Mezclado, agitacin,

aireacin y
TRANSFERENCIA DE MASA
en biorreactores
Asignatura: Ingeniera de
Biorreactores

Contenido
1

INTRODUCCIN

FENMENOS DE
TRANSPORTE EN
BIORREACTORES

SOLUBILIDAD
DEL OXGENO EN
AGUA

DETERMINACIN DE
VTO Y KLA EN
BIORREACTORES

VELOCIDAD DE
TRANSFERENCIA DE
OXGENO EN
BIORREACTORES
2

INTRODUCCI
N

Los procesos de agitacin y mezclado tienen una importancia

fundamental en la Industria.
Por definicin, dichos procesos son distintos (la agitacin y el
mezclado).
La Agitacin se puede definir como: el movimiento
(circulatorio y axial) inducido a un fluido dentro de un
contenedor cuyo objetivo puede ser incrementar la velocidad
de transferencia de calor, momento o de materia.
Mezclar es obtener una distribucin espacialmente
homognea de dos o ms fases inicialmente separadas.
4

El mezclado es una operacin unitaria cuyo objetivo

fundamental es conseguir una distribucin lo ms
homognea posible de los distintos componentes de una
mezcla.
La homogeneidad de una mezcla lquida (que contenga
partculas slidas, lquidos inmiscibles o burbujas de gases
poco miscibles) puede caracterizarse mediante el grado de
homogeneidad a travs de la siguiente relacin:

El grado de homogeneidad no debe ser el eje rector en el

diseo de biorreactores e impulsores ya que no incorpora la
variable tiempo. Es decir, no establece el tiempo con el
que se alcanza el 90% de homogeneidad, lo cual tiene ms
que ver con el concepto de tiempo de mezcla.
El eje rector en la seleccin o diseo de impulsores en
biorreactores debera ser la satisfaccin de las demandas de
calor, masa y momento que establezca el sistema
microbiano, conceptos que tienen ms que ver con los
objetivos de la agitacin que con los del mezclado.

No es el objetivo, por el momento, demostrar que los

consumos de energa necesarios para alcanzar la
homogeneidad son menores que los requeridos para
alcanzar la satisfaccin de la velocidad de transferencia de
oxgeno (por ejemplo) en un biorreactor.
Baste decir, por ahora, que la energa necesaria para alcanzar
la homogenizacin de los slidos en un biorreactor, ser
menor a la requerida para alcanzar una eficiente transferencia
de oxgeno en el sistema.

Con que agitar y mezclar?

Dada la dificultad que implica la gran cantidad de sustancias

(lquidos, slidos y gases) que se pueden encontrar en un
mosto de fermentacin, el diseo y la optimizacin de
agitadores se confan, en gran medida, a la experimentacin.
La agitacin y el mezclado del caldo de cultivo en un
biorreactor, normalmente se logra a travs de la rotacin de
dispositivos mecnicos (impulsores) sumergidos en el
lquido (biorreactores agitados mecnicamente). Dicha
rotacin favorecer tanto la distribucin de las burbujas del
aire (inyectado en el fondo del biorreactor) como el aumento
del rea de transferencia de masa de las burbujas al
romperse estas en burbujas ms pequeas.
8

La agitacin y mezclado en biorreactores agitados

neumticamente se logra exclusivamente por la inyeccin del
aire en el fondo del mismo. Estos biorreactores carecen de
impulsores que distribuyan y rompan las burbujas.
La energa y la calidad de mezclado varan sustancialmente
entre estos dos tipos de biorreactores.
La calidad del mezclado y las velocidades de transferencia de
masa alcanzados en los biorreactores agitados mecnicamente
siempre sern mayores a los obtenidos en biorreactores
agitados neumticamente, pero a un costo mayor (mayor
consumo de energa).
9

La seleccin o diseo de los impulsores depender de:

El estado de los componentes (slidos, gases y lquidos)
La proporcin (o concentracin) de las partculas
El tamao y friabilidad de las partculas (resistencia a los

esfuerzos de corte)
En los biorreactores agitados mecnicamente los impulsores
ms comunes se observan en la Figura 1.

10

Figura 1.- Impulsores empleados en los biorreactores agitados mecnicamente

11

Con los tipos de impulsores mostrados anteriormente, se

realiza la agitacin y mezclado de las burbujas de aire en el
biorreactor y se logra una determinada velocidad de
transferencia de oxgeno en el sistema.
En la prctica es virtualmente imposible manejar por
separado la agitacin, el mezclado, la aireacin y la
velocidad
de
transferencia
de
oxgeno.
La velocidad de transferencia de oxgeno es quiz el aspecto
ms importante en un biorreactor, ya que con la aireacin y
con la agitacin debe garantizarse una ptima velocidad de
transferencia de masa (oxgeno), de momento (movimiento
del lquido) y de calor en el sistema.
12

FENMENOS DE
TRANSPORTE EN
BIORREACTORES

13

Los fenmenos de transporte que ms

comnmente se encuentran en biorreactores son:
Transporte de masa (Nutrientes y oxgeno)
Transporte de calor (generacin y remocin

durante la operacin y durante la

esterilizacin)
Transporte de momento (movimiento del
lquido)
14

Cules son las ecuaciones con las que se calculan

las distintas velocidades de transferencias?
Transferencia de masa
difusin :
conveccin :

NA = KLA(CL*-CL)

Transferencia

(1)

de movimiento

= - dv / dy

Transferencia de calor
q = - k . dT /dy
15

TRANSFERENCIA DE MASA
(OXGENO) EN BIORREACTORES

16

El fenmeno de transferencia de masa que ms

problemas representa en biorreactores es el referente a
la transferencia del oxgeno desde las burbujas de aire
hasta el medio lquido, y de aqu hasta el interior de la
clula donde ser ocupado.
El oxgeno es: un nutriente importante, gaseoso y
muy poco soluble en agua.
El oxgeno slo es utilizado por el microorganismo
cuando est disuelto.
17

La solubilidad del oxgeno en medios de cultivo

contenidos en biorreactores con dificultad puede pasar
de los 10 mg/l.
Si en un biorreactor se alcanza una adecuada
transferencia de oxgeno, se garantiza la transferencia
de masa de compuestos de mayor solubilidad.
Esta es la razn de la sinonimia entre Velocidad de
transferencia de oxgeno y Velocidad de transferencia
de masa
18

Para un sistema binario, la primera ley de Fick establece que una

especie "A" difunde en la direccin de la zona de mayor a la de
menor concentracin.
Matemticamente la Primera Ley de Fick, expresada como flux
de difusin molar relativa a la velocidad molar promedio de la
mezcla (JA*), se representa como:
J A * CD AB X A

(2)

o en trminos de un flux molar relativo a un eje de coordenadas

estacionarias (nA) como:
(3)
19

La forma de esta ltima ecuacin es muy caracterstica, ya que

establece que el flux molar es funcin tanto de un trmino
convectivo como de un trmino molecular.
Por otro lado, a partir de la ecuacin de continuidad para un
sistema fsico de difusin binario en coordenadas
rectangulares, en los que no hay reaccin qumica (RA = 0), en
los que la velocidad es cero y para densidad y difusividad
constantes se obtiene la Segunda Ley de Fick:
(4)
La primera y segunda ley de Fick son la base para explicar el
fenmeno de transferencia de masa en un sistema fsico dado.
20

La velocidad de transferencia de masa depende de la

naturaleza de la movilidad del fluido (rgimen laminar, de
transicin o turbulento). La transferencia de masa ocurre
independientemente de la regin en la que se mueva el fluido.
En el flujo laminar (debido a la naturaleza ordenada del
movimiento del fluido) se hace posible el clculo analtico de
los coeficientes de transferencia de masa.
Sin embargo, muchas de las situaciones reales en biorreactores
involucran movimiento del fluido en rgimen turbulento,
condiciones en las que es imposible "deducir analticamente"
los coeficientes de transferencia de masa (incapacidad de
describir las condiciones matemticas del fluido en
movimiento).
21

TEORAS DE TRANSFERENCIA DE MASA

Se han postulado distintas teoras que tratan de explicar el

fenmeno de transferencia de masa en regmenes turbulentos,
entre las que destacan:
la de la uni y doble pelcula
la de la penetracin
la de renovacin de la superficie.
Todas ellas han sido postuladas para ajustar datos
experimentales y estn basadas en las leyes de Fick para
procesos de difusin.
22

Todas las teoras indican que cuando un compuesto

contenido en un fluido difunde en otro, se genera una
determinada ruta y a su vez una serie de interfaces
entre los fluidos.
La ruta que sigue el oxgeno desde las burbujas de aire
hasta el interior de la clula en donde se lleva a cabo el
proceso de respiracin es el que se muestra en la Figura
2.

