.

NO a la disfuncin endotelial
Algo mas que una negacin

Dr. Armando Rojas Rubio

Escuela de Medicina, Universidad Catlica del Maule.

Una premonicin al estilo de Leonardo Da Vinci

Envejecemos

en la misma medida que lo hace

nuestro endotelio

Dr. R. Altschul., 1954.

Endothelium. The MacMillan Company, NewYork, pp. 1155.

Endotelio vascular
Ocupa un rea equivalente a 6 canchas de tenis (adulto 70 Kg.)
Peso total 1.5 Kg.
Masa celular compuesta por 1 trilln de celulas endoteliales

Su importancia no esta condicionada por factores

cuantitativos sino cualitativos

Funciones del endotelio vascular

Control
vasomotor
Control crecimiento y
migracin CML

Produccin y liberacin
de sustancias vasoactivas
Inhibicin de la
agregacin plaquetaria

Transduccin de
fuerzas mecnicas

Permeabilidad

Migracin clulas
Superficie antitrombtica
mononucleares y PMN
profibrinoltica

Adhesin clulas
mononucleares
y PMN

Surgimiento del trmino disfuncin endotelial

Comienzos de los 70

Finales de los 70

Aceleracin del proceso aterosclertico

por remocin de la capa endotelial

Endotelio morfolgicamente intacto

en zonas de lesiones

?
Disfuncin Endotelial
Michael Gimbrone Jr. J Card Surg 4, 1989

Disfuncin endotelial y Biologa vascular.

Un vnculo indisoluble

Papel paracrino y endocrino del endotelio (ECA, PGI, NO, endotelinas

etc)
Anormalidades vasomotoras
(vasoespasmo coronario por angiografa, vasoconstriccin
paradjica a ACh (*)
Inflamacin, aterosclerosis (Intensa acumulacin de clulas
mononucleares en sitios de lesin, VCAM-1 como molcula prototipo
contraligando VL-4)
Oxidacin y regulacin vascular (Oxidacin de LDL, produccin de
EROs asociada con respuestas inflamatorias en los vasos , Inactivacin
del NO por ROS, estatus redox intracelular y activacin de NFkB.
Papel protagnico de mecanismos basados en cambios redox).
Fisiologa y Biologa molecular y celular de Angiotensina
II; (SAVE y SOLVD (IECA); Ang II inductor de estrs
oxidativo y marcada actividad proinflamatoria).

Que se define por disfuncin endotelial ?

Disfuncin Endotelial:
Primer cambio fenotpico de la vasculatura
expuesta a factores de riesgo aterotrombticos ()

Sentido Estrecho (*)

Marcada disminucin en la
sntesis/biodisponibilidad de
NO .

Sentido Amplio
Se adiciona un estado de
activacin del endotelio

() Dr Joseph Loscalzo, Instituto Cardiovascular Whitetaker, Boston, USA

Factores de riesgo y consecuencias de la disfuncin

endotelial
Factores de riesgo tradicional

Factores
no tradicionales

Predisposicin
gentica

Factores
locales

Factores
desconocidos

Disfuncin endotelial

Lesin y remodelado
vascular

Inflamacin

Vasoconstriccin

Trombosis

Bases moleculares y mecanismos involucrados

en el origen de la disfuncin endotelial.

Estrs oxidativo. Un denominador comn

hipertensin

dislipidemia

diabetes

hbito de fumar

Estrs oxidativo
O2 H2O2
.

NO

EROs

OH

Endotelio disfuncional

ONOO-

Fuentes de EROs en la vasculatura

NADPH oxidasa

Ang II, ET-1, Trombina

IL-1, TNF-
PDGF, IGF, EGFNOX-4
Ocupacin de LOX-1
Fuerza de distensin parietal

gp91 phox
p67
p40

O2
anti-gp91phox

anti-tubulina

p22

p47

Citoesqueleto.

