AUTOINMUNIDAD Y

TRANSPLANTE

Algunas enfermedades
autoinmunitarias
comunes
Autotolerancia
Autoinmunidad
Rechazo
injerto

del

Autoantigenos
Autoanticuerpos

La autoinmunidad se debe a una combinacin

de susceptibilidad

Mecanismos de reconocimiento de
un Ag propio o ajeno?

TOLERANCIA CENTRAL
TOLERANCIA PERIFERICA
Inducida
en
repertorio
linfocitos
inmaduros/
maduros

el
de

Linf. inm + Ag
Seal
negativa
Muerte
Anergia

Concentracin
alta y cte. Ag
(LT inm) Ag
subito

S. Inmune
innato
Seales
decisivas
Mol. Coestim.
= RI

La autotolerancia proporciona una

defensa global contra las enf.
Autoinmunes.
Impide la activacin de linfocitos
autorreactivos.

Clulas ignorantes pero con latencia autorreactiva pueden

incorporarse en las respuestas autoinmunitarias si el estmulo
tiene la potencia suficiente.
CD - AutoAg
+ Seal
coestimuladora = act. CT
autorreactiva
TLR9 (AutoAg como ligando
. Apoptosis = CB
interiorizan CG no metiladas
produciendo seal BCR +
coestimuladora)
Procesos inflamacin/necrosis
libera Ag y permite
activacion de CT y CB.

Sitios en el organismo tienen

privilegio inmunitario

No inducen
ataque
inmunitario

Blancos
de
ataque
inmunitar
io

Injerto de tejidos no
inducen rechazo
Antgenos
abandonan los sitios
privilegiados int. CT
Inducen tolerancia

Si los LT
autorreactivos son
activados en otros
sitios. Estos autoAg
pueden convertirse
en blancos

Comunicacin atpica con el

organismo:
LEC no pasa vasos linfatico
convencional
Barreras (no linf. Ind.)
Citocina (TGFB)
Expresin ligando Fas

Enfermedades
autoinmunes
mediadas por CT

DM1 / Esclerosis
mltiple
Th1

Ci

as
n
i
toc

LED

Inmuno-modulacin
T reg : prevencin
de Enf.
autoinmunitarias

Th1/Th2

intrnseca

R= programada
apoptosis

Extrnseca

Treg Vs
Tact/APC
Supresin
inmune
dominante

Regulacin
tolerancia

mismo tejido o
sean
presentados
por la misma

Las clulas Treg

CD4
CD25
desempean una
funcin protectora
en
varios
sindromes
Autoinmunitarios.

T autorreactivas

ectos funcionales en Treg:

Treg

inhiben CTE

ARTRITIS REUMATOIDE ACTIVA

Supresin de CT efectoras in vitro

No suprimi la secrecin de citocinas inflamatorias (TNF e INF)

 General
Especifica
Clasificacin
Enfermedad
es
autoinmunit
arias

Aislada
Asociada
***

*
Mecanismos
patolgicos

*
*

*
Fijacin receptor Fc
Activacin del complemento
CD8
ANEMIA HEMOLITICA - Anti-RBC
CD4
Fc (Fagocitosis y destruccin)
Clulas y tejidos (Ag superficie)
Anticuerpos

Activacin del complemento

(hemolisis IV)
Estimulo de receptores
ENFERMEDAD DE GRAVES - Anti-TSHR

Bloqueo de receptores

MIASTENIA GRAVE Anti-receptor

acetilcolina

Cuando la enfermedad puede transmitirse de un individuo enfermo a uno sano

mediante la transferencia de autoanticuerpos o de clulas T autorreactivas,
confirma que la enfermedad es de carcter autoinmunitario y a la vez demuestra
la participacin del material transferido en el proceso patolgico.

Experimental
Transmisin

CT
especficas
para
la
protena
bsica
de
la
mielina
median
la
inflamacin del cerebro en
la
encefalomielitis
autoinmunitaria
experimental (EAE).

Transplacentaria
Enfermedades
autoinmunitarias mediadas
por Anticuerpos

ermedad autoinmunitaria CRNICA se presenta a travs de retroalimentacin p

Presencia cte de
auto-Ag
Inflamacin
crnica

Fase de
Activacin
inicial con
pocos Auto-Ag

Liberacin del
Secuestro

CB acta
como APC
y presenta
a CT

Ampliacin de
la R=I
DISEMINACI
N DE
EPITOPO
Eptopos
crpticos

Citocinas

Lesin en tejidos

Quimiotaxis
MCF + Neu

INCAPACIDAD
DE ELIMINAR EL
AUTOANTIGENO

Proceso
autodestruc
tivo y
evolutivo.