23

Medio lquido
Burbuja de
aire

CO2
CO2

O2
Gaseoso

CO2

O2

CO2
O2

Clula

disuelto

Figura 2: Ruta que sigue el oxgeno desde las burbujas de aire

hasta el interior de la clula.

24

El oxgeno debe atravesar sucesivas pelculas e interfases, que provocan

una serie de resistencias a la transferencia de masa, ocasionando una
cada en la velocidad de transferencia de masa. La pelcula que presente
la mayor resistencia al paso del oxgeno ser la que controle el proceso
de transporte.
Las resistencias estn determinadas por los obstculos que se oponen a
la transferencia y, para el caso de la transferencia de oxgeno, son:
12345678-

la pelcula gaseosa
la interfase gas-lquido
la pelcula lquida
el lquido
la pelcula lquida que rodea al slido (microorganismo)
la interfase lquido- slido
la fase semilquida contenida en las clulas
los sitios donde ocurre la reaccin bioqumica
25

Sin embargo, las principales resistencias a la transferencia son las

que se establecen en las inmediaciones de la superficie gas-lquido,
mismas que se pueden observar en la Figura 3:

Figura 3.- Resistencias principales en la transferencia de

oxgeno desde las burbujas de gas hasta el lquido.
26

TEORA DE LA UNIPELCULA
Es la ms vieja y discutida de todas pero es la ms
utilizada.
Parte del hecho de que cuando un fluido fluye en
rgimen turbulento sobre una superficie slida, la
velocidad del fluido ser cero justo sobre su superficie,
formndose una capa o pelcula viscosa del fluido de
espesor , en la cual se establece un gradiente de
concentraciones para cualquier soluto que difunda desde
la superficie del slido hasta el seno del lquido (Figura
4).
27

Figura 4.- Suposiciones de la teora de la pelcula

28

En virtud de la existencia de la capa viscosa, el trmino convectivo

de la ecuacin de la primera ley de Fick (ecuacin 3) se hace cero
y la solucin de la misma es:

nA

D AB

(C A1 C A 2 )

que al compararla con NA = KLA(CL*-CL)

(5)
(6)

se deduce que la Teora de la Unipelcula establece que el

coeficiente de transferencia de masa de la pelcula lquida (KL) es
directamente proporcional a la difusividad (DAB) e inversamente
proporcional al espesor de pelcula efectiva ().

DAB
KL

(7)
29

TEORA DE LA DOBLE PELCULA

Para el caso de un sistema lquido-gas, la teora de la unipelcula
fue ajustada, conocindose este modelo como de "la doble
pelcula".
Esta es la ms ampliamente utilizada para describir la
transferencia de oxgeno que toma lugar desde las burbujas de
aire hasta el medio de cultivo en un biorreactor.
Esta teora supone que cuando una burbuja se mueve en rgimen
turbulento en un lquido, en las inmediaciones de la interfase
gas-lquido se forman dos pelculas estancadas (una de gas y
una de lquido) como puede verse en la Figura 5.
30

Figura 5.- Suposiciones de la teora de la doble pelcula

31

La transferencia resulta de un proceso de difusin molecular

en estado estacionario entre las dos pelculas estancadas, en
la que la velocidad de transferencia est controlada por las
velocidades relativas de difusin entre las pelculas de la
interfase.
La transferencia toma lugar gracias a una fuerza impulsora
que se establece para ambas pelculas.
Para el caso de la pelcula gaseosa, el gradiente que se
establece va desde una presin parcial en el seno del gas
"pO2" hasta una presin parcial del gas que est en ntimo
contacto con la interfase "pO2i".
Fuerza impulsora pelcula gaseosa: (pO2 - pO2i)

32

mientras que para la pelcula lquida va desde una

concentracin de oxgeno disuelto en el lquido que est en
ntimo contacto con la interfase "CLi" hasta una concentracin
de oxgeno disuelto en el seno del lquido "CL" (concentracin
correspondiente a la presin parcial pO2*).
Fuerza impulsora de la pelcula lquida: (CLi - CL)
En la que:
CLi es la concentracin de oxgeno disuelto correspondiente
a la presin parcial pO2i (de acuerdo con la ley de Henry)
CL es la concentracin de oxgeno disuelto correspondiente
a la presin parcial pO2* (de acuerdo con la ley de Henry)
33

El flux de oxgeno (nO2) ser igual para ambas pelculas ya que no

puede haber acumulacin en la interfase:
(8)
En esta ecuacin kG y kL son los coeficientes de transferencia de
masa de las pelculas gaseosa y lquida respectivamente.
Puesto que en la prctica es imposible medir la concentracin de
oxgeno disuelto y la presin parcial del gas en la interfase gaslquido, es necesario introducir el concepto de "coeficientes
globales de transferencia de masa" tanto para la fase gas como
para la lquida, como se muestra a continuacin:
(9)
34

En la ecuacin 9, KG y KL son los coeficientes globales de

transferencia de masa de las pelculas gaseosa y lquida
respectivamente.
Utilizando la ley de Henry y combinando adecuadamente las
ecuaciones, se puede llegar a demostrar la relacin que
guardan los coeficientes globales con los de pelcula:
kL(CLi - CL) = KL(CL* - CL)

(10)

35

Despus de realizar una serie de combinaciones y aplicando la ley

de Henry, se llega a demostrar que para el caso de la pelcula
lquida se cumple lo siguiente:

1
1
1

K L Hk G k L

(11)

Mientras que para la pelcula gaseosa se cumple lo siguiente:

1
1
H

K G kG k L

(12)

Las ecuaciones 11 y 12 sirven para conocer cual ser la resistencia

que limite la velocidad de transferencia de masa (con base en el
sistema-gas lquido de trabajo).
36

Para el caso de gases muy solubles en agua (como el

amoniaco), el valor de la constante de Henry es tan pequeo
que el trmino "H/kL" de la ecuacin 12 se puede despreciar
y el proceso de transferencia estar controlado por la
resistencia que presente la pelcula gaseosa.
Para el caso de gases poco solubles en agua (como el
oxgeno), la constante de Henry es muy grande y el trmino
"1/HkG" de la ecuacin 11 tiende a cero y el proceso de
transferencia est controlado por la resistencia de la pelcula
lquida.

37

As, la expresin para la velocidad de transferencia de oxgeno de

la fase gas a la lquida se puede escribir como:
(13)

Por lo que se reduce a la expresin de la teora de la unipelcula:

DAB
KL

(7)

38

Entre las limitaciones de la teora de la pelcula (uni o doble) se

encuentran las siguientes:
i) en casos reales se ha observado una dependencia ms
pequea del coeficiente "k" con "DAB", de la forma:
k (DAB)m donde el exponente "m" puede variar de 0.8 a 0.9
dependiendo de las circunstancias.
ii) en sistemas reales, la velocidad de transferencia no es
constante con respecto al tiempo, como lo establece la
primera ley de Fick que es la que se toma como base para
esta teora.

