Aislamiento Viral

Los virus son parsitos intracelulares

obligados y por tanto requieren
clulas vivas para su multiplicacin
hasta mediados del siglo pasado los
animales y huevos embrionados eran
los sistemas mas comnmente
utilizados para asilarlos.
Desde 1950 se empezaron a utilizar
cultivos celulares a partir de una
variedad de tejidos humanos y de
animales este mtodo ha sido
reemplazado.
Aunque el aislamiento viral es el

De igual forma el aislamiento del virus tiene una

sensibilidad y especificidad muy alta. Debido a
que solo se amplifica el virus, se aumenta la
sensibilidad sin disminuir la especificidad.
Sin embargo, existen algunas desventajas en el
aislamiento del virus:
El proceso suele ser lento, ya que demanda das
a semana la identificacin , y en consecuencia
puede no estar disponible a tiempo para la
atencin del paciente. Adems es un proceso
laborioso y caro.
El aislamiento viral se clasifica en cultivo in vivo
y cultivo in vitro.

Dentro de los cultivos in vitro tenemos

a los cultivos celulares y dentro del
cultivo in vivo estn los cultivos en
animales de experimentacin y los
huevos embrionados.
Aislamiento en animales de
experimentacin: los ratones
lactantantes fueron muy usados para el
aislamiento viral, pero su uso tiende a
disminuir ante el desarrollo de los
cultivos celulares; sin embargo, se
siguen usando para algunos virus como
para el grupo Coxsackie A que no
crecen en otros medios. Otros virus
solo crecen en ciertos especies de
animales como simios o en mosquitos;
estos procedimiento se utilizan con
fines de investigativos.

Asilamiento en huevos
embrionados: Los virus
pueden inocularse en
diferentes estructuras de
huevo embrionado de pollo
o de pato. La replicacin
viral puede evidenciarse por
la muerte del embrin o
mediante la deteccin.
Este sistema tiene la
ventaja de ser
bacteriolgicamente estril,
carecer de respuesta
inmune y ser de fcil
manipulacin.

Cultivos in vitro
Cultivos celulares
Monocapa celular
Lneas celulares diploides
Lneas celulares continuas
Hemadsorcion
Hemaglutinacin viral

Los cultivos
celulares son
CULTIVOS
los
biosusbtratos
empleados
para la
propagacin
de los virus.
Un cultivo
celular es
obtenido de
explantes de

CELULARES
Es una tcnica
que permite el
mantenimiento
de las clulas
In vitro
manteniendo al
mximos su
propiedades
fisiolgicas,
bioqumicas y

TIPOS DE
SUSTRATOS
VIDRIO

Empleado como
sustrato de cultivo
es de escaso costo
y tiene mucha
facilidad de
limpieza y
esterilizacin.

TIPOS DE
SUSTRATO
PLASTICO

El plstico mas
empleado es el poli
estireno de buena
calidad ptica debido a
que este plstico es
hidrofobico requiere un
tratamiento mediante
irradiacin gamma,
qumico, o mediante
descargas elctricas que
produzca una superficie
hidrofilica.

CRECIMIENTOS
CRECIMIENTO
EN MONOCAPA

Las clulas se
adhieren al
sustratos y en
esa forma

CRECIMIENTO EN
SUSPENSIN

Son clulas
capaces de
proliferar sin
necesidad de
adherirse al
sustrato.

MONOCAPA
CELULAR
Esta monocapa de clulas crece en un
medio de cultivo complejo que contiene
albmina, vitaminas ,sales, glucosa ,etc.
en un sistema buffer .Se previene la
contaminacin bacteriana adicionndole a
los medios antibiticos adecuados .
Los cultivos celulares en monocapa son los
mas usados ,aunque hay otros sistemas
(cultivo en suspensin ,explantes ,cultivo
de rganos, cultivo en microcarriers ,etc.)

LOS CULTIVOS CELULARES SE DIVIDEN EN :

CULTIVO PRIMARIO:

El cultivo iniciado a partir de

clulas, tejidos u rganos tomados
directamente de un organismo. Un
cultivo primario debe ser
considerado como tal hasta que se
subcultive con xito por primera
vez. En ese momento se considera
una lnea celular.

VENTAJAS DEL CULTIVO PRIMARIO:

El estar ms cercanas a las clulas que las

originaron, se ve reflejado en una mejor
actividad y funcionalidad similar a su ambiente
natural, presentando las caractersticas
siguientes:
Mayor sensibilidad que una lnea celular ya
establecida.
Baja probabilidad de que las clulas se
transformen en malignas, por lo que esta
tcnica es indispensable en la elaboracin de
vacunas.