 E.A. Monognicas (Lig. X o

recesivas)

Defectos que afectan los

mecanismos de
Deleccin o sobreexpresin de
tolerancia
genes
Predisposicin
Gnero/edad

MHC

Grupos
tnicos/razas
Pases
Continentes

Distribucin
geogrfica
Perdida
toleran
cia

Estado
socioeconmico
Dieta
Toxinas (metales
pesados)
Frmacos (LED, Anemia
hemoltica)
Ambiente favorable
Infecciones

Mimetismo molecular
Fiebre
reumtica
Anemia
hemoltica

1
2

INTERRELACION DE LA AUTOINMUNIDAD
Combinacin de alelos de susceptibilidad y
GENES DE SUCEPTIBILIDAD
mltiples loci.

Asociacin con DM1, TH,

GD, AR, EM (interrelacin
gnica del locus en C2)

IPEX

(sndrome
de
desregulacin
inmunitaria,
poliendocrinopata
y
enteropata
ligado
al
cromosoma X)

CTLA-4 es producida por

las clulas T activadas y es
un receptor inhibidor de
molculas coestimuladoras
de B7

Defectos que afectan

los mecanismos de

FoxP3. Factor decisivo en la

diferenciacin de algunos tipos
de clulas T reguladoras.
Inflamacin alrgica grave
poliendocrinopata
autoinmunitaria
(DM/Dermatitis/HT)
diarrea secretora
anemia hemoltica
Trombocitopenia
Muerte en etapa temprana
(1-2 aos)
XLAAD (sndrome de autoinmunidad y desregulacin alrgica ligado al

Defectos que afectan

los mecanismos de

2
LED. No hay
depuracin
de cel.
Apoptsicas
o complejos
inmunitarios.

CD22.
molcula
reguladora
que impide
la
sobreactivaci
n del
sistema
inmune

Defectos que afectan

los mecanismos de

Defectos que afectan

los mecanismos de

Los genes del MHC tienen una funcin importante en el

MHC II
control de la susceptibilidad a las enfermedades
MHC I
autoinmunitarias (EA).

Asociaciones del serotipo de HLA y el sexo con la

susceptibilidad a presentar EA.

# pte portadores del alelo

HLA-DR2
tiene
un
efecto
protector
dominante

HLADR3/DR
4 excesiva.
**

** Estos alelos
estn muy
vinculados con los alelos de
HLA-DQ
(DQ
cido
asprtico:57:valina, serina o
alanina
-carecen de puente

MECANISMOS DE RECHAZO INMUNOLGICO A LOS TRASPLANTES

RECHAZO:es

causado por las respuestas inmunitarias a los aloantgenos presentes

en el injerto, los cuales son protenas que varan de un individuo a otro
dentro de una misma especie.

Del mismo individuo: AUTOINJERTO Autloga

De un individuo geneticamente identico: ISOINJERTO Singnica
De un individuo de la misma especie: ALOINJERTO Alognica
De individuos de especie diferente: XENOINJERTO Xenognica

El rechazo
de injerto es
una
respuesta
inmunitaria
mediada
principalmen
te por las
clulas T

Rechaz
o
agudo
10-13 d

Respuest
a de
memoria
6-8 d

Ag ABO y Rh
Ag H menor

Los antgenos de H
menor son pptidos
derivados
de
protenas
celulares
polimorfas unidas a
las molculas del MHC
de clase I.

Incluso
la
compatibilidad
completa
en
trminos de MHC
no
garantiza
la
supervivencia
del

Los aloantgenos de
los
rganos
injertados
se
reconocen
de
dos
maneras diferentes.

ACTIVACIN MCF

LESION TEJIDOS Y
FIBROSIS
DESARROLLO DE
RESPUESTA DE AC
A UN INJERTO
ALOANTICUERPOS

MHC
Ag H menor

El
inicio
del
rechazo
del
injerto
por
lo
general
implica
la migracin de
clulas
presentadoras
de antgeno del APC-Leucocitos pasajeros

Especificas para clulas del injer

CITOTOXICIDAD DIRECTA

Anticuerpos
preexistentes
contra
antgenos
del injerto donado
pueden ocasionar
rechazo
hiperagudo
de
injerto.