39

TEORA DE LA PENETRACIN
Como consecuencia de las limitaciones de la teora de la pelcula se
desarroll la teora de la penetracin, que incorpora una conexin
para el comportamiento en rgimen no permanente.
En dicha teora se describe el fenmeno de transferencia que toma
lugar en un sistema lquido-gas en el que las burbujas ascienden a
travs del lquido y en su recorrido transfieren un componente al
seno de este.
Supone que el tiempo de exposicin entre los fluidos (necesario para
llevar a cabo el fenmeno de transferencia) es tan corto que el
gradiente de concentraciones mencionado en la teora de la pelcula
(caracterstico del estado estacionario) puede no desarrollarse.
40

Esquema de la Teora de la Penetracin

41

Condiciones lmites para la teora de la penetracin

42

Esta teora parte de la segunda Ley de Fick, que al resolverla en

sus condiciones frontera, establece que la velocidad de
transferencia de oxgeno ser:
nO 2 2

DO 2

( C Ai C A0 )

(14)

o lo que es lo mismo, establece que el coeficiente de transferencia

"KL", es una funcin directa del coeficiente de difusividad elevado
a una potencia de 0.5 e inversamente proporcional al tiempo de
contacto () elevado a la misma potencia:

D
K 2 O2
L

(15)

43

TEORA DE LA RENOVACIN DE LA SUPERFICIE

Esta teora solo incorpora una modificacin a la teora de la
penetracin al no considerar constante el tiempo de contacto ,
es decir, considera que el mosaico de elementos de volumen de
lquido que cubren la superficie de la burbuja tienen una
distribucin totalmente azarosa de tiempos de contacto.
De tal manera que al resolver la segunda Ley de Fick, se llega a:

nO 2

DO 2 f ( C Ai C A0 )

(16)

44

por lo que esta teora establece que el coeficiente de

transferencia de masa de la pelcula lquida "KL", es una
funcin directa tanto de la velocidad fraccional de reemplazo
de elementos de volumen de lquido sobre la superficie ("f) y
del coeficiente de difusividad, ambos elevados a una potencia
de 0.5:
(17)

45

VELOCIDAD DE TRANSFERENCIA DE
OXGENO

46

En la ecuacin NA = KLA(CL*-CL)
el trmino NA en realidad viene representando la Velocidad
de Transferencia de Oxgeno (VTO) del biorreactor, por lo
que podra escribirse como:
VTO = KLA(CL*-CL)
En dicha ecuacin, cada una de las variables representan:
VTO = Velocidad de transferencia de O2 [=] ML-3T-1(gO2/lh)
KLA = Coeficiente global de transferencia de masa [=] T-1(h-1)
(CL*-CL) = Fza. imp. para la transferencia [=] ML-3 (gO2/l)
47

 KL = Coeficiente de transferencia de masa de la pelcula lquida

[=] LT-1(m/h)
A = rea interfacial especfica de transferencia de masa de las
burbujas [=] L-1(m-1)
CL* = Concentracin de oxgeno disuelto en equilibrio con la
presin parcial del gas que se burbujea en el lquido [=] ML3
(mgO2/l)
CL = Concentracin de oxgeno disuelto en equilibrio con la
presin parcial del gas que se burbujea en el lquido [=] ML3
(mgO2/l)
NOTA: En rojo aparecen las unidades ms comnmente
empleadas en el argot, aunque para el clculo debern emplearse
48
unidades congruentes.

DEMANDA DE OXGENO
Durante el curso hemos aprendido a calcular la demanda de
nutrientes por parte de los microorganismos, entre ellas la del
oxgeno (DO = QO2x), la cual puede ser calculada con las
siguientes ecuaciones:

Si se conocen los parmetros cinticos del sistema microbiano,

entonces se podr saber cul ser la mxima velocidad a la que
se consumir el oxgeno en la biorreaccin.
49

Supongamos que se cuenta con un sistema microbiano creciendo

sobre un determinado medio de cultivo contenido en un biorreactor,
con las siguientes caractersticas:
se desea alcanzar una concentracin celular mxima de 30 g/l
= 0.35 h-1
YO2 = 1.2 g/g
el valor mximo con el que se estara consumiendo el oxgeno en el
biorreactor sera:
(QO2x)max = 8.75 gO2/lh
Este valor deber ser la mnima velocidad de transferencia de
oxgeno (VTO) que deber presentar el biorreactor para satisfacer
la demanda del sistema biolgico.
50

Los casos posibles en un biorreactor son:

1. VTO < DOmax Existir limitacin de oxgeno
2. VTO = DO
Caso ideal
3. VTO > DOmax Gasto excesivo de energa (Sobrediseo).
Para este caso la VTO deber ser:
(QO2x)max = 8.75 gO2/lh = VTO =KLA(CL*-CL)

51

Desde el punto de vista del diseo se deber

elegir un valor entre el 5 y el 10% arriba del
calculado.
Si se escoge 5% entonces el valor de la VTO
deber ser de:
VTO = KLA(CL*-CL) = 9.2 gO2/lh
CMO ALCANZAR A DICHO VALOR?

52

Los valores del coeficiente global de

transferencia de oxgeno KLA y de la fuerza
impulsora (CL*-CL) en un biorreactor, estn en
funcin de las variables de operacin con las
que se trabaje.
As, manipulando apropiadamente las
condiciones de operacin de un biorreactor, se
podr conseguir que la VTO satisfaga la DO
impuesta por el sistema biolgico.
53

Para alcanzar
una VTO de 9.2
gO2/lh, hay una
combinacin
infinita de
valores de
KLA y (CL*-CL).
Algunos valores
pueden verse en
la Tabla 1

Tabla 1.- Algunos

valores de KLA y (CL*CL), cuya multiplicacin
da un valor de 9.2
gO2/lh
VTO
(gO2/lh)

9.2

KLA
(h-1)

(CL*-CL)
(gO2/l)

1
10
100
1000
5000

9.2
0.92
0.092
0.0092
0.00184
54

Son realistas todos los valores de KLA y

(CL*-CL) mostrados en la Tabla 1?
En los biorreactores existen lmites en los valores tanto
del coeficiente global de transferencia de masa [KLA]
como de la fuerza impulsora [(CL*-CL)], que todo
Ingeniero Biotecnlogo, Farmacutico o en Alimentos
debe conocer.
Como ya se ha dicho, los lmites estn en funcin de las
condiciones de operacin de los mismos.
55

Establecimiento de los valores lmites de KLA y

(CL*-CL)
Valor mximo del KLA
Biorreactores
clasificados
como
excelentes
o
sobresalientes en su desempeo, llegan a presentar
valores de KLA de alrededor de 1000 a 1200 h-1 bajo
consumos de energa muy altos. Un muy buen biorreactor
oscilar entre 1000 y 700 h-1 con altos consumos de
energa. Los biorreactores industriales presentan valores
del orden de 600 a 200 h-1 bajo consumos de energa
moderados.
56

En la lmina anterior se establece que el valor del KLA

est en funcin directa de la energa introducida al
sistema. En la literatura existen variadas y mltiples
correlaciones entre el KLA y la potencia puesta en el
sistema (correlaciones que se vern ms adelante)
dependiendo de los volmenes del biorreactor, de su
configuracin geomtrica, del tipo de biorreactor, del
medio utilizado, del tipo de impulsores, etc., etc., etc.
De esta manera, el lmite mximo en el valor del KLA
podr establecerse con base en estas consideraciones,
pero nunca sobrepasarn los valores antes mencionados.
57

Valor mximo de la fuerza impulsora (CL*-CL)

El valor mximo de esta fuerza depender de los valores
de CL* y de CL. En una biorreaccin aerbica el valor de
CL no debe ser cero, pues se limitara la misma, por tanto
deber estar por arriba de aqul valor por debajo del
cual el microorganismo limite su velocidad de
crecimiento, valor que se conoce como concentracin
de oxgeno disuelto crtica o CLcrit.
Sin embargo, el valor mximo de esta fuerza (CL*-CL)
puede alcanzar los 628 mgO2/l , aunque en realidad este
es un valor muy extremo de CL*.
58

