CONSIDERACIONES RELATIVAS A LAS

ENDOTOXINAS
Las endotoxinas son lipopolisacridos que se encuentran
en la envoltura celular externa a la pared celular de las
bacterias Gram negativas
pueden presentarse como grupos de molculas de
lipopolisacridos asociadas a microorganismos vivos, a
fragmentos de microorganismos muertos, o a la capa
mucosa de polisacridos que rodea las bacterias de la
biopelcula, o como molculas libres
Los niveles de endotoxina pueden reducirse al mnimo
controlando la entrada de endotoxinas libres y
microorganismos en el agua de alimentacin y
reduciendo al mnimo la proliferacin microbiana dentro
del sistema.

CONSIDERACIONES RELATIVAS AL
RECUENTO MICROBIANO
Criterios al seleccionar un mtodo para controlar el
contenido microbiano de un sistema de agua para
uso farmacutico.

Estos criterios incluyen la sensibilidad del mtodo

La gama de tipos de organismos o especies recuperados
La capacidad global de procesamiento de muestras
Los perodos de incubacin, el costo y la complejidad
metodolgica.

El nmero de bacterias provenientes del plancton

detectables en una muestra recolectada en un envase
para muestras escrupulosamente limpio por lo general
descender a medida que transcurra el tiempo.
Tambin puede suceder el efecto opuesto si el envase
de la muestra no est escrupulosamente limpio y
contiene una concentracin baja de algn nutriente
microbiano que podra promover el crecimiento
microbiano en el envase de la muestra.

Es mejor realizar las pruebas tan pronto como sea posible

despus de recolectarlas. Si no fuera posible analizar la muestra
dentro de las 2 horas despus de su recoleccin, la muestra
debe mantenerse a temperaturas de refrigeracin (de 2 a. 8)
durante un mximo de 12 horas para mantener los atributos
microbianos hasta el anlisis.

En situaciones en las que incluso esto no es posible

(como cuando se usan laboratorios contratados
externos), el anlisis de estas muestras refrigeradas
debe realizarse dentro de las 48 horas con
posterioridad a la recoleccin de las muestras.

ENFOQUE CLSICO DE CULTIVO

Prueba
de
vertido
en
placa,
la
dispersin en
placa,
la
filtracin por
membranas y
la prueba del
nmero ms
probable.

Son
menos
costosos
y
proporcionan
una
excelente
capacidad
global
de
procesamient
o
de
muestras.

Se
puede
aumentar
la
sensibilidad del
mtodo
mediante el uso
de muestras de
mayor tamao.
Esta estrategia
se usa en el
mtodo
de
filtracin
por
membrana.

 Existen dos formas bsicas de medios disponibles para

realizar el anlisis microbiolgico tradicional:
Los medios con alto
contenido de
nutrientes
como por ejemplo el agar
de recuento de placa
(TGYA) y el agar mHPC(anteriormente agar
m-SPC)
estn concebidos como
medios generales para
conseguir el aislamiento y
la enumeracin de las
bacterias heterotrficas o
"copiotroficas".
la incubacin a entre 30
y 35, durante 48 a 72
horas. En ningn caso la
incubacin
debe
ser
inferior a 48 horas

Los medios con

bajo contenido de
nutrientes
como por ejemplo el
agar R2A y el agar NWRI
(HPCA)
pueden ser beneficiosos
para aislar las bacterias
oliqotrficas
de
crecimiento lento y las
bacterias que requieren
niveles
bajos
de
nutrientes para crecer
de manera ptima".
Incubacin entre 20 y
25durante
perodos
ms largos (de 5 a 7
das). En ningn caso
debe ser inferior a 96
horas

ENFOQUES "INSTRUMENTALES"
Las tcnicas de recuento visual microscpico, y
enfoques similares por barrido de lser
automtico y las metodologas radiometricas,
impedomtricas y las basadas en la bioqumica.
Las ventajas podran ser su precisin y exactitud
o la velocidad de la disponibilidad del resultado
de la prueba en comparacin con el enfoque de
cultivo clsico. En general, los enfoques
instrumentales permiten obtener resultados con
tiempos de espera menores, lo que facilita el
control oportuno del sistema.

METODOLOGAS SUGERIDAS

 Los niveles de accin considerados mximos son

de 100 ufc por mL para el Agua Purificada y 10
ufc por 100 mL para el Agua para Inyeccin.