescentes o
Fluorocromos (fluorescena
FITC
O rodamina, entre otros) como
Sistema indicador.
Cuando se aplica luz
ultravioleta
En el microscopio de
fluorescencia,

INMUNODIFUSION RADIAL
La inmunodifusin radial es una tcnica
de anlisis inmunolgico de tipo
cuantitativo. Se utiliza para detectar la
cantidad de anticuerpos IgG, IgM e IgA
que hay en el suero de un individuo. La
tcnica de inmunodifusin radial es lenta
y poco sensible ya que necesita mucha
cantidad de anticuerpos (o antgeno) para
que se formen complejos

INMUNODIFUSION EN GEL
Se enfrentan antgenos y anticuerpos
colocndolos en hoyos o pozos
circulares adyacentes hechos en la
agarosa, para que se formen lneas
de precipitacin entre ellos.

N EFELO M ETRIA

La nefelometra es un procedimiento analtico que

se basa en la dispersin de la radiacin que
atraviesan las partculas de materia. Cuando la
luz atraviesa un medio transparente en el que
existe una suspensin de partculas slidas, se
dispersa en todas direcciones y como
consecuencia se observa turbia. La dispersin no
supone la prdida neta de potencia radiante, solo
es afectada la direccin de la propagacin, porque
la intensidad de la radiacin es la misma en
cualquier ngulo..

IN M U N O PRECIPITACIN
Tcnica muy precisa que tiene la
ventaja sobre el inmunoblot que no
desnaturaliza las protenas antes de
que se produzca la unin del
antgeno con el autoanticuerpo, y
permite as detectar autoanticuerpos
dirigidos contra eptopos
conformacionales.

IN M U N O ELECTRO FO RESIS
tcnica que se realiza en dos fases.
Primero se separa la mezcla de Ags por
electroforesis y posteriormente el
antgeno que se desea detectar se hace
reaccionar con un anticuerpo especfico
colocado en un pocillo lateral.. En
Inmunologa clnica, esta tcnica puede
utilizarse en la identificacin de las
protenas de mieloma.