Para alcanzar este valor (628 mgO2/l) debern manejarse

condiciones extremas de presin (9 atmsferas totales)
y deber emplearse oxgeno puro. Tales condiciones
hacen que este valor sea muy costoso y riesgoso
tcnicamente. La gruesa pared del biorreactor -de un
grosor tal que sea capaz de soportar la presin- y la
utilizacin de oxgeno puro -burbujeado en el lquidohacen que el proceso resulte riesgoso y caro, adems que
a estas presiones el sistema biolgico podra limitarse.
Entonces: Cul ser el lmite mximo de esta fuerza?
59

Para establecer el valor lmite de la fuerza impulsora,

tomaremos el valor de CL como muy cercano a cero y
condiciones de operacin realistas tales como:
Temp: 10 a 40C
Altura del lquido: 0.25 a 8 m
Aireacin: con aspersin de aire en el fondo.
Presin manomtrica: 0 a 2 atm
Presin hidrosttica (por la altura del lquido): 0.1 a
0.8 atm
Presin atmosfrica: 0.71 a 1 atm
Presin total: 0.9 a 4 atm
60

As:
Tomando las condiciones de operacin que hagan que
CL* sea mxima, el valor de (CL*-CL) ser de: 0.0457
gO2/l. (PT = 4 atm; T = 10C)
Tomando las condiciones de operacin que hagan que
CL* sea mnima, el valor de (CL*-CL) ser de: 0.0063
gO2/l. (PT = 0.9 atm; T = 40C)
Resumiendo: 0.0063 gO2/l < (CL*-CL) < 0.0457 gO2/l.
6.3 mgO2/l < (CL*-CL) < 45.7 mgO2/l.
61

SOLUBILILDAD DEL OXGENO EN

AGUAS (CL*)

62

CL* es la concentracin de oxgeno disuelto en equilibrio con

la presin parcial del gas que se burbujea en un lquido
(agua o medio de cultivo).
En otras palabras, es la mxima solubilidad de oxgeno que se
puede alcanzar en agua (por ejemplo) una vez que se han
especificado las condiciones o variables de operacin, si estas
cambian, la CL* cambiar a un nuevo valor.
Las variables de operacin que afectan el valor de la CL* son:
1) Temperatura (de manera inversa)
2) Presin parcial de oxgeno en el gas (de manera directa)
3) Concentracin de slidos disueltos (de manera inversa)
63

1 y 2) TEMPERATURA Y PRESIN PARCIAL DE OXGENO

La temperatura y la presin parcial de oxgeno estn relacionadas
mediante la ley de Henry. Esta establece que la concentracin de
oxgeno disuelto a alcanzar en agua ser directamente
proporcional a la presin parcial de oxgeno del gas que se
burbujea e inversamente proporcional a una constante (constante
de Henry). Esta constante vara con la T de acuerdo a la Tabla 2.
CL* = (1/H)pO2

Ley de Henry

(19)

Tabla 2.- Valores de la constante de Henry a distintas

temperaturas, para el sistema oxgeno-agua

Temperatura
(C)
H
l(atm)/gO2

10

15

20

25

30

35

40

14.34 16.36 18.39 20.47 22.55 24.63 26.72 28.52 30.01

64

La presin parcial de un componente (pA) en un gas est dada por la

fraccin mol del componente (xA) por la presin total a la que est
sujeto el gas pT.

pA = (xA)pT
a su vez, la presin total (pT) a la que est sometida una burbuja de
gas en un lquido contenido en un biorreactor, ser la suma de las
presiones atmosfrica (patm), hidrosttica (ph) y manomtrica (pman).

pT = patm + ph + pman
Aplicado al sistema oxgeno-agua ser:

pO2 = (xO2)(patm + ph + pman)

65

Si es aire el gas a emplear, su fraccin mol de oxgeno es

de 0.21 mol de oxgeno por cada mol de aire.
(xO2) = 0.21
De esta manera, con la Ley de Henry se tiene la
posibilidad de calcular la CL* a cualquier temperatura y
presin.

66

Ejemplo:
a) Calcule la concentracin de oxgeno disuelto mxima que se
alcanzar en el fondo de un biorreactor de columna, si se hace
burbujear aire en el fondo del mismo y la altura del lquido (agua
pura) en el biorreactor es de 15 m y est a una temperatura de
25C? El biorreactor se encuentra en el D. F. y el lquido est
sujeto a una presin manomtrica de 0.75 atm.
b) Calclela en la parte superior (superficie) bajo las mismas
condiciones del inciso anterior?
SOLUCIN:

a)
La ecuacin a emplear ser: CL* = (1/H)pO2
El valor de H a 25C es: H = 24.63 l-atm/gO2
La presin parcial de oxgeno se calcula con:
pO2 = (xO2)(patm + ph + pman)

67

Valor de la fraccin mol de oxgeno: (xO2) = 0.21

Las presiones son:
patm = 0.7711 atm
En el D.F.
ph = 1.5 atm
Aplique 1 atm por cada 10 m.
pman = 0.75 atm
Dato
pT = 3.0211 atm y por consiguiente:
pO2 = (xO2)(patm + ph + pman) = 0.21*3.021 = 0.63443 atm
Por tanto:
CL* = (1/H)pO2 = (1/24.63)(0.63443) = 0.02576 gO2/l = (25.8 ppm)

b)
Para este caso la presin hidrosttica es cero. Por analoga se
obtiene:
CL* = (1/H)pO2 = (1/24.63)(0.21*1.5211) = 0.01297 gO2/l (12.9768

3) SALES DISUELTAS

El efecto que presentan los solutos disueltos sobre la

solubilidad del oxgeno en agua, se explica mediante el
efecto conocido como "Salting Out", por lo que a mayor
concentracin de solutos, menor ser la solubilidad del
oxgeno en agua.
En los medios de fermentacin se encuentran en solucin
diversos tipos de sales nutrientes, por lo que la concentracin
de oxgeno disuelto ser menor que en agua pura.
En la tabla 3 se especifican las concentraciones de oxgeno
disuelto (CL*) en agua a distintas presiones, temperaturas y
concentraciones de cloruros.
69

Tabla 3.- Concentracin de oxgeno disuelto en aguas a distintas

temperaturas, presiones y concentraciones de cloruros

PRESIN
ATMOSFRICA
(atm)

CLORUROS

TEMPERATURA

(ppm)

(C)
0

CONCENTRACIN DE
OXGENO DISUELTO.
(mg/l).
14.64

10

11.42

20

9.31

30

7.86

40

6.98

12.97

10

10.13

20
30

8.30
6.86

40

--

11.32

10

8.98

20

7.42

30

6.13

40

--

11.29

1.0

10,000

20,000

a) = presin promedio en
la capital de la Repblica
Mexicana
70

SISTEMAS DE MEDICIN DE OXGENO DISUELTO

El oxgeno disuelto
experimentalmente.

puede

estimarse

medirse

La estimacin se realiza a travs de la Ley de Henry (como ya se

vio con anterioridad) o con ecuaciones empricas obtenidas para
tal fin a diferentes presiones, temperaturas y concentracin de
solutos (a esta estimacin se le conoce como mtodo
emprico).
Dada la complejidad y diversidad de los medios de cultivo, la
estimacin solo da una idea muy aproximada del valor de la
concentracin de oxgeno disuelto, limitando el uso de las
ecuaciones de correlacin.
71

La medicin experimental se realiza con diferentes

mtodos que cuantifican el oxgeno disuelto en aguas.
La medicin puede ser directa (mtodo de Winkler) o
indirecta (mtodo electromtrico).
Mediciones directas
El de Winkler es un mtodo iodomtrico en el que el
Yodo que se libera en la reaccin es equivalente al
contenido original de oxgeno disuelto en una muestra.
El Yodo se titula con una solucin valorada de tiosulfato
de sodio usando almidn como indicador.
72

