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Inhibicin enzimtica

Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).
Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica
De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:
I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo
II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la
molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.

Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,


con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E+I

EI

ES + I

ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:


E+I

Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva
(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo
haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin
cataltica: Inhibicin No Competitiva
(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-substrato
una vez formado, impidiendo la accin cataltica; este tipo
se conoce como Inhibicin Anticompetitiva

S
E
I

ES

E+P

Inhibicin
Competitiva

EI
Las fijaciones de substrato e inhibidor son
mutuamente exclusivas; el complejo EI no es productivo

S
E

ES

Inhibicin
No Competitiva

S
EI

E+P

ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E


y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos

S
E

ES

E+P

I
ESI

Inhibicin
Anticompetitiva

El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES;


el complejo ESI no es productivo

Inhibicin Competitiva

S
E

ES

E+P

I
EI

Se define una constante de


equilibrio de disociacin del
inhibidor:

[E] [I]
Ki =
[EI]

Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato

En condiciones de equilibrio rpido, llamando y a la concentracin


del complejo EI, para la inhibicin competitiva obtenemos el sistema de ecuaciones

(e0 x y )s
Km
x
(e0 x y )i
Ki
y
Que resuelto para x nos da

e0s

i
Km 1
Ki

De donde

s
v

i
Km 1
s
Ki

m x

Por tanto, en la inhibicin competitiva,

1. El efecto cintico del inhibidor es el aumento aparente de la


Km, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/Ki)
2. La Vmax no aparece modificada; para concentraciones muy
altas del substrato, v = Vmax, igual que en ausencia de inhibidor
3. Cuanto ms pequeo sea el valor de Ki mayor ser la potencia
del inhibidor competitivo.

Representacin directa
Inhibicin competitiva

120

100

80

60

40

20

0
0

20

40

60

80

100

120

Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble


0.07

1/v

0.06
0.05
0.04

1/Vmax

0.03
0.02

-1/Km

0.01

1/s

0.00
-0.3

-0.2

-0.1

0.0

0.1

0.2

-1/(Km(1 + i/Ki))

0.3

0.4

0.5

0.6

Inhibidores
competitivos

Succinato deshidrogenasa
COO-

FAD

FADH2

COO-

CH2

CH

CH2

CH

COOSuccinato

SDH

COOFumarato

COOCH2
COOMalonato

COOC O
CH2
COOOxalacetato

COOCH2
CH2
COO-

Inhibidores competitivos
como nalogos estructurales
del substrato

Succinato
COOC O
CH2
COOOxalacetato

O
H2 N

C
O-

H2 N

S NH2
O

4-aminobenzoato
4-aminobenceno
sulfonamida

H2N

N
N

N
N

H
N

CO OH

OH

CH2

c. Flico

CH2
C NH C H
O
H 2N

N
N

N
N

COOn

CH3
N

CO OH
CH2

Methotrexate

CH2
C NH C H
O

COOn

O
CH3

HN
O

Anlogos de base

NH

Timina

O
Br

HN
O

NH

5-Bromouracilo

NH2
O
HOCH2

Citidina
OH

OH

NH2
O
HOCH2

N
OH

OH

Citosina
arabinsido

Anlogos de
nuclesido

Un paso ms all en el desarrollo de inhibidores potentes


es el concepto de Anlogo de Estado de Transicin (AET)

- El inhibidor no es estrictamente anlogo del substrato,


sino del Estado de Transicin de la reaccin.
- La afinidad de las enzimas por los AET es enorme, del
orden nM o pM, con lo que la fijacin es tan fuerte que
puede considerarse irreversible

O
O2N

N+ CH3

H 3C

N+ CH3

OH

O2N

HO

O-

O
P

Estado de transicin

CH3

O
O 2N

Susbtrato

CH3

O-

O2N

H 3C

H3 C

H3C
O

N+ CH3
CH3

N+ CH3
CH3

Productos

Anlogo de
estado de transicin

Estado de
transicin
Substrato

Anlogo de
estado de transicin

Aspartato
transcarbamilasa

COOH 2C
-

NH2

NH

OOC

OO

O P O-

Estado de
transicin

O-

COOH2C
-

OOC

NH
CH2
O P OO-

Anlogo de
estado de transicin:
N-fosfonoacetil L-aspartato
(PALA)

Angiotensingeno
Hipotensin,
hipovolemia,
ortostatismo

Renina
Angiotensina I
DRVYIHPFHL

Enzima convertidora
de Angiotensina, ECA

HL

Angiotensina II
DRVYIHPF
Aumento de la presin arterial

Anlogos de Estado de Transicin: Captopril


R
HN

CH COO-

C O
R'

C H
NH

HO C
C
O

Zn2+
Estado de transicin
de la ECA

CH COO-

C O
H3 C C H
H C
H
S

Zn2+

Captopril

Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente
- Su accin no se describe por una constante de equilibrio Ki,
sino por una constante de velocidad ki:

E+I

- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los


inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.
- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.

Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH


2. Organofosfricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados

Reactivos de grupos -SH, 1


(a) Agentes alquilantes
Yodoacetato

ICH2 COO-

SH

IH

S CH2 COOO

(b) Compuestos insaturados


E

E S

SH
O

N CH2 CH3
O

N CH2 CH3

N-Etil maleimida (NEM)


O

Reactivos de grupos -SH, 2


(c) Formadores de mercptidos
HOHg

SH

COO-

p-Hidroximercuribenzoato

S Hg

COO-

(d) Oxidantes
Promueven la oxidacin de dos tioles a un disulfuro

Organofosfricos

Ser CH CH2

H3C

OH

Ser CH CH2
H3C

CH3
CH

P O

CH
H3C
CH3

DFP:
diisopropil
fluorofosfato

CH3
CH

O P O
CH
H3C
CH3

- Actan sobre enzimas sernicas


- nicamente sobre la Ser activa
- Insecticidas: Parathion, Malathion
- Inhibidores de la Acetilcolinesterasa
- Neurogases

Ligandos de coordinacin de metales


Es el caso del ion cianuro, CNSe fija con gran afinidad a la sexta posicin de coordinacin
del Fe hemnico, impidiendo toda modificacin posterior.
Por ello acta sobre sistemas de Fe hemnico con la sexta
posicin de coordinacin libre, como la citocromo oxidasa,
de lo que deriva su elevadsima toxicidad

Substratos suicidas
(Inhibidores activados enzimticamente)
- Se trata de molculas que se unen al centro activo de manera
especfica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos
- Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la
molcula en una especie qumica muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima, inactivndola
- Tienen por tanto (a) la especificidad del inhibidor competitivo
y (b) la potencia de los inhibidores irreversibles

Modo de accin de los inhibidores suicidas

E+I

EI

EI*

E + I*

1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el substrato o un


inhibidor competitivo convencional
2. La accin cataltica de la enzima convierte al inhibidor I
en una especie altamente reactiva I*
3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivndola
de forma definitiva al igual que un inhibidor irreversible.

Ejemplos de inhibidores suicidas, 1


- Sistema de la -lactamasa bacteriana
La utilizacin masiva de antibiticos -lactmicos (penicilinas,
sus derivados semisintticos y cefalosporinas) ha conducido a
la aparicin de resistencias a los mismos.
Los microorganismos resistentes a estos antibiticos lo son por
producir una enzima, la -lactamasa, que inactiva a los antibiticos -lactmicos.

Penicilina (activa)
S

R CO NH

CH3
CH3

N
O

COO-

-Lactamasa

R CO NH
O C HN
O-

CH3
CH3

COO-

c.peniciloico (inactivo)

Muy a menudo los preparados de penicilinas o penicilinas


semisintticas se formulan aadiendo un inhibidor suicida
de la -lactamasa, el cido clavulnico
O
C

N
O

CH2OH
H

-Lactamasa

COO

HN

CH2OH
H

COO-

C
O

C
O-

c.clavulnico

CH CH2
Ser

HN

CH2OH
H

COO-

Esta molcula
reacciona con la
serina activa de la
-lactamasa,
produciendo su
inactivacin

Ejemplos de inhibidores suicidas, 2


- Sistema de la monoamino oxidasa (MAO) cerebral
Los estados depresivos, en general, estn relacionados con un
descenso en la concentracin de neurotransmisores adrenrgicos
(dopamina, noradrenalina, etc.) en determinadas regiones del
cerebro.
Una de las enzimas encargadas de la degradacin de estos
neurotransmisores es la monoamino oxidasa (EC 1.4.3.4).
Por tanto, la inhibicin de la monoamino oxidasa se emplea como
teraputica de los estados depresivos. Se han desarrollado muchos
inhibidores suicidas de la MAO

HO
HO

Noradrenalina
CHOH CH2 NH2

O2 + H2O

Monoamino
oxidasa
NH3 + H2O2
HO
HO

CHOH CHO

Dihidroxifenilglicol

La MAO es una flavoprotena:


tiene un grupo prosttico
flavnico (FAD) fundamental
para la catlisis. Los inhibidores
suicidas de la MAO inactivan
al cofactor FAD.

H 3C

S H 2C

N,N dimetil
propargilamina
(pargilina)

NH
N

HC C CH N

Flavina

CH3

CH3

H 3C

Inhibicin suicida de la
MAO mediante Pargilina
E

N+

CH CH

H 3C

CH

H3C

S H2C

Flavina modificada

O
NH
NH