Metabolismo Microbiano

Todas las clulas requieren energa para sobrevivir.

Esa energa, tpicamente en forma de ATP, procede del
catabolismo ordenado de varios sustratos orgnicos
(hidratos de carbono lpidos y protenas). La energa
producida se puede usar despus para la sntesis de
constituyentes celulares (paredes, protenas, cidos
grasos y cidos nuclecos), mediante un proceso
denominado anabolismo.

El metabolismo de cualquier ser vivo requiere

materiales, una fuerza conductora y un plan.
Sin
embargo, existen
algunas
diferencias
entre los
distintos tipos de microorganismos.

OBJETIVO:
Demostrar que las bacterias tienen
diferentes requerimientos
energticos

Diseo Experimental
Cepas microbianas: E. coli, Enterobacter, Proteus,
Klebsiella,
Pseudomonas, Salmonella , Shigella, Bacillus
subtilis
Medios de Cultivo Caldo Clark Lubs, Caldo
lactosado, Agar Almidn, Caldo peptonado, agar
sangre, Agar TSI, Agar LIA, Agar Nitrato, Agar
urea de Cristensen, Agar citrato de Simmons,
galatina nutritiva, agar mantequilla
Mechero. Asa bacteriolgica


METABOLISMO DE LOS
CARBOHIDRATOS
UTILIZACIN DE LA GLUCOSA

Cepa bacteriana

Medio Caldo Clark Lubs

Incubar a 35-37C
por 24 a 48 horas

Prueba de Rojo de Metilo (realizar la lectura a

las 48 horas)

Agregar 5 gotas del

reactivo de rojo de
metilo lectura

LECTURA
RM positiva (+) = despus de adicionar el indicador, el medio de
cultivo deber permanecer de un color rojo en la superficieRM negativo ( -) = Color amarillo en la superficie del medio

Prueba de Voges ProsKauer ( realizar la

lectura a las 24 horas)

Agregar: 0,6 mL/ o 12 gotas del reactivo alfa naftol al 5%

0,2 mL /o 4 gotas de KOH al 40%

LECTURA
VP positivo (+) = despus de adicionar el indicador, el medio de cultivo
deber aparecer de un color rojo en la superficie ( despus de 15 minutos)
VP negativo ( -) = Color amarillo cobrizo en la superficie del medio


FERMENTACIN DE LA LACTOSA

Cepa bacteriana

Caldo Lactosado
Incubar a 35- 37C por 24 a 48 horas

LACTOSA positiva (+) = Se manifiesta por un cambio de color del indicador en el

medio de cultivo de rojo a amarillo
LACTOSA negativa ( -) Si no se presenta cambio de color en el medio
GAS positivo( +) =Se presenta por la presencia de una burbuja en la campana de
Durham por la acumulacin de gas
GAS negativo ( -) = No hay presencia de burbujas

HIDRLISIS DEL ALMIDN/

PRODUCCIN DE AMILASA

Cepa bacteriana

Agar almidn

Agregar el reactivo
de Lugol

Incubar a 35-37C
por 24 a 48 horas
LECTURA
AMILASA positiva (+) = Si alrededor de la colonia se observa zonas o halos
claros lo que indica que el almidn se ha hidrolizado por la presencia de la
enzima
AMILASA negativa ( -) = Si no se observa zonas o halos claro alrededor de la
colonia

METABOLISMO DE LAS PROTENAS

Hidrlisis de la Gelatina

Cepa bacteriana

Medio gelatina
Incubar a 35- 37C
24 horas a 14 das

Refrigera por 10 minutos

GELATINASA positiva ( +) = Si hay presencia de liquefaccin

GELATINASA NEGATIVA ( - ) = Si no se observa liquefaccin

PRODUCCIN DE INDOL

Cepa bacteriana

Caldo peptonado y
/o Caldo triptfano
Incubar a 35- 37C por 18 a 24 horas

Agregar el reactivo de Kovac

15 gotas

LECTURA
INDOL positivo (+) = Formacin de un anillo de color rojo en la superficie
INDOL negativo (- ) = Formacin de un anillo amarillo o anaranjado en la superficie

PRODUCCIN DE HIDRGENO SULFURADO

Cepa bacteriana

Caldo peptonado con papel

impregnado de acetato de plomo
Incubar a 35-37C por 24 a 48 horas

LECTURA
H2S positivo = Cuando se ennegrece el papel
H2S negativo = Ausencia del color en el papel

HIDRLISIS DE LA UREA

Cepa bacteriana

Agar-urea de Christensen
Incubar a 35-37C por 18 a 24 horas

LECTURA
Ureasa + = medio se torna de color rojo
Ureasa - = medio conserva su color original amarillo

METABOLISMO DE LOS LPIDOS.