Es un mtodo sencillo, de fcil aplicacin y exacto, pero

los resultados de los valores pueden llegar a conocerse
en un tiempo aproximado de 15 a 30 minutos despus
de analizar la muestra, adems existen varios
compuestos interferentes que impiden su uso con
medios de cultivo: (nitritos, cloro libre, hipocloritos,
mercaptanos, sulfitos, tiosulfato, sustancias orgnicas
fcilmente hidrolizables en soluciones alcalinas, color
intenso o turbiedad, flculos biolgicos, etc ).
En el mtodo modificado de Winkler, se adiciona azida
de sodio para eliminar solo las interferencias
provocadas por los nitritos.
73

Un mtodo que presenta menos interferencias a los

componentes de los medios de cultivo es el de la Oxidasa del
cido ascrbico.
Existen otros mtodos qumicos reportados en la literatura, sin
embargo, todos ellos a pesar de ser necesarios como referencia
para los mtodos de medicin indirecta, adolecen de tres
desventajas principales:
i) son consumidores de tiempo y se deben tener cuidados
especiales durante la toma y el manejo de la muestra que
eviten posteriores disoluciones de oxgeno en el lquido
ii) son sensibles a varias sustancias interferentes
iii) no pueden ser aplicados en sistemas de control
inmediato del oxgeno disuelto.
74

Mediciones indirectas
MTODO ELECTROMTRICO
Con el advenimiento de electrodos de oxgeno disuelto, este
mtodo se ha convertido en el ms moderno y rpido para la
deteccin en lnea de la concentracin de oxgeno disuelto no
solo en medios de cultivo en una biorreaccin, sino tambin en
corrientes de ros, lagos y mares.
Este mtodo es prcticamente insensible a compuestos tales
como cloro libre, hipocloritos, mercaptanos, sulfitos, tiosulfato,
sustancias orgnicas fcilmente hidrolizables en soluciones
alcalinas, color intenso o turbiedad, flculos biolgicos, etc., que
interfieren con los mtodos directos como el de Winkler
modificado.
75

Los electrodos se construyen con dos metales nobles que

conforman el ctodo y el nodo (Platino-Plata, por ejemplo),
unidos por un puente electroltico. La cmara del electrodo se
llena con una solucin de electrolito y se sella con una fina
membrana de poli-tetra-fluor-etileno (P.T.F.E.)
cuidadosamente fijada para evitar contaminacin del
electrolito o del medio con este ltimo.
En la presencia de oxgeno una pequea corriente,
proporcional a la concentracin de oxgeno en la muestra,
fluye a travs de los electrodos. La seal es digitalizada,
registrada y mostrada por el sistema de medicin.

76

Algunos electrodos deben mantenerse a temperatura

constante durante las determinaciones y otros poseen
compensacin de la temperatura.
En realidad, lo que los electrodos de oxgeno registran
es la actividad del oxgeno en agua no la
concentracin de oxgeno disuelto (aunque actividad y
concentracin sean directamente proporcionales).

77

CALIBRACIN DEL ELECTRODO.

Los electrodos se calibran a 100 y a 0% del nivel de
saturacin. El 100% se logra cuando el lquido est
saturado con oxgeno a la temperatura y presin de
trabajo, mientras que el cero se logra despus de un
cierto tiempo de slo estar burbujeando nitrgeno puro
en el lquido de prueba. Aunque la concentracin de
oxgeno disuelto en agua disminuye con la temperatura,
la calibracin del electrodo a distintas temperaturas, se
efecta de la misma manera aunque el valor del 100%
de saturacin corresponda a valores distintos de
concentracin de oxgeno disuelto.
78

La gran mayora de los electrodos empleados actualmente en

los biorreactores son de tipo polarogrfico y se utilizan tanto
para medir la concentracin de oxgeno disuelto en medios
lquidos como para realizar estudios de transferencia de
masa y para determinar experimentalmente el coeficiente de
transferencia de oxgeno de ciertos biorreactores.
La estabilidad operacional, tiempos de respuesta, veracidad y
precisin en la medida bajo las condiciones de operacin de
los biorreactores, hacen de ellos una herramienta
indispensable en los mismos.

79

DETERMINACIN DE LA VELOCIDAD DE
TRANSFERENCIA DE OXGENO (VTO) Y
DEL COEFICIENTE GLOBAL DE
TRANSFERENCIA DE OXGENO (KLA) EN
BIORREACTORES

80

En secciones anteriores se ha visto que la velocidad de

transferencia de oxgeno de la fase gas a la fase lquida
(VTO) en un biorreactor se expresa mediante la siguiente
ecuacin:
VTO = KLA (CL*-CL)
Dicha velocidad estar en funcin tanto de la cantidad de
energa puesta en el sistema como por otros factores o
variables, como puede verse en la Tabla x.

81

Tabla X.- Listado de variables de operacin que afectan la velocidad de

transferencia de oxgeno en un biorreactor
Variable

Relaciones geomtricas establecidas en el

biorreactor [(HL/DT), (DT/Di), espaciamiento entre
impulsores, etc.]
Tipo y nmero de impulsores
Tipo de difusor y dimetro de poro del mismo
Presin total ejercida (PT)
Temperatura (T)
Concentracin de slidos disueltos y no disueltos
en el lquido o Fuerza inica (I)
Tensin superficial del lquido ()
Viscosidad del lquido ()
Densidad del lquido ()
Velocidad de rotacin de los impulsores (N)
Flujo de aire (Fa)

Parmetro que afecta

KL, A, CL*
KL,

A
CL*
KL, CL*
CL*
KL
KL
KLA
KL, A
KL, A
82

Una vez establecido el sistema biolgico (el

microorganismo), la temperatura, el medio de cultivo, el
tipo de biorreactor, su configuracin geomtrica y su
volumen, as como el tipo de difusor, las variables de
operacin se reducen a 3 para los tanques agitados (PT,
N y Fa) o a 2 para los de columna y airlift (PT, y Fa) ya
que todas las dems variables quedan definidas.
Lo anterior pone de manifiesto que la VTO que alcance
un biorreactor slo ser funcin de la energa puesta en
el sistema, la requerida para operar el biorreactor.
83

En biorreactores agitados mecnicamente, habrn las

siguientes necesidades energticas:

84

En los biorreactores de tipo

columna y air-lift la energa
introducida para agitar
mecnicamente el lquido (N)
desaparece, pues la agitacin
del lquido se logra de forma
neumtica (por la inyeccin del
aire en el fondo del biorreactor)
y slo quedaran las
necesidades energticas para
airear el lquido (a un cierto
valor de Fa) y para operar el
biorreactor a un valor de
presin total PT
85

Al ser la VTO el resultado de la multiplicacin de 2

parmetros diferentes [KLA y (CL*-CL)], la energa
impactar de manera diferente a cada uno de ellos.
En sntesis, se puede decir que dependiendo de la cantidad
de energa con que trabaje o vaya a ser trabajado un
biorreactor, este presentar un determinado valor de KLA y
(CL*-CL) y por consiguiente un valor de VTO.
Es posible conocer los valores anteriores por 2 vas: 1)
mediante la determinacin experimental; 2) relacionando
las variables de operacin de un biorreactor con los
valores experimentales conocidos de KLA y (CL*-CL),
llamadas correlaciones empricas.
86

Como cualquier equipo, es posible disear y construir

un biorreactor con la intencin que presente un cierto
valor mximo de KLA y VTO (esta es la finalidad del
curso). Entonces, si lo diseamos y construimos de
esta manera: Cmo aseguramos que el biorreactor
ya construido alcanza el valor de diseo?
Para esto, es posible caracterizarlo
experimentalmente con la finalidad de conocer
cmo varan el KLA y la VTO al modificarse cada una
de las variables de operacin.
87

La determinacin experimental del KLA y la VTO que

presente un biorreactor, puede realizarse manejndolo
con agua (sistema fsico) o directamente en una
fermentacin (sistema biolgico)

En sistemas fsicos
Determinacin
experimental del
KLA y VTO en
biorreactores

En sistemas biolgicos

88

MTODOS DE
DETERMINACIN EN
SISTEMAS FSICOS

89

En esta seccin se desarrollarn los siguientes mtodos de

determinacin:
Del sulfito
Dinmico
Balance

90

MTODO DEL SULFITO

Este mtodo se basa en la oxidacin del sulfito de sodio (Na2SO3)
con el oxgeno disuelto, en presencia de sales de cobre o de
cobalto como catalizadores.