Injerto
vascularizado
Ac ABO
Presenc
ia de
sangre
desO2

Cascada de complemento y coagulacin

Rechazo crnico aloingerto renal

(Vida 8 aos)
Lesin por isquemia y re perfusin
CT alorreactivas + MCF + citocinas
Proceso inflamatorio + fibrosis +
cicatrizacin + perdida de la funcin

El
feto
es
un
aloinjerto
que
es
tolerado
de
forma
repetida

1. Ocupa un sitio protegido

por una barrera de tejido no
inmungena.
Trofoblasto no expresa protenas

El
feto
porta
antgenos de MHC
y
de
histocom.
menor
paternos
que difieren de los
de la madre

Producen Ac
contra las
protenas
de MHC del padre y los
antgenos eritrocticos

2.
Favorece
una
respuesta
inmunosupresora
local en la madre.

clsicas del MHC I y II, por lo que

es resistente al reconocimiento y al
ataque
por
las
clulas
T
maternas.
Trofoblasto podra ser protegido del
ataque por los linfocitos NK
mediante la expresin de HLA-G.
(se une a receptores inhibidores)
La placenta tambin podra aislar al
feto de las clulas T de la madre
por el agotamiento de triptofano,
provocando
menor
reactividad
celular (enzima indoleamina 2,3dioxigenasa)

El
epitelio
uterino
y
trofoblasto secretan citocinas,
entre las que se incluyen el
TGF-, la IL-4 y la IL-10.

1. Introduction
Central tolerance

Peripheral
tolerance

(thymic epithelial cells

and
hematopoietic myeloid
cells)

liminate self-reactive T cells

Lymphocytes with low affinity to self antigens

Foxp3+ Tregs
Clonal anergy or clonal deletion

 Plays an essential role in the

development
and
function
of
CD4+CD25+ Regulatory T cells.
suppressing autoreactive CD4+ T
cells
FOXP3 act as a transcriptional
repressor of cytokine promotors.

I
PAffected newborn boys
E
X

mmunosuppressive therapy

one marrow transplantation

The function of Foxp3 is highly

conserved among mammal
species.

OX40 and CD30

Disease pathogenesis
Autoimmune conditions

These signaling pathways include

upregulating genes that control T cell
division and survival, and promoting
transcription of cytokine genes, as
well as expression of cytokine
receptors.

OX40

OX40 activates
PI3k/PKB, NFB1, and NFAT
pathways.

central memory cells (Tcm)

effector memory cells (Tem)

Suppressive events

CD30/TNF
RSF8

Is a cell membrane protein

TNF-R family
Expressed by activated T and B cells.
Interact with TRAF2 and TRAF5 (NFkappa-B)
Play a role in the regulation of cellular

2. Material and methods

B6.CgFoxp3sf/J (sf)
sf Thy1.1 mice
Rag1/ mice
Foxp3DTR mice

X-linked recessive inheritance

Lethality at 21-25 days
Wasting syndrome
Exfoliative dermatitis
Small, thickened ears

Wild type
C57BL/6

Wild type

Scurfy

Scurfy

B6.Cg-Foxp3sf/J (sf)

Severe autoimmune disorder

Hepatosplenomegaly
Enlarged lymph nodes
Multi-organ lymphocytic infiltrates
Elevated cytokines
(GM-CSF, IL-2, -4, -5,-6,-7,-10, IFN-, TNF)

2.2. Rescue and therapy

experiments

Anti-CD4
antibody
[YTS177.9].
Reported to block
MHC class II T cell
responses in vivo
and in vitro and
induces tolerance.

Express a
simian
diphtheria
toxin R. DT
administration
results in
ablation of
Foxp3+CD4+T
reg cells.

To evaluated the develop of typical autoimmune diseas

2.3. Adoptive T cell transfer

strain

hymocytes are CD8-CD4LB IgM or IgD -/-

mutation produce no
mature T cells or B cells
have no CD3+or T cell
receptor (TCR)

2.4. Flow cytometry

Labeled:
ethidium
monoazide
photolysis
propidium
iodide
DAPI.
CD3
CD90
CD8

CD30
Foxp3
CD44
OX40

CD4
CD62L Antibodies
CD69

Fc receptors were
blocked using
CD16/32

2.5. qPCR

On negatively
isolated splenic
CD4+ T cells

Tnfrsf4
5-gcttggagttgactgtgttcc-3
5- gggtctgctttccagataagg-3
Tnfrsf8
5-tggagaggaggttgtcaagtc-3
5-gaggaaggcagctcacagat-3

2.6. Histological analysis and

scoring

The severity of
autoimmunity:
Inflammatory
cell
Infiltration
Necrosis

Analysed
using the
program
AutMess

Liver
Lung
Pancraetic
Skin
Sirius Red staining

collagen
fibres in
liver
sections

2.7. ELISA

antimouse IgG

OptEIA TMB

AMA titers
antimitochondrial
antibodies
Optical density
450 nm vs 570
nm.

90% of patients
with
autoimmune
primary
biliary
cirrhosis
develop

2.8. Cytometric bead assay

(CBA)

Mouse Th1/Th2 Multiplex Kit

BMS FlowCytomix Software

Serum levels of:

IL-5
IFN-

Fig. 1. Anti-CD4 treatment rescues sf

mice devoid of functional Foxp3+
Tregs.

Developed
typical
autoimmune
disease
(exfoliative dermatitis of
the tail, ears, growth
retardation and lethargy)
2- 3 w

Rescue at 21 days
of age
Lacked
signs
autoimmune desease.