Cepa bacteriana

agar mantequilla
Incubar a 35-37C por 24 a 48 horas
LIPASA positiva (+)= Colonia de color rojo
LIPASA negativa (-)= No hay cambio de color

METABOLISMO DE AMINOCIDOS
DESCABOXILACIN DE LA LISINA

Cepa bacteriana

Agar LIA
Siembra tres punturas y estra
Incubar a 35-37C por 18 a 24 horas

LECTURA
LISINA DESCARBOXILASA positiva (+) = Si aparece un color
prpura intenso
LISINA DESCARBOXILASA negativa (-) = No hay cambio de color

PRODUCCIN DE ENZIMAS
PRODUCCIN DE HEMOLISINAS

Cepa bacteriana

Agar sangre
Incubar a 35- 37C por 24 horas

LECTURA
HEMOLISIS= Halos translcidos, por la degradacin completa de
la hemoglobina
HEMOLISIS= Halos opacos verdosos, por la degradacin
parcial de la hemoglobina
HEMOLISIS= ausencia de halos

Hidrolisis del ADN

Agar ADN
Agregar HCl al 1%
Siembra a lo largo de la
placa
Incubar a 35-37|C por 24
horas
agregar
LECTURA: ADNasa + alrededor de la colonia halo claro
Adnasa alrededor de la colonia no presenta halo claro

Cepa bacteriana

Hidrolisis del ADN

Agar
Agregar HCl al 1%
Siembra a lo largo de la
placa
Incubar a 35-37|C por 24
horas
agregar
LECTURA: ADNasa + alrededor de la colonia halo claro
Adnasa alrededor de la colonia no presenta halo claro

Cepa bacteriana

Prueba de la fenilalanina desaminasa

Cepa bacteriana

Agar fenilalanina
Siembra por estra
Incubar a 35-37C
por 24 horas

Agregar unas gotas

de cloruro frrico

Lectura: fenilalanina desaminasa + : color verde

fenilalanina desaminasa - : color amarillo

METABOLISMO DE FUENTES INORGNICAS

UTILIZACIN DEL CITRATO

Cepa bacteriana

Agar Citrato de Simmons

Incubar a 35-37C por 24 a 48 horas

LECTURA

CITRATO positivo = Cambio de color vira de verde al azul.

Desarrollo visible en el medio
CITRATO negativo = No hay cambio de color ni crecimiento observable

REDUCCIN DEL NITRATO

Cepa bacteriana

Caldo nitrato/ agar nitrato

Incubar a 35-37C
por 18 a 24 horas

Agregar: 1 ml de
Solucin A ( cido Sulfanilico)
Solucin B ( alfa naftilamina)

LECTURA
NITRATO positivo (+) = desarrolla un color rojo en 30 seg despus de agregar
los reactivos
NITRATO negativo (-) = No hay reaccin de color

MEDIO UTILIZADO EN LA FERMENTACIN DE

HIDRATOS DE CARBONO Y PRODUCCIN DE HIDRGENO SULFURADO

Cepa bacteriana

Agar TSI ( Triple Sugar Iron )

siembra por puntura y estria
Incubar a 35-37C por 18 a 24 horas

LECTURA
Pico de flauta alcalino/ profundidad alcalina (K/K) = No fermentacin de hidratos de carbono
Pico de flauta alcalino/ profundidad cida ( K/A/ gas) = Glucosa fermentada; lactosa
y sacarosa no fermentada,
Pico de flauta alcalino/ profundidad cido negra( K/A/H2S) = Glucosa fermentada, lactosa
y sacarosa no fermentada, produccin de hidrgeno sulfurado
Pico de flauta cida/ profundidad cida A/A= Glucosa , lactosa y sacarosa fermentadas

Pruebas mixtas
Produccin de Hidrogeno sulfurado, Indol y movilidad:
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por
puncin profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con
anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe
abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la
superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta.

LECTURA
Cepas mviles:producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de
siembra.
Cepas inmviles:el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.
Cepas SH2positivas:ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio.
Cepas
SH2negativas:el
medio
permanece
sin
cambio
de
color.
Cepas indol positivas:desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de
Erlich.
Cepas indol negativas:sin cambio de color.