2 Na2SO3 + O2

2 Na2SO4

La caracterstica principal de esta reaccin es que es

extraordinariamente rpida, tanto que la concentracin de
oxgeno disuelto en la solucin ser cero (CL* = 0).
En otras palabras, las molculas de oxgeno que alcanzan a
transferirse de la fase gas a la lquida reaccionan de manera
inmediata con el sulfito de sodio transformndose en sulfato.
rO2 >>> (VTO)max
91

Se ha reportado que esta velocidad es independiente de la

concentracin de sulfito en el intervalo comprendido entre 0.8 y
0.02 M.
Esta caracterstica ofrece la ventaja de realizar experimentacin
manejando concentraciones de sulfito comprendidas en dicho
intervalo.
Dado que la concentracin de sulfito de sodio en el biorreactor
disminuye con respecto al tiempo (el oxgeno que entra con la
corriente de aire oxida cierta cantidad de sulfito a sulfato), si se
inicia una primera determinacin experimental con una
concentracin de sulfito de 0.8 M, al trmino de la misma la
concentracin de sulfito ser menor a 0.8 M pero muy seguramente
mayor a 0.02 M, por lo que bien puede llevarse a cabo otra
determinacin experimental con otras condiciones de operacin.
92

Procedimiento experimental
Se carga el biorreactor hasta un cierto volumen de operacin
con una solucin de sulfito de sodio (Na2SO3) de
concentracin entre 0.8 y 0.6 molar. Se agrega sulfato de
cobre (CuSO4.5H2O) como catalizador hasta alcanzar una
concentracin de 1x10-3 M y se establecen en el biorreactor
unas condiciones de operacin tales como temperatura (T),
presin (PT), velocidad de rotacin de los impulsores (N) y
flujo de aire (Fa), mantenindose constantes durante el tiempo
que dure una determinacin experimental de la VTO y del
KLA (tomar muestras a intervalos de 3 a 10 minutos
dependiendo de los valores de VTO y del KLA que presente el
biorreactor).
93

Bajo condiciones constantes, el biorreactor alcanzar un

cierto valor de VTO y de KLA, procedindose a la
determinacin experimental.
Una determinacin experimental se realiza bajo la siguiente
forma:
Se toman muestras del biorreactor a intervalos de tiempo de 3
a 7 minutos, agregndose rpidamente un volumen conocido
de muestra (1 ml) a matraces conteniendo un volumen
constante de una solucin con exceso de iodo (I2) para
transformar rpidamente el sulfito residual de las muestras a
sulfato.
94

2 Na2SO3 + 2 I2 + 2 H2O

2 Na2SO4 + 4 HI

El iodo residual que no reaccion, se valora con tiosulfato de

sodio (Na2S2O3) valorado en presencia de almidn como
indicador, anotndose el volumen gastado de tiosulfato.
4 Na2S2O3 + 2 I2

2 Na2S4O6 + 4 NaI

Observacin: Conforme pasa el tiempo, la concentracin de sulfito

en el biorreactor disminuye (porque reacciona con el oxgeno), lo
que har que el exceso de iodo residual aumente en los matraces,
traducindose finalmente en un aumento del gasto del tiosulfato
con el tiempo. Pueden extenderse las determinaciones
experimentales hasta que la concentracin de sulfito no caiga por
debajo de 0.02 M.
95

RESUMEN DE ECUACIONES
2 Na2SO3 + O2
2 Na2SO3 + 2 I2 + 2 H2O
4 Na2S2O3 + 2 I2

2 Na2SO4
2 Na2SO4 + 4 HI
2 Na2S4O6 + 4 NaI

La primera reaccin se lleva a cabo en el biorreactor.

Las otras 2 se efectan fuera del biorreactor.
96

En la figura x se
observa el volumen
gastado de tiosulfato
VS tiempo, durante 2
determinaciones de la
VTO y del KLA en un
biorreactor. La lnea
continua se obtiene
con ciertos valores de
N y Fa, mientras que
la lnea discontinua se
obtiene a valores ms
altos de N o Fa.

12

10

Gasto de tiosulfato (ml)

0
0

10

15

20

25

30

Tiempo (min)

Figura x.- Gasto de tiosulfato VS tiempo

97

Con la pendiente de la grfica (m) se obtiene el valor de la VTO.

Una mayor pendiente representa una mayor VTO, como
consecuencia de un mayor valor de KLA.

de donde se obtiene la VTO

ecuaciones en las que Vts, Nts, Vm, Eq y t representan el

volumen de tiosulfato gastado, la normalidad del tiosulfato, el
volumen de muestra tomado, el equivalente de oxgeno a
tiosulfato (1/4) y el tiempo, respectivamente.
98

Finalmente, el KLA se obtiene despejndolo de la ecuacin x,

resultando:

VENTAJAS (V) Y DESVENTAJAS (DV):

V:
Es el ms empleado por los fabricantes de biorreactores. Cuando ofrecen que
determinado biorreactor alcanza tales valores de KLA y VTO, es porque
caracterizaron el biorreactor con tal mtodo.
Ofrece valores por arriba de lo esperado, puesto que la reaccin es muy
rpida.
DV:
No aplica con sistemas de fermentacin.
Se debe evitar disoluciones de oxgeno durante el manejo de las muestras.
Evitar tener en solucin sustancias interferentes con la reaccin.
El sulfito es muy corrosivo
Caro
99

MTODO DINMICO
Este mtodo se basa en registrar y analizar (con electrodos de
oxgeno) , la variacin que ocurre en la concentracin de oxgeno
disuelto (CL) al pasar de un valor mnimo (cero o casi cero) a uno
mximo (cercano a la CL*).
Al elegir este mtodo, deben tenerse presentes las caractersticas de
los electrodos a emplear, tales como la estabilidad operacional y los
tiempos de respuesta, ya que estos afectan los valores obtenidos.
Se ha sugerido que para una adecuada determinacin del KLA, la
inversa del tiempo de respuesta (1/tr) del electrodo debe ser mayor
que el valor de dicho coeficiente.
1/tr > KLA
100

De esta manera, un electrodo de oxgeno cuyo tiempo de

respuesta sea de 5 segundos, solo ser adecuado para determinar
coeficientes de transferencia por abajo de 0.2 seg-1 o 720 h-1
El tiempo de respuesta del electrodo de 5 segundos es excelente
(normalmente la media del tiempo de respuesta de los electrodos
que se tienen en los distintos laboratorios o en las industrias,
oscila alrededor de los 10 segundos)
En que tipo de biorreactores podremos recomendar este
mtodo?

101

Figura x. Equipo empleado en el mtodo dinmico sin clulas

102

Procedimiento experimental
Se carga el biorreactor con un determinado volumen de agua (o
medio de cultivo) a temperatura conocida y constante.
Se establece un valor conocido de velocidad de giro del impulsor
(N) y se burbujea nitrgeno en el fondo del biorreactor para bajar la
concentracin de oxgeno disuelto hasta un valor muy cercano a
cero (puede ser cero).
Alcanzada esta condicin, se para el flujo de nitrgeno y se
establecen las condiciones de aireacin y agitacin que se deseen
emplear (Fa, N, Temp, etc).
Se registra, con el medidor, el aumento de la concentracin de
oxgeno disuelto (subir hasta CL* a una determinada velocidad).
103

Se grafica CL VS t, obtenindose perfiles como los mostrados en la

figura x.