To examine whether anti-CD4 treatment also reduced the autoimmune

damage of these organs,

Inflammation scores
of liver, lung and
pancreas were all
clearly reduced in
YTS177.9-treated

A single injection of anti-CD4 inhibits systemic autoimmunity independent of

Foxp3 Tregs in vivo.

Fig. 2. CD4 blockade tolerizes autoreactive sf

CD4+ T cells. Isotype- and YTS177.9- treated
mice were sacrificed at 8-9 days of age.

For explored if
anti-CD4induced
tolerance on a
cellular level.

polyclonal
CD4 T cell
activation
(62L/69)

Analyzed AMA as an
indirect activity of
autoantigen-specific CD4
T cells.

Sf
IFN- and IL-5

Tx
IFN- and IL-5

CD44+CD62Llow T cells

Foxp3DTR
DT 0 day
Isotype 0,28 d

Peripheral blood

Fig. 3. Anti-CD4 treatment is required concurrent to

regulatory T cell depletion in order to prevent
autoreactive T cell activation and autoimmunity.

anti-CD4 antibody
28
d
anti-CD4
antibody on
day 0.
Efficient depletion of
Foxp3 Tregs in all DTtreated

Reduced CD4 T cell

activation
7
days
after the first DT

augmented the
Survival
no inhibition of T cell
activation

median life expectancy of foxp3DTR

mice in contrast to Prior treatment
and isotype treatment

anti-CD4 antibody can only

induce
tolerance
if
autoreactive
T
cells
are
stimulated simultaneously

Fig. 4. YTS177.9 directly tolerizes

scurfy CD4+ T cells in a recessive and
non-infectious fashion
The

adoptive
transfer of sf
CD4 T cells into
Rag1-/- mice is
sufficient
to
transfer
fulminant
autoimmunity

The diseasefree survival

improved

investigated the
characteristics
of
anti-CD4induced Foxp3independent
tolerance
in
detail.

RAG -/sf(YTS177.9)

To distinguish
between recessive
T
cell-intrinsic
tolerization
and
classical dominant /
infectious tolerance

sf(Iso)

develope
d disease

Isotype / sf CD4 T
YTS177.9 / CD4 T
cells
cells
+
+
untx
sf
Th1.1 CD4
untx sf Th1.1 CD4

Mixtures of sf
CD4 T cells were
analyzed prior to
injection

Thy1.1 vs.
CD4
expression
of
CD4+CD3+ T
cells

55 days after
mixed
T cell transfer

the frequencies
of sf CD4 T cells
among
the
mixture had not
changed
sf(YTS177.9)
have no survivalor
proliferation
defect compared
to sf(Iso)

Cx.
YTS177.9induced tolerance is
transient, T cellintrinsic and non
infectious
in
the
absence
of
Foxp3

Fig. 5. Anti-CD4 therapy ameliorates

established autoimmunity in sf mice

anti-CD4 treatment could

1ameliorate
?
pre-established
disease

autoimmune

every 4 days

TX. were more mobile

but they had to be
sacrificed
due
to
progressing
skin
inflammation (ears)

REST was not altered by anti-CD4 therapy

liver
pathology
was clearly
reduced
following
anti-CD4
therapy

serum

(AMA)
associated
with
autoimmune liver diseases
were reduced.

Fig. 6. Reduced liver damage in sf

mice following YTS177.9 therapy.

Chronic liver
inflammation
resulting
in
fibrosis
and
eventually
liver
cirrhosis

Evaluated

collagen
deposition in liver
sections from sf
mice

CX.
anti-CD4
therapy not only
reduced
inflammation but
also
secondary fibrosis
and
tissue

fibrosis

reduced Sirius
Red staining

Tx

OX40was
strongly
expressed
3-4
weeks
old

CD4 T cells

splenic CD4 T cells

Fig. 7. CD4 blockade impairs CD30

and OX40 expression by scurfy CD4+ T
cells.
No Tx

Hypothesized:
1
anti-CD4
could
attenuate
signals
from one or both
receptors.

anti-CD4
treatment reduces
OX40 and CD30
expression in vivo

expression

Sf YTS177.9 of both OX40and CD30

mRNA

YTS177.9 reduced OX40 protein

expression on CD4 T cells when compared
to isotype-treated sf mice

Cx. anti-CD4-mediated tolerance

acts in part via dampening
pathogenic OX40 and CD30
signals

Anti-CD4 antibodies can inhibit autoimmunity in mice

completely devoid of functional Foxp3+ Tregs (therapy could
not control all manifestations of autoimmunity).
investigate whether the combination of anti-CD4 therapy with
additional immunosuppressive therapies can result in enhanced
control of autoimmunity.
Represent a novel therapeutic option for IPEX patients or to