Rac

O2Xantina oxidasa
Respiracin
mitocondrial
Ciclooxigenasa
Lipooxigenasa
Citocromo P450
NOS III disfuncional

Interaccin de EROs con sistemas de sealizacin y

consecuencias en la vasculatura

EROs
+

Factores
Ca 2++
Trasncripcin
NFkB, AP-1,
intracelular
STAT

+
Tirosina
cinasas

Tirosina
fosfatasas

+
MAP
Cinasas
JNK, p38MAPK
ERK1/2

Control
Expresin
Crecimiento celular/apoptosis
vasomotor
genes proPermeabilidad inflamatorios
Vascular

xido
ntrico

Control
vasomotor

Oxido ntrico (NO .): Un mediador clave en la

funcionalidad vascular
-Nitrosilacin ODC
-Ciclina/cinasa dependiente de ciclina
- GMPc
Proliferacin y
-Ca+2
migracin CML
-P-selectina
-Conformacin GPIIa/IIIb

Regulacin NFkB
-Nitrosilacin de IKK
-Resntesis de IkB
Anti-inflamatoria

Anti-plaquetaria

NO.

Anti-apoptosis

Pro-fibrinoltica

-Inhibicin caspasas 3 y 9
-desestabilizacin ARNm MKP-3 (impide degradacin Bcl-2)

-expresion PAI-1
-TF

Algunas caractersticas y estructura de dominios de la

NOS III
Enzima responsable de la formacin de NO en el endotelio vascular
1203 aa, PM 133 kDa
Regin promotora con secuencias de unin a diversos FT.
Muy compleja regulacin post-transcripcional
Formacin de complejo multimolecular (NOSosoma)
-Serina 1177 (Akt , regulacin positiva)

Oxigenasa

NADPH

FAD

FMN

NH2

-Treonina 495 (PKC, regulacin negativa)

-Serina 114, (ERK1/2 ?)
-Serina 633 (PKA, PKG, accesibilidad CaM.

CaM

Acilacin
Arg
Zn
BH4
Hemo

-Miristilacin (glicina 2)
-Palmitilacin (cistena 15 y 26)

Reductasa

Flujo de electrones

COOH

La caveola el compartimento celular

perfecto.
VEGF

Acetilcolina,
Bradikinina
Serotonina

Membrana
plasmtica

Fuerzas de friccin tangencial

caveola
Ca+2

CAT-1

Sistema de reciclaje
citrulina/arginina

citoesqueleto

Cav-1

NOS III
protena G

Visin panormica de la activacin de

NOS III
Fuerza de friccin
Estrgeno-R
Esfingosina-1-P
Bradicinina

VEGF-R

tangencial

PLC-
PtdIns(4,5)P2

InsP3

AMPc

Ca 2+

CaM
DAG

CaMK

Akt

PKC

?
oxigenasa
S116

T497

CaM

reductasa

S635

NOSIP

S1177

LAI
CHIP
Hsp70

CaM

Hsp90
NOSTRIN

PKA

S617

G2 C15 C26

citoesqueleto

ATP

AC

PI3K

Hsp90
NOS III

inactiva

NOS III
Cav-1

n
pori

L-arginina

NO

GC
Cav-1

Din

activa

Signaloma
NOSosoma

Disminucin en la biodisponibilidad de NO .
Principales mecanismos

Cambios en la biodisponibilidad

Disminucin en la
sntesis/actividad
Interaccin del NO. con O 2
Inhibidores endgenos
Disponibilidad de sustrato//cofactores

Cambios en la expresin
/estructura
Desestabilizacin del ARNm
Disminucin transcripcin
Polimorfismo gen NOS III

Interaccin de NO . con EROs

6.7 x 109 M-1 s -1

NO

NOS III

ONOO

O2-

2 x 109 M-1 s -1

H2O2

Desacoplamiento de NOS III

CuZn SOD
Mn SOD
ecSOD
NADPH oxidasas

Inhibidores endgenos: Origen y relevancia

fisiolgica de argininas metiladas
-Dimetilarginina asimtrica (ADMA) (JBC 245, 1970)
Protenas
Protenas portando ADMA y monometilarginina (NMA)
hidrlisis
ADMA y NMA libres

Excrecin renal

Dimetilarginina dimetilaminohidrolasa II (DDAH)

Citrulina + metilaminas

-ADMA, inhibidor competitivo de NOS III, antagoniza vasodilatacin

dependiente de endotelio (Lancet 339; 1992)

Baja disponibilidad de sustrato

La paradoja de la L-arginina.
Aparente discrepancia entre las diferencias reportadas para
la concentracin intracelular de L-arginina (1-2 mM)
y la Km de la NOS III (2.9 M)