Figura x. Perfil de CL VS t.

104

La velocidad volumtrica de transferencia de oxgeno en el sistema

(fsico), est establecida por la siguiente ecuacin:
*

VTO dC L / dt K L A(C L C L )
para condiciones operacionales constantes (Fa y N), el KLA es
constante, por lo que la ecuacin anterior se puede integrar entre
lmites definidos para obtener:

ln

( CL * CL0 )
*

( CL CL )

K L A ( t t0 )

ecuacin que es la de una lnea recta con pendiente igual a KLA y

ordenada al origen cero.

105

VENTAJAS (V) Y DESVENTAJAS (DV):

V:
Es un mtodo rpido, simple y no destructivo
Puede emplearse agua o el medio de cultivo
DV:
Requiere de nitrgeno en grandes volmenes, por lo cual slo
se recomienda para escala pequea.
Hay que considerar el tiempo de respuesta del electrodo y las
nuevas resistencias que se generan por la introduccin del
electrodo mismo
106

MTODO DEL BALANCE DE OXGENO

En este mtodo se emplea un analizador de oxgeno en fase
gaseosa para medir la fraccin mol de oxgeno en el gas de entrada
y en el de salida del biorreactor, empleando sulfito de sodio para
que reaccione con el oxgeno en el lquido.
Al efectuar un balance de oxgeno en el sistema se obtiene:

VdCL / dt e ( Fa) e Ye s ( Fa) s Ys Vra

Si la velocidad de reaccin es muy alta, la concentracin de
oxgeno disuelto ser cero y su variacin con el tiempo igual,
por consiguiente:

e ( Fa) e Ye s ( Fa) s Y
ra
V
107

Al aplicar la ley de los gases ideales se obtiene:

1
ra
RV

Pe ( Fa ) e Ye
Ps ( Fa) s Ys

Te
Ts

Tambin se sabe que la velocidad de reaccin es:

*

ra K L A(C L C L )

108

Al combinar ambas ecuaciones se obtiene:

pFa
Ye Ys
k L A
*
RTVC L

109

VENTAJAS (V) Y DESVENTAJAS (DV):

V:
Es un mtodo rpido
No se requiere tomar muestras
DV:
Requiere de sulfito de sodio que es muy corrosivo y que puede
envenenar a los electrodos.
No se puede emplear con medios de cultivo.

110

MTODOS DE
DETERMINACIN EN
SISTEMAS BIOLGICOS

111

El objetivo de estas determinaciones experimentales es

cuantificar la velocidad con la cual se est transfiriendo el
oxgeno (VTO), desde las burbujas de aire hasta el caldo de
fermentacin, bajo unas condiciones de operacin establecidas
o para un conjunto de condiciones de operacin. Esto permitir
establecer la condicin (o condiciones) en la que se garantice
que el sistema no se encuentre limitado por oxgeno.

112

En esta seccin se desarrollarn los siguientes mtodos:

Dinmico
Balance

113

MTODO DINMICO
Este mtodo es bsicamente el mismo que se describi en el Mtodo Dinmico
en un sistema fsico, con la salvedad que en este caso no se utiliza nitrgeno
para "desorber el oxgeno disuelto" ya que el microorganismo se encarga de
consumirlo.
Al realizar un balance de oxgeno disuelto en un sistema de fermentacin resulta:

dCL / dt K L A( CL * C L ) QO 2 x
Esta ecuacin expresa la velocidad de cambio en la concentracin de oxgeno
disuelto con respecto al tiempo (dCL/dt) a lo largo de toda la fermentacin.
Acumulacin, oferta y consumo

114

Para aplicar este mtodo, basta cerrar el flujo del aire y

esperar a que el m.o. lo consuma cuidando que la CL no caiga
por debajo de la CLcrit (se recomienda que la velocidad de giro
de los impulsores tambin se disminuya al mximo). Una vez
que la CL se acerca a dicho valor, entonces se deben reponer
tanto el flujo del aire como la agitacin a sus valores originales.
115

Al aplicar este mtodo

en varios momentos
durante una corrida de
fermentacin, la grfica
resultante sera de la
forma siguiente:
Pero si grficamente se
ampliara el tiempo de
cualquiera de las
determinaciones, la
grfica resultante sera
de una forma semejante
a:

Aplicacin del mtodo dinmico durante una

corrida de fermentacin
116

117

Esta ecuacin aplica a lo largo de toda la fermentacin. Es decir,

antes del corte del aire, durante el corte del aire y despus de la
reposicin del flujo de aire.
Durante el corte:

CERO

dC L / dt QO 2 x

La velocidad
volumtrica de
consumo de oxgeno
(QO2x) se iguala a la
pendiente de la
grfica CL VS t

118

Durante la reposicin del flujo de aire y de la agitacin:

*

CL CL

1
KL

dCL / dt QO 2 x

119

MTODO DEL BALANCE DE OXGENO

120

Figura 13. Equipo necesario para el mtodo del balance: 1 Rotmetro para la entrada
de aire; 2 Electrodo de oxgeno disuelto; 3 rotmetro para el aire de salida; 4
analizador de oxgeno gaseoso; 5 medidor de oxgeno disuelto.

121

P
O
R
B
A
L
A
N
C
E
D
E
G
A
S
E
S
FO
e2) (O
Fs2,C
(O
C
2,
O
2)
V
L
F
=
V
/
T
=
R
T
unintervalodetiem
pot

gR
V
nt

p
()

O
2

O
2
.1tR
TV.gTp()
O
22
O

Dividiendo por el VL (para calcular por unidad de volumen) y considerando que V/t = flujo:
moles de O2 consumidos por unidad de tiempo y de volumen=
Demanda = X. qO2=

n 1
Fg
.

.( pO 2e pO 2 s )
t VL R.T .VL
122

TRANSFERENCIA DE OXIGENO

velocidad de transferencia O2=

dC L
K L . a ( C * CL )
dt

Que ocurre durante el transcurso de una fermentacion?

C*

1- En ausencia de microorganismos.

CL

Mientras el tanque no se ha inoculado y el consumo de oxigeno es nulo, se

transfiere O2 hasta que el sistema se satura.

d
C L
K L . a ( C * CL )
d
t
En estas condiciones, CL aumenta progresivamente hasta que CL C*.
Cuando CL =C*, entonces C*-CL= 0, y la transferencia se hace nula, pues
cesa la fuerza impulsora.
2- Cuando hay un cultivo en crecimiento
CL se mantiene bajo, pues el oxigeno que se disuelve en el seno del liquido es
inmediatamente consumido por los microorganismos. El sistema no llega a
saturarse pues en todo momento CL<C* y la fuerza impulsora es >0.

123

RESUMIENDO:
Demanda de Oxigeno:

dCL / dt = X. qO2

Transferencia de Oxigeno: dCL / dt = KLa (C* -CL)

La transferencia debe ser mayor que la demanda para evitar
limitacion de oxigeno.
Como aumentar la transferencia de oxigeno?
1- aumentar el Kla

condiciones de operacion (flujo de aire, agitacion, etc)

diseo del reactor

reologia del cultivo

2- aumentar la fuerza impulsora

aumentar C*

disminuir CL

124

AGITACION:

1- aumenta el area de intercambio por ruptura de las burbujas aumenta el Kla.

2- Disminuye el espesor de la pelicula aumenta KL.

AIREACION: aumenta el numero de burbujas aumenta el Kla.

TEMPERATURA: afecta el coeficiente de difusion y la solubilidad (cte de Henry).

