INMUNOMICOLOGIA

2015

INFECCIONES POR INHALACION DE ESPORAS

Histoplasmosis
Blastomicosis
Paracoccidioidomicosis
Coccidioidomicosis
Aspergilosis
Zygomycosis
Cryptococosis

RESPUESTA INMUNOLOGICA DEL

HUESPED

MEDIACION CELULAR

IDR

MEDIACION POR ANTICUERPOS

AGLUTINACION
HEMAGLUTINACION
INMUNOPRECIPITACION
RIA,
ELISA, ETC.

INMUNODIAGNOSTICO DE HONGOS PATOGENOS

INVESTIGACION DE ANTIGENOS
Antigeno Polisacrido capsular : Cryptococcus neoformans:
Exoantgenos de C. albicans puede diferenciar C. tropicalis
Deteccin de los serotipos A y B de Candida albicans.
Antgenos liberados en cultivo: Extractos de medios de cultivo
INVESTIGACION DE ANTICUERPOS
Tcnicas de IDD,
B. dermatitidis,
P. brasiliensis,
H. capsulatum,
C. immitis,
Candida
Aspergillus, etc.

Se han desarrollado diversos mtodos alternativos al cultivo que

pueden proporcionar al clnico informacin rpida y fiable ante la
sospecha de una micosis invasora.
Entre estos mtodos destacan:
Deteccin de antgenos,
Deteccion de anticuerpos y
Deteccion de componentes fngicos no antignicos.

Algunas de estas tcnicas serolgicas ya se han convertido en

herramientas bsicas en el laboratorio de Microbiologa Clnica
actual, como:
Deteccin del antgeno capsular de Cryptococcus neoformans
Deteccin de galactomanano en pacientes con aspergilosis invasora.

DETECCION DE ANTIGENO
Criptococosis

La deteccin de antgeno capsular en lquidos orgnicos y

especialmente en LCR ante la sospecha de meningitis criptoccica.
Ello se debe en gran parte a la rapidez, sencillez tcnica y
especificidad de la prueba.
Permite el diagnstico, en 10-15 min, de aproximadamente el 99%
de las meningitis criptoccicas y el 67% de las criptococosis
diseminadas.
El aislamiento de C. neoformans puede requerir varios das.
Se utilizan dos tipos de tcnicas, una cualitativa y otra cuantitativa.
La tcnica cualitativa se emplea para diagnosticar nuevos casos de
criptococosis o para confirmar reinfeccin especialmente en el sida.

Antigeno cryptococo.

La tcnica consiste en la deteccin de antgeno capsular

criptoccico mediante anticuerpos monoespecficos dirigidos frente
a l y unidos a partculas de ltex. La aglutinacin de las partculas
de ltex tras la reaccin antgeno-anticuerpo se detecta a simple
vista..
La tcnica cuantitativa se emplea habitualmente para el seguimiento
de la evolucin de pacientes ya diagnosticados mediante el ttulo de
antgeno capsular presente en la muestra clnica, que generalmente
es suero o LCR.
Es til para conocer la eficacia del tratamiento antifngico aplicado.

CRYPTOCOCOSIS LATEX

FUNDAMENTO
Consiste en la precipitacin de particulas de latex sensibilizadas
con anticuerpo anti-polisacarido capsular de C. neoformans en
muestras de LCR, suero y orina.
Esta prueba posee una sensibilidad del 99% para LCR de pacientes
con criptococosis menngea.
El limite de deteccin es de 3.2 ng/ml a 12.5 ng/ml .
Una reaccion negativa no descarta infeccin.
La prueba tiene valor diagnostico y pronostico, un aumento
progresivo de titulo es de mal pronostico.
Cuando la terapia es inadecuada se observa aumento o
mantenimiento de los titulos sobre muestras consecutivas.
Para evitar falsos negativos se tratan los especimenes clnicos con
pronasa (DE) previa a la prueba, esta enzima cuya funcion es
separar los complejos inmunes circulantes y destruir el factor
reumatoideo, elimina los falsos positivos y aumentar la sensibilidad
de la prueba.

CRYPTOCOCOSIS LATEX.
LECTURA DE RESULTADOS
La lectura es visual y se debe realizarse de la siguiente
manera:
Negativo: suspensin granular muy fina con ausencia
de aglutinacin
Positivo +: suspensin con escasos grumos contra un
fondo homogeneo lechoso.
Positivo ++: suspensin con escasos a moderados
grumos contra un fondo moderamente homogeneo.
Positivo +++: suspensin con moderados a abundantes
grumos contra un fondo claro.
Positivo ++++: suspensin con abundantes grumos
contra un fondo totalmente claro

CRYPTOCOCOSIS LATEX

TITULACION

criptococos

Cuando la prueba es positiva + o mas, se debe realizar

titulaciones para el seguimiento de tratamientos.
Las diluciones recomendadas son:
positivo ++ se recomienda comenzar al 1:2;
positivo es +++ o ++++ se suguiere comenzar en 1:100

Posteriormente para muestras seriadas del mismo

paciente se debe utilizar el mismo esquema de dilucion.
El seguimiento se debe realizar hasta la negativizacion
de la aglutinacin.
Cuando se realiza titulaciones para seguimiento de
tratamientos es conveniente realizarlas con el mismo
equipo para evita variaciones.

Falso positivo
La sensibilidad vara entre el 93% y el 100% con un 93-98% de
especificidad.
Puede haber falsos positivos:
Presencia de factor reumatoide
Pacientes con lupus
Pacientes con sarcoidosis,
Arrastre medio de cultivo de agar chocolate,
Asas de platino o desinfectantes.
Infeccin sistmica por Trichosporon ashaii
Desaparecen los falsos positivos al tratar el suero con pronasa o
2-mercaptoetanol.

CANDIDOSIS
DETECCION DE ANTIGENOS CIRCULANTES
La Candidosis diseminada representa una de las causas de infeccin ms
importantes en lo que concierne a mortalidad y morbilidad en el paciente
inmunocompetente e inmunocomprometido.
Los mtodos habituales de diagnstico (hemocultivo) son negativos en las
candidosis profundas.
Los mtodos serolgicos no diferencian entre la colonizacin y la invasin.
Aglutinacin con particulas de ltex sensibilizadas:
Acs. monoclonales anti mananos
Acs. policlonales anti glucoprotenas

DETECCION DE ANTIGENO de
Candida
Candidiasis
La deteccin de antgeno en pacientes con candidiasis invasora nos
ha permitido solucionar el problema diagnstico que presenta esta
micosis.
La deteccin de manano parece ser ms sensible y especifica.
Platelia Candida Ag (Bio-Rad)
Es un ELISA que detecta manano en suero utilizando el anticuerpo
monoclonal EBCA1.
Este anticuerpo reconoce residuos -1,5 del manano de C. albicans,
C. tropicalis, C. glabrata, C. guilliermondii, C. parapsilosis y C.
pseudotropicalis pero no de C. krusei.
El lmite de deteccin de la prueba es 0,25 ng/ml de suero.
.

DETECCION DE ANTIGENO de
Aspergillus

Aspergilosis
La deteccin de galactomanano mediante un ELISA permite el
diagnstico de la aspergilosis invasora.
Especificidad del 89,6% y sensibilidad del 87,5%.
Esta prueba en algunos estudios se ha demostrado que es positiva
antes de que aparezca la sintomatologa clnica.
Platelia Aspergillus EIA (Bio-Rad)
La prueba es un ELISA que detecta galactomanano en suero
utilizando el anticuerpo monoclonal EBA-2, que reconoce el
galactomanano de A. fumigatus, A. flavus y A. niger.
El lmite de deteccin de la prueba es 1 ng/ml de suero

DETECCION DE ANTIGENO de
Aspergillus
Actualmente, se considera un resultado positivo cuando el paciente
presenta dos muestras consecutivas con un ndice 0,5.
La deteccin de galactomanano puede verse disminuda en pacientes
con enfermedad granulomatosa crnica y Sndrome de Job
El Platelia Aspergillus EIA no ha sido evaluado en profundidad en
plasma, orina, BAL y LCR.
La prueba puede dar positiva con hongos del gnero Penicillium,
Alternaria y Paecylomyces.
Alimentos como los cereales, pollo, pastas y productos lcteos
pueden contener galactomanano que puede ser adsorbido en nios y
pacientes con alteraciones en la barrera intestinal.
Resultados falsos positivos en pacientes tratados con: piperacilinatazobactam y amoxicilina-clavulnico

(REACCIONES SEROLOGICAS)
Aglutinacin
Fijacin de Complemento
Inmunoprecipitacin en gel:
Inmunoelectroforesis
Inmunodobledifusin
Inmunofluorescencia
Inmunoenzimtica (ELISA)
Radioinmunologa

DETECCION DE ANTICUERPOS

Dificultad de preparacin de antgenos estandarizados

Dbil ttulo de anticuerpos en el curso de las micosis

Utilizacin generalmente para micosis profundas

Reacciones cruzadas
En cryptocosis no tiene utilidad
Candidosis: actualmente detectan anticuerpos contra el manano, la
enolasa y los antgenos del micelio.
Aspergilosis: La deteccin de anticuerpos especficos en suero es,
una prueba complementaria clsica para confirmar el diagnstico
de aspergiloma pulmonar y de la aspergilosis broncopulmonar
alrgica (ABPA). Las tcnicas empleadas son: la inmunodifusin
doble (IDD) y contrainmunoelectroforesis (CIE)

Inconvenientes de la Inmunodifusion
Es lenta, precisa de una incubacin de hasta 3 das, aunque
a las 24 h ya se pueden observar arcos de precipitacin.
Puede producir reacciones cruzadas entre distintas especies
de Aspergillus y se extienden a otras especies de hongos e
incluso algunas bacterias.
Esta tcnica no distingue el tipo de anticuerpo especfico
presente en el suero (IgG, IgM o IgE).
Tiene una sensibilidad baja, Debido a ste problema esta
tcnica no es de utilidad en aspergilosis invasoras.
El factor reumatoide y la protena C-reactiva presentes en el
suero pueden causar falsas precipitinas.

DIAGNOSTICO INMUNOLOGICO
DE LAS MICOSIS PROFUNDAS

DETECCION DE LA SENSIBILIDAD CUTANEA

Antgeno : Histoplasmina (filtrado del cultivo miceliano)
Reaccin positiva:
Infeccin en evolucin ( infiltracin pulmonar, lesiones cutneas)
crnica ( calcificacin pulmonar, esplnica )

Reaccin negativa:
no excluye infeccin (comienzo, diseminacin, anergia).

Induce la formacin de anticuerpos

Presencia de reacciones cruzadas con otras micosis
Uso epidemiolgico. Sin valor diagnstico

Antigeno de histoplasma
Las pruebas pueden aplicarse a muestras tales como:
suero, plasma, liquido peritoneal o LCR de pacientes
con enfermedad respiratoria, hepatoesplenomegalia,
signos de infeccin sistmica extrapulmonar o con
compromiso menngeo, en pacientes que vivieron o
trabajaron en zonas endmicas de Histoplasma
capsulatum

Inmunodifusion

INMUNODOBLE DIFUSION HC
TITULACION

M : La banda M se encuentra cerca del hoyo del antgeno

Histoplasmosis aguda o cronica.
de una infeccin pasada o
de una prueba cutnea reciente.
H : la banda H cerca del hoyo del suero control positivo.
Histoplasmosis activa y progresiva.
Puede persistir de uno a dos aos

DETECCION DE COMPONENTES NO ANTIGENICOS

Actualmente se basa en la deteccin de D-arabinitol,DNA y (13)-D-glucano.

El D-arabinitol es un metabolito producido por C. albicans, C.
tropicalis, C. parapsilosis y C. kefyr que puede detectarse mediante
cromatografa gas-lquido o mediante una tcnica enzimtica
comercializada en Japn.
Niveles elevados de D-arabinitol se han detectado en pacientes con
candidiasis invasora y su monitorizacin se ha mostrado til en el
seguimiento de estos pacientes.
La tcnica presenta falsos positivos en pacientes con insuficiencia
renal o en tratamiento con esteroides y suele ser necesario ajustar
las concentraciones de D-arabinitol con respecto a las de creatinina
o L-arabinitol. El D-arabinitol tambin puede detectarse en orina.

DETECCION DE COMPONENTES NO ANTIGENICOS

La deteccin de (13)--D-glucano en plasma es otra posibilidad
diagnstica en las micosis producidas por
Candida,
Aspergillus y
Pneumocystis,
El ser humano carece de glucanasas para digerir (13)--D-glucano y
por tanto su eliminacin es lenta.
Existen varias pruebas comercializadas para la deteccin (13)--Dglucano, siendo el Fungitell la ms recientemente comercializada. Las
pruebas para detectar (13)--D-glucano pueden presentar falsos
positivos en pacientes sometidos a hemodilisis con aparatos que
tengan membranas de acetato de celulosa, o en tratamiento con
albmina, inmunoglobulinas, algunos agentes anticancerosos y
sulfamidas

REACCION DE AMPLIFICACION ENZIMATICA

(PCR)
DIAGNOSTICO FUTURO
Sondas quimioluminiscentes marcadas con Ester de Acridina:
H. capsulatum, B. dermatitides, C. immitis, C. neoformans.
(100% de especificidad y 96% de sensibilidad).
Identificacin rpida (2 h.) vs 3 das para la investigacin de
exoantgenos de un cultivo miceliano de
desarrollo.

7 a 10 das de

INMUNODIAGNOSTICO DE
HONGOS PATOGENOS
SONDAS NUCLEICAS

Hibridacin de ADN:
Identificacin rpida, sensible y especfica del material
gentico detectado con sondas de ADN marcado.
Ventajas:
Deteccin e identificacin simultnea, directamente de la
muestra clnica o de colonias aisladas con ayuda de la
amplificacin enzimtica, de sondas nuclicas

CANDIDOSIS
SONDAS NUCLEICAS
Han sido desarrolladas para:
Tipiaje del ADN del gnero, especies de Candida.
Identificacin de factores de virulencia C. albicans.
Estudio de la morfognesis C. albicans.
Modo de accin de antifngicos.

CRIPTOCOCOSIS
SONDAS NUCLEICAS
Permite identificar los 4 serotipos de C. neoformans ( Sonda
Accu Probe Soc. Gen-Probe), con
100% de sensibilidad y especificidad
Identificacin muy rpida (1 h)
42 cepas aisladas de enfermos fueron identificadas
52 otras especies de levaduras no respondieron