DESVENTAJAS DEL CULTIVO PRIMARIO

Alta probabilidad de
presentar virus
adventicios o latentes.
Necesidad de
implementar una
tecnologa de punta para
controles de calidad.

LINEA CELULARES
DIPLOIDES:
Son aquellas que crecen en
pasajes sucesivos hasta
aproximadamente 50
subcultivos y que conservan
por lo menos en un 75% el
cariotipo correspondiente a la
especie de que provienen.

Una lnea celular

se origina a
partir de un
cultivo primario
en el momento
del primer
subcultivo
exitoso. El
trmino lnea
celular implica
que los cultivos

LNEAS CELULARES
CONTINUA
Tiene alta capacidad para
multiplicarse in vitro, permite
un nmero finito de subcultivo
por lo menos 70 veces de un
cultivo primario y son
heteropoide.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS
DE LNEAS CELULARES
CONTINUAS
Ventajas
1. Disponibilidad para todos los
investigadores de stocks de
clulas idnticas
2. Facilidad relativa del pasaje y
mantenimiento en todos los
laboratorios

LOS CULTIVOS
CELULARES

Varan de acuerdo con su susceptibilidad a

los diferentes virus con una relacin
especifica husped-virus
Ejemplos:
1.Lnea celular HDP2(clulas heteroploides
humanas derivadas del carcinomas
larngeo se recomiendan para VRS virus
respiratorio sincicial y Adenovirus
2.La MRC5 es una lnea diploide
fibroblastica del pulmn embrionario se
utiliza para aislamiento de
citomegalovirus

Efectos cito paticos es la

visualizacin morfolgicas
producidas por la accin del virus
VRS
HPS-2
Adenovirus
No producen efecto cito patico se
recurre a tcnicas.
Hemadsorcion
Hemaglutinacin

HEMOADSORCIN
La tcnica de hemoadsorcin se basa en la
capacidad de los glbulos rojos de determinada
especie animal de unirse a protenas virales que
tienen capacidad hemoaglutinante.
Si se dispensa glbulos rojos a una monocapa de
cultivo celular infectada con virus es posible
observar microscpicamente la adherencia de los
mismos a clulas que contienen virus.
Por medio de esta tcnica, es posible demostrar
la infeccin por aquellos virus que presentan
protenas hemoaglutinantes.

CELULAS

INFECTADAS CON
UN VIRUS
HEMOAGLUITINANTE

Muchos glbulos rojos se

agrupan alrededor de las
clulas y pueden llegar a
cubrirlas. El resto de los
globulos rojos estan
dispersos.

CELULAS NO

INFECTADAS

Los glbulos rojos se

encuentran dispersos
en toda la monocapa
celular forma aleatoria .

HEMOAGLUTINA
CIN VIRAL
DEFINICIN.-Este fenmeno fue descrito
por primera vez por Hirst en 1941, quien
observo en un embrin de pollo la
aglutinacin de glbulos rojos en un vaso
sanguneo roto, mientras realizaba pases
de virus de influenza en el lquido
alantoideo.Hirst reconoci la importancia
de este hallazgo y describi la
hemoaglutinacin como un mtodo para
ensayo de virus.
Hemoaglutinacin es la propiedad que
tienen ciertos virus para unir y aglutinar

 La hemoaglutinacin es uno de los mtodos

ms comunes para cuantificar partculas virales

en suspensin.
Un virus hemaglutinante es capaz de aglutinar
glbulos rojos (GR) de determinada especie
animal. Ej: Virus Influenza. Virus Dengue, Virus
Parainfluenza, Virus de la Rubeola, etc.
REACCIONES DE HEMAGLUTINACIN
Base: unin Ag-Ac
(enlaces no-covalentes).
Etapas:
- Interaccin primaria (no visualizable)
- Interaccin secundaria (aparicin de un
fenmeno visible como la aglutinacin o la
precipitacin).

MECANISMO DE LA
HEMOAGLUTINACIN

La actividad enzimtica de las protenas

virales (hemaglutininas) produce
hemaglutinacin en la cual los eritrocitos
se unen por medio de puentes.
Muchos virus contienen protenas en su
capa externa que los capacitan para
aglutinar glbulos rojos de varias
especies. En influenza y algunos
paramixovirus, la hemaglutinacin de la
superficie, que es una glucoprotena, se
fija al glbulo rojo que posee receptores
complementarios.
El virus produce elusin sobre el glbulo

Inhibicin de la
Hemaglutinacin (IHA)
La IHA se fundamenta en el
bloqueo de la protenas virales
hemoaglutinantes por los
anticuerpos especficos. Cuando
se enfrenta un virus conocido a
un suero problema, stos se
unen impidiendo la
hemoaglutinacin viral.
(provocando la IHA).
Esta tcnica es utilizada para