VISCOSIDAD: a mayor viscosidad, mayor resistencia a la transferencia. (K L es mayor)

TENSIACTIVOS: afectan el area de tranferencia y el K L y el efecto global depende de la

concentracion
burbujas mas pequenas aumento del area y del Kla.
aumento de la resistencia de la pelicula dismunuye el KL

FUERZA IONICA: disminuye la solubilidad disminuye el KL

SUSTANCIAS ORGANICAS : antiespumas: disminuyen el Kla

peptonas, micelio, biomasa : disminuyen el Kla
alcoholes, cetonas y esteres: aumentan el Kla

125

Metodos empleando condiciones reales de operacion

1- CULTIVO CONTINUO EN ESTADO ESTACIONARIO
Balance de Oxigeno en un cultivo continuo : dC/ dt =
0
Kla (C* - CL) = X. qO2

KL a =

oferta
KLA (C*-CL)

demanda
X. qO2

X. qO2
(C* - CL)

2- METODO DINAMICO EN ESTADO NO ESTACIONARIO (Taguchi y Humphrey , 1966)

Se introduce una perturbacion en el sistema (interrupcion de la aireacion o de la
agitacion) por lo que este responde modificando la CL y, de esta variacion puede
calcularse el KL.a.

Condicion
La medicion debe efectuarse en forma rapida, de modo que los parametros
fisiologicos (respiracion) y cineticos (biomasa, CL, C*) puedan considerarse
constantes. En estas condiciones tenemos un cultivo en estado estacionario
(no continuo).
126

Esquema del Proceso : Consiste en tres etapas sucesivas

[O2]
C*

cultivo cuasiestacionario

corte del
OFF suministro de O2

ON

restitucion del
suministro de O2

CL

KL.a 1

C = X. qO2

KL.a 2
KLa1 > KLa2

Ccritica
tiempo (en minutos)
127

El balance de Oxigeno en la fase liquida es el siguiente:

PRIMERA ETAPA
dC L/ dt = KL a (C* - CL) - X. qO2
(siendo dC L/ dt = 0 en un intervalo muy pequeo)
SEGUNDA ETAPA
Cuando se corta la aireacion

dCL/ dt 0 y KL.a = 0

dC L/ dt = X. qO2
El consumo de oxigeno que se registra corresponde a la demanda (X.qO2) y
puede calcularse por la pendiente de la recta que registra la variacion de la
concentracion de oxigeno en el tiempo.
(CL no debe descender al valor de la Ccritica)
TERCERA ETAPA
Se restablece la aireacion y en estas condiciones
dC L/ dt = KL a (C* - CL) - X. qO2
Reordenando
CL = - 1/ K L a (dCL/ dt + X. qO2) + C*
Si se grafica CL

dCL X .qO2
como funcion de : dt

128

CL
C*

- 1/KLa

dC L
X .qO 2
dt
129

Ventajas
- La determinacion se hace in situ
- Rapidez
- Solo requiere un electrodo de oxigeno
-Puede calcularse el C*
Limitaciones
- Se requiere un electrodo de respuesta rapida
- El KLa que se calcula es puntual
- Hay errores dados por:
tiempo de respuesta del electrodo
transferencia de oxigeno desde la superficie
- Para minimizar estos errores deben introducirse
correcciones que contemplen la resistencia del electrodo,
el tiempo de respuesta del mismo, y la transferencia
superficial de oxigeno(Vs)
130

RELACIONES DE KL. a CON VARIABLES OPERACIONALES DEL SISTEMA

El KL.a puede correlacionarse con:
variables de operacion del sistema: agitacion, aireacion, potencia
aplicada, , etc,
propiedades del fluido : densidad, viscosidad, peso especifico.
geometria del sistema: diametro de impeler/ diametro del fermentador,
etc.
Estas correlaciones son empiricas , surgidas de informacion recogida de un gran
numero de experimentos, y permiten:
Predecir el valor que tendra la transferencia al modificar las condiciones
operativas.
Calcular el KL.a sin necesidad de efectuar mediciones.
Hacer el cambio de escala.
Disear reactores.

En la practica, sin embargo , la exactitud de estas

correlaciones, aplicadas a los sistemas biologicos, es muy
pobre
131

Por ej. :
KLA = C(P/V) (Vs)
En esta expresin se relaciona KLa con la potencia y la
agitacion (P/V) y la aireacion (Vs).
Los exponentes (, ) son menores que la unidad, por lo que
el aumento del Kla por aumento de dichos factores resulta
cada vez menos eficiente y mas costoso a medida que se
aumenta su valor.
Otras limitaciones de esta expresion son:
1- validez solo para fluidos newtonianos, con viscosidad
( ) constante
= .

En general, los caldos de fermentacion se comportan como fluidos no

newtonianos, con viscosidad variable a lo largo del proceso fermentativo. En
estos casos, las correlaciones adoptan formas mas complejas donde deben
intervenir otras variables: D(diametro del impulsor); DO2( Difusibilidad de oxigeno);
ap(viscosidad aparente); (tension superficial), N(veloc de agitacion); (densidad
del liquido) y la Vs.
132

2- Validez para volumenes de fermentacion desde 2 L hasta 4,400 L

(relativamente pequeos)
3- Valida para potencias aplicadas (P/V) desde 500 a 10,000 W
4- Expresiones obtenidas en soluciones de electrolitos de baja
viscosidad (sin azucares, solidos, etc)
Para sistemas viscosos las correlaciones son de la forma:
Kla. D2
DO2

0.06

ap

0.5

. DO2

Donde: D= diametro del impeller

DO2: difusividad del O2
ap: viscosidad aparente
Vs : veloc superficial del gas

ap. Vs

0.6

D2N

1.5

ap

DN2
g

0 .19

DN
Vs

: densidad del liquido

: tension superficial
N: velocidad de agitacion
133

En estas relaciones complejas se prefiere emplear las variables bajo

la forma de adimensionales , es decir, como relaciones entre
variables.
De este modo ademas es posible independizarse de las unidades de
medida e incluso de las propias mediciones, que, en la mayoria de
los casos, son imposibles de realizar.
Ejemplos de Adimensionales :
N Re(Numero de Reynolds)=
o

= CL/ C* ; V = V/ V*
. N .D 2

Este numero describe el movimiento del liquido en el tanque en

funcion de la veloc de agitacion, la viscosidad y densidad del
liquido y el diametro del impulsor.
Otro adimensional importante es el Np (Numero de potencia) que
establece la relacion entre agitacion, potencia de agitacion (P) y
variables operativas del sistema
(Sin aireacion)

Np =

P
.N 3.D5

134

La relacion entre la agitacion y el movimiento del liquido es la

curva de potencia , y se representa genericamente como :
Np = b. Re x , donde b es un constante que depende de
la geometria del tanque y x depende del regimen de circulacion y
del tipo de impulsor
Relacion entre Np y Re
1,00E+02
helice

Np

1,00E+01

disco
1,00E+00
1,00E-01
1,00E+00

palas

1,00E+02

1,00E+04

1,00E+06

Reynolds
135

Para Re < 10 ( regimen laminar) (x = -1)

Np = b/ Re x

y la potencia suministrada al fluido(P) :

P = b. . N2. D3

Para Re > 10 y <1000 hay una zona de transicion, donde la potencia

depende de la geometria del tanque y las condiciones de operacion
Con regimenes turbulentos (Re > 10000), la influencia del Re sobre el Np es
despreciable y la P depende de D5, por lo cual se requiere colocar mas de un
impulsor si se desea mayor transferencia.
P = b..N2.D5

Cuando el sistema se airea, la definicion del Np se modifica a :

Np =

Pg
g .N 3.D5

Pg: potencia absorbida por el

sistema aireado
g: densidad aparente
136

* Dispositivos para aireacin

conduccion abierta
material poroso

* dispositivos para agitacin

agitador de turbina de disco (Rushton)
agitador de turbina de pala plana
agitador de helice

137

Cambio de escala: diseo de un proceso industrial basado, al menos en

parte, en datos extraidos de un sistema de menor volumen

138