12.

Ciclo celular y crecimiento

de poblaciones microbianas

Crecimiento a nivel individual.

Crecimiento de poblaciones: medida
de masa y n de clulas. Crecimiento
balanceado. Cultivo continuo. Curva
de crecimiento en sistema cerrado

Introduccin al crecimiento
microbiano (I)
Crecimiento: incremento ordenado de todos los
componentes del sistema biolgico aumento
de la masa celular multiplicacin celular
En microorganismos que se dividen por fisin o
por gemacin aumento del n de individuos
En microorganismos cenocticos aumento
del tamao de la colonia cenoctica

Introduccin al crecimiento
microbiano (II)
Puntos de vista de estudio:
Individual: ciclo celular
Replicacin y segregacin de cromosomas
Sntesis de nuevos materiales de las envueltas (ver tema 5)
Coordinacin de la replicacin y la divisin celular

Poblacional
Cintica del crecimiento
Factores que afectan al tiempo de generacin (g)
Factores ambientales que afectan al crecimiento
Fsicos (tema 13)
Qumicos (tema 14)

Ciclo celular
Secuencia de acontecimientos identificables
que ocurren desde que surge una nueva clula
hasta que sta se divide en dos hijas
En el ciclo procaritico existen perodos
C: replicacin del ADN cromosmico
D: formacin del septo y divisin celular
Fase innominada, equivalente a la G1 eucaritica
C y D son relativamente constantes cuando
disminuye g lo hace a expensas de G1

Ciclo celular en funcin del

tiempo de generacin
g>C+D: existe G1 (intervalo antes de la replicacin). C
y D estn perfectamente diferenciados
g=C+D: no existe G1. Cada ronda de replicacin
empieza al terminar una divisin celular
g<C+D: rondas de replicacin de un ciclo empiezan
antes de que haya terminado la divisin celular del
ciclo anterior (C y D parcialmente superpuestas)
g<C: no se detecta fase D. La sntesis de ADN es
continua en todo el ciclo. Replicacin dicotmica de los
cromosomas

Control del ciclo celular en

Escherichia coli (I)
Dos secuencias paralelas de
acontecimientos controlan el ciclo:
Un control es sensible a una masa celular
umbral, y est implicado en desencadenar
la replicacin cromosmica
Otro control es sensible a una longitud
celular umbral, y tiene que ver con el
reparto de los cromosomas y la formacin
del tabique

Fase C

Fase D

Control del ciclo celular en

Escherichia coli (II)
Inicio de la replicacin (sensible a masa umbral):
Unidades de DnaA (+ATP) se unen a oriC. El oriC tras
la replicacin queda hemimetilado, y queda
secuestrado en la membrana (para evitar la accin
de la metilasa Dam)

Inicio de tabicacin (sensible a longitud umbral y

a la separacin de los cromosomas):
Formacin en el centro celular de un crculo de FtsZ,
que se va contrayendo
Ensamblaje en ese plano del divisoma, incluyendo la
PBP3 sntesis de PG del tabique

Medida del crecimiento por

masa celular (I)
Mtodos directos:
Determinacin del peso hmedo
Determinacin del peso seco
Determinacin del N total
Determinacin de algn componente caracterstico:
PG
ADN, ARN
Protenas
ATP
Clorofilas (en fotosintticos)

Medida del crecimiento por

masa celular (II)
Mtodos indirectos:
Consumo de nutrientes
QO2 (consumo de oxgeno)
QCO2 (consumo de dixido de carbono)

Produccin de ciertos metabolitos

Produccin de cidos orgnicos

Mtodos turbidimtricos (pticos):

Espectrofotmetro (mide luz transmitida)
Nefelmetro (mide luz dispersada)

Espectrofotmetro en medida
del crecimiento

Medida del nmero de

individuos (I)
Mtodos directos:
Cmara de Petroff-Hauser (para bacterias)
Cmara de Thoma (para levaduras y clulas
mayores que las bacterianas)
Contadores electrnicos de partculas
(contador Coulter)

Cmara de Petroff-Hauser

Medida del nmero de

individuos (II)
Mtodos indirectos:
Recuento de viables por siembra de
muestras de diluciones en placas de Petri
Recuento de viables a partir de grandes
volmenes de suspensiones diluidas: se
hacen pasar por filtros de nitrocelulosa o
equivalentes (ej.: sistema Millipore), y se
incuban sobre medio slido

Dispersin sobre la superficie de placas Petri

Medio en sobrefusin se aade a una muestra

Recuento de viables por

siembra en placas Petri

Alcuotas 0.1 ml

10 x

106

Sistema de filtracin en

membrana de Millipore

Filtracin por membrana de

Millipore de una muestra

Crecimiento balanceado
(=equilibrado) (I)
El incremento por unidad de tiempo
constituyentes de la poblacin es un valor
constante y similar en cada caso:
velocidad de aumento del componente = K
[cantidad de ese componente] (cintica orden 1)

Es decir: el n de clulas, la masa u otros

componentes se duplican en un mismo lapso de
tiempo
tiempo de generacin (g)

Crecimiento balanceado
(=equilibrado) (II)
Otra manera: todos los constituyentes
aumentan proporcionalmente por un
mismo factor en la unidad de tiempo
coeficiente exponencial de crecimiento
Se deduce fcilmente la relacin entre y
el tiempo de generacin (g):
= 0.693/g (en h-1)

Cultivo continuo
(sistema abierto)
cultivo balanceado mantenido por
tiempo indefinido por un sistema abierto
de flujo compuesto por:
Una cmara de cultivo de volumen constante
A la que llega un suministro de nutrientes
desde una cmara reservorio
Desde la cmara de cultivo se elimina parte
del cultivo y de sustancias txicas por un
dispositivo de rebosadero

Medio fresco
desde reservorio

Vlvula para
controlar el flujo
f (en ml/h)

Prdida neta cls:

-dx/dt = xD
Crecimiento bruto:
dx/dt = x
Crecimiento neto: dx/dt =
x - xD = = x (-D)
En equilibrio = D; luego
dx/dt = 0 y x se hace
constante

D = f/v
(en h-1)
v
x

f (en ml/h)

SR

Reservorio de medio
fresco, con un sustrato
limitante (SR)
Vlvula de control del flujo

D = f/v

Suministro de aire
Filtro de aire

Cmara de cultivo

v
Receptor del efluente rebosado

g
DM

DC

Crecimiento en sistemas
cerrados lquidos
El ms habitual en laboratorio
Cultivo en frascos, tubos, etc.
No hay aporte nuevo de nutrientes ni es
posible eliminar los productos de desecho
del cultivo
Se desarrolla a travs de una curva
caracterstica de crecimiento7

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