Lic.

David Barroso
Lic. Rhaider Baptista
Lic. MsSc. Zulitza Pimentel

Definicin
Es una tcnica que combina la
especificidad de los anticuerpos con
la sensibilidad de un ensayo
enzimtico. Esta tcnica es utilizada
para medir tanto antgenos como
anticuerpos, de manera cualitativa,
semicuantitativa y cuantitativa.

Fases de la respuesta inmuno

humoral

Tipos de ELISA
1.- Anticuerpos Marcados
ELISA Directo
ELISA Indirecto
ELISA Sndwich

1.- Antgeno Marcado

ELISA Competitivo

ELISA INDIRECTO
15
130
HORA
Minutos
Minutos
TA
H2SO4 TA
TA

Lectura de 450 a 620nm

STOP
H2O2 y Substrato TMB

Lavado
Buffer

H2O
Oxidacin
de TMB
2

ANTICUERPOS CONTRA
INMUNOGLOBULINA HUMAN
ACOPLADO CON PEROXIDAS
ANTICUERPOS CONTRA ANTIGE
PRESENTE EN LA MUESTRA
ANTIGENO ESPECIFICO FIJAD
AL FONDO DEL POZO

ELISA DE CAPTURA

H2SO4

15
1 HORA
Minutos
TA
TA

Lectura a 450 a 620

H2O2Oxidacin de OPD
Lavado
tampn
PET

H2O2 y Substrato TMB

Anticuerpos marcados
con peroxidasa

antigeno presente en la mues

Anticuerpo Especifico dirigid

Contra el Antigeno a Determin

ELISA COMPETITIVO

H2SO4

STOP
H2O2 y Substrato
Antgeno de la muestra del
H2O2Oxidacin de TMB

paciente y antgeno conjugado

a peroxidasa (comercial)

Anticuerpo espeficico, fijado

al fondo del pocillo

ELISA COMPETITIVO

H2SO4

STOP
H2O2 y Substrato

H2O2Oxidacin de TMBAntgeno de la muestra del

paciente y antgeno conjugado

a peroxidasa (comercial)

Anticuerpo espeficico, fijado

al fondo del pocillo

Elementos del ELISA

Fase slida

Enzimas

Sustratos

Lavados

Revelador de la
actividad enzimatica

Anticuerpos

Monoclonales
Policlonales
Pptidos sintticos
Antgenos recombinantes

Produccin de anticuerpos
policlonales

Purificacin

Extraccin del suero

Diferencias entre
Monoclonales y Policlonales

Especificaciones

Policlonales

Monoclonales

Epitopes que
reconocen

Varios

nico

Especificidad

Variable

No variable

Rendimiento

Variable segn la
especie

Baja en tejidos
Alta en lquido asctico

Costo

Bajo

Alto

Antgeno

Completo

Extracto total

Fraccin purificada

Pptido sinttico

Elementos del ELISA

Fase slida

Enzimas

Sustratos

Lavados

Revelador de la
actividad enzimatica

Materiales de la fase slida

Sistemas de Lavados

Componentes
Cantidad
Nmero de ciclos

Elementos del ELISA

Fase slida

Enzimas

Sustratos

Lavados

Revelador de la
actividad enzimatica

Sistema de revelado Ags - Acs

Enzimas

Sustratos
1. Compuestos
2. Fcil
3. No

solubles

de manipular

resulten txicos

4. Bajo

costo

Elementos del ELISA

Fase slida

Enzimas

Sustratos

Lavados

Revelador de la
actividad enzimatica

Revelador de la actividad
enzimtica

cidos fuertes
Bases fuertes
cido Sulfrico 0,5N
1N
2N

Factores que afectan la

colorimetra
Temperatura

Exposicin a la luz

Mezclar bien
los pocillos

Tiempo

Lectura de los resultados

Lector de placas de ELISA

D.O.

Calculo e Interpretacin de
los resultados

Calculo de la media de los

controles

Calculo del Cut off

Resultado (D.O./C-off)

Interpretacin de los resultados