Elementos de

microbiologia 2

Nutrio Microbiana
Necessidades nutricionais dos microrganismos
so as mesmas que a dos seres vivos.
Exigem fontes de energia e de material plstico
Tipos nutritivos:
Vegetais:
- Fotossintticos: energia da luz
- Autotrficos:
nutrem-se
exclusivamente
de
substncias inorgnicas
Animais:

Quimiotrficos: energia a partir de reaes

qumicas

Heterotrficos: exigem fontes orgnicas de

carbono

Fontes de Energia
Algas: fotossintticas clorofila gua a
doadora de eltrons com liberao de O2.
6 CO2 + 6H2O

C6H12O6 + O2

Bactrias fotossintticas: no tem clorofila.

No produzem O2
Litotrficas: utilizam compostos inorgnicos
como fonte energtica
Organotrficas:
eltrons

doadores

orgnicos

de

Fontes de Energia
Fungos
e
maioria
das
bactrias:
quimiotrficos energia a partir das reaes
qumicas
de
oxidao
de
substratos
adequados.
Litotrficos: oxidam compostos inorgnicos
Organotrficos: oxidam compostos orgnicos
Ex: Bactrias do gnero Thiobacillus so
capazes de oxidar enxofre produzindo cido
sulfrico.

Fontes de Material
Plstico
Compreende os nutrientes necessrios

aos
componentes estruturais da clula, minerais
e fatores de crescimento.

Formas usuais da maioria dos elementos

necessrios biossntese dos componentes
celulares
C - CO2 e compostos orgnicos (carboidratos,
lipdeos, lcoois, etc)
N - Amnia (NH3); Nitrato (NO-3); N2 e
compostos orgnicos (aminocidos)
H - H2O e compostos orgnicos
P - Fosfato
O - H2O e O2
S -H2S; sulfato; compostos orgnicos

Fontes de Material
Plstico
Fontes de Carbono:
Autotrficos CO2 ou on bicarbonato
Heterotrficos

fontes
orgnicas
de
carbono:
carboidratos
(D-glicose,
aminocidos,
cidos
monocarboxlicos),
lipdeos,
lcoois,
polmeros
(amido
e
celulose).

Fontes de Material
Plstico
Fontes de Nitrognio:
Algumas bactrias: retiram o N2 diretamente da
atmosfera e o convertem em N2 orgnico (processo
conhecido por fixao do nitrognio).

Fontes de Material
Plstico
Fontes de Nitrognio:
Algumas algas azul esverdeadas: cianobactrias
Seres humanos: usam protenas como fonte de
nitrognio
Numerosos fungos, algas e quase todas as
bactrias: utilizam compostos inorgnicos de
nitrognio (sais de amnio) e algumas vezes
nitratos.
Fungos e algumas bactrias: fontes orgnicas de
nitrognio (aminocidos) ou hidrolisados de
protenas.

Fontes de Material
Plstico
ons Inorgnicos Essenciais:
Macronutrientes:

Fsforo (fosfatos) metabolismo energtico e sntese de

cidos nuclicos

Enxofre aminocidos (cistina e cistena) e sntese de

vitaminas (biotina e tiamina)

Potssio ativador de enzimas e regulador da presso

osmtica

Magnsio ativador de enzimas extracelulares e fator

importante na esporulao

Ferro
orgnicos

sntese

de

citocromos

certos

pigmentos

Fontes de Material
Plstico
ons Inorgnicos Essenciais:
Micronutrientes:
funo
no
conhecida Cobre, Cobalto, Zinco,

muito

Mangans, Sdio, Boro...

Fatores
de
Crescimento:
compostos
orgnicos indispensveis a um determinado
microrganismo e que ele no consegue
sintetizar: vitaminas (complexo B tiamina
(B1), biotina e cobalamina (B12)); entre
outros (cido flico, cido nicotnico,
riboflavina e vitamina K); aminocidos,
nucleotdeos e cidos graxos.

gua
No um nutriente;

o solvente universal;
presso osmtica

Regulao
especfico)

Esporngios de Aspergillus (com esporos)

trmica

regulao

(elevado

da

calor

Oxignio Atmosfrico
No um nutriente
Receptor final de
respirao aerbia

hidrognio

nos

processos

de

Microrganismos aerbios exigem a presena de O2

livre

Microaerfilos no toleram as presses normais de O2

atmosfrico

Microrganismos anaerbios no toleram a presena de

O2 livre

Facultativos: podem crescer na presena ou ausncia

de O2
Bactrias: apresentam os trs tipos de comportamento
Fungos: aerbios ou facultativos

Necessidades do
Ambiente
Alm das necessidades nutricionais, devem
ser controladas as seguintes condies do
ambiente de cultivo: acidez (pH), oxignio,
atividade de gua e temperatura

Necessidades do
Ambiente
Acidez e alcalinidade:
Cada microrganismo tem um pH onde a
expresso melhor
Microrganismos Acidfilos pH timo na faixa
cida
Microrganismos Alcaloflicos pH timo na
faixa alcalina

Tampo tem a funo de manter o pH do

meio aproximadamenten constante