Tericamente: NO se puede incrementar la sntesis de NO por L-arginina exgena

Experimentalmente:

SI se puede incrementar la sntesis de NO L-arginina exgena

CAT-1

BH4. La clave en el control de la divergencia

.
funcional de la NOS III: NO O2Estabilizacin unin
L-arginina
Transferencia de e- desde
BH4
Mantenimiento forma
dominio reductasa
redox activa grupo Hemo
Formacin de
homodmero estable
Hipercolesterolemia
hiperglicemia
hipertensin
BH4 exgena
+
inflamacin

NOS III

Oxidacin
BH4

BH4

L-arginina

O2- Desacoplamiento
NOS III

NO. ONOO-

Disminucin de la trascripcin/ Desestabilizacin

ARNm NOS III
Disminucin actividad transcripcional (Evento raro)
Disminucin t1/2 ARNm (El mecanismo comn)

Protena NOS III

ARNm NOS III

3 UTR

Protena NOS III

ARNm NOS III 3 UTR
Degradacin

PIDE

PIDE: Protena Inductora de Disfuncionalidad Endotelial (50 -60 kDa)

Disminucin del t ARNm NOS III

NOS III (% of control)

100

- AGE-BSA

70-80 hrs

75

50
25
+ AGE-BSA
0

10

15

Time (hours)
Rojas et al., Circulation Research, 86: 50-54, 2000

20

25

20 hrs

Polimorfismo en el gen NOS III.

Polimorfismo
1.- Exn 7.. G984 T

Consecuencia
Glu298 Asp

susceptibilidad
degradacin

2.- Regin 5 flanquenate . T786C

sntesis NO

3.- Intrn 4.. 4-5 repeticiones en tandem de 27 bp

sntesis NO

Asociacin con espasmos coronarios, IM, hipertensin

Factores de Riesgo de Disfuncin Endotelial.

Contribucin etiopatognica
Hiperhomocisteinemia
dislipidemia

Infeccin/
inflamacin

Dficit
estrognico

HTA

DE

Tabaquismo

Hiperglicemia

Hipermocisteinemia y DE

HOMOCISTEINA

BH4
actividad DDAH
II
actividad CAT-1
niveles de Cav-1
expresion ecSOD
O2Auto oxidacin
NFkB

NO.

VCAM
Factor Tisular

Dislipidemia y DE

oxLDL

HDL

oxLDL
SR-B1

LOX-1

NO.
NADPH
oxidasa
ET-1
PDGF
M CP-1
IL-8
VCAM-1
ICAM-1
Trombomodulina

O2

NFkB

NOS III

NOS III
Treo 497

src

P
NOS III
desacoplada

PI3K

Akt

Infeccin/inflamacin y DE
Infeccin /inflamacin

Enfermedad cardiovascular

Disfuncin endotelial

C. pneumoniae
CMV
H. pylori
HIV
Enfermedad periodontal
Vacuna S. thyphi

TNF-
PCR

estabilidad ARNm NOS III

biodisponibilidad NO

Disfuncin endotelial

Dficit estrognico y DE
Ateroproteccin

Estrgeno

-Complejo de accin rpida Receptor -NOS III

-Control de EROs

E2
ER-

NOS III
Hsp 90

Gi

Ca 2++

Akt
MAPK

NO.

-Genmico: actividad transcripcional

expresin
expresin de
NADPH oxidasa Mn SOD y ecSOD

EROs

Hiperglicemia y DE
Hiperglicemia
PKC

PAGs

via aldosa reductasa

expresin y actividad NADPH oxidasa

oxidacin de BH4
estabilidad ARNm NOS III
fosforilacion de NOS III

EROs

NO

via hexosamina

Tabaquismo y DE
Tabaquismo (humo de cigarrillos)

actividad
MnSOD

expresin
ET-1

niveles
prostaciclina

produccin
EROS

Endotelio Disfuncional

actividad
NOS III

Hipertensin y DE
Hipertensin

Incremento de EROs

NADPH oxidasa.
xantina oxidasa.
Polimorfismo -930
A/G p22(phox).

Activacin sistema
renina-angiotensina

Biodisponibilidad NO

Ang II

EROs

NO

Oxidacin de BH4
Desacoplamiento NOS III
Polimorfismo NOS III

Es tratable la disfuncin endotelial?

EROS y disfuncionalidad endotelial

Rojas y cols, Curr. Vasc. Pharmacol., 2006

Biodisponibilidad de NO y mantenimiento de la
homeostasis vascular
Factores causales
Inhibidores endgenos
Niveles de L-Arg y BH4
Eliminacin de NO
Expresin de NOS III

Biodisponibilidad
Reducida

Enfermedades vasculares
Rojas y Morales, Arch Med Res 35 , 2004

Intervencin teraputica
Administracin de L-Arg y BH4
Antioxidantes
Estatinas
Frmacos cardiovasculares
Terapia gnica

Biodisponibilidad
Mejorada

Recuperacin vascular

Estrategias teraputicas. Una aproximacin

multifactorial
Antioxidantes
Antagonistas
Receptor AT2

Ejercicio
fsico

NO /O2
Inhibidores
ECA

Mimticos
SOD
Estatinas

Antioxidantes
Antioxidantes
estructuralmente
no relacionados
Vitamina C

Probucol

SOD

glutatin

Aumento de la vasorelajacin dependiente de endotelio

Estatinas: Mucho mas que inhibidores de la HMGCoA reductasa

Akt
NOS III

diferenciacin
CE circulantes

GTP
Ciclohidrolasa
I ARNm

ESTATINAS

actv. enz
Tioredoxina
NADPH
oxidasa

preproET-1
ARNm

Receptor ET-1
CML (ETA)

Inhibidores de ECA y biodisponibilidad del NO

La efectividad de un mecanismo dual.
Inhibicin ECA

Angiotensina II

Bradicinina

sntesis de O2-

sntesis de NO

biodisponibilidad NO.

Antagonistas del receptor AT1

Ang II
AT1

Vasoconstriccin
Activacin NADPH oxidasa
Actividad promotora de
crecimiento

Endotelio disfuncional

AT2

Vasorelajacin
Activacin NOS III
Liberacin BK endgena
Modulador del crecimiento
Endotelio funcional

Mimticos de SOD. Una opcin emergente

SOD
antigenicidad

protelisis

inestabilidad

Complejos macrocclicos de Mn (II)

Aumento de la biodisponibilidad de NO in vivo e in vitro

Ejercicio fsico regular. Aktivemos nuestra NOS III

Ejercicio fsico regular
flujo sanguneo

expresin SODec; CuZn SOD

Fuerza de friccin tangencial

NO.

Akt

fosforliacin
NOS III
(Ser 1177)

NO.

NO.

clula endotelial
CML

Los enfoques mas recientes

La conexin adipocito-clula endotelial: Adiponectina y
Resistina
Adiponectina:

-Aumenta produccion NO, (fosforilacin 1177 Ser).

-Bajos niveles de adiponectina correlacionan con VDE.
-Inhibicin activacin NFkB

Resistina:

-Aumenta expresin ET-1, VCAM-1 y MCP-1

Disfuncin de clulas endoteliales progenitoras

-Hiperglicemia disminuye la capacidad de neovascularizacin de CEP

Ligandos de PPAR y biodisponibilidad de NO .

PPAR
subtipo

Ligandos
sintticos
Fibratos

Efecto sobre el balance

.

NO /O2- en el endotelio
actividad NADPH oxidasa,
expresin NOS III

Tiazolidinedionas actividad NADPH oxidasa,

expresin NOS III
Telmisartan
actividad catalasa

Conclusiones

Disfuncin endotelial:

-Primer cambio fenotpico sistmico del endotelio

vascular sometido a factores de riesgo
aterotrombticos.

Entidad compleja:

-Alta variabilidad de factores etiopatognicos

Principal caracterstica:

-Incremento de estrs oxidativo y la consecuente

disminucin de la biodisponibilidad de NO.

Biodisponibilidad NO:

- Inactivacin de NO, disminucin en la actividad

NOS III, cambios en la expresin y estructura.

Reversibilidad:
Valor pronstico:

- Alta potencialidad de intervencin teraputica

-Barmetro de riesgo cardiovascular. Elemento
predictor independiente de eventos cardio- y
cerebro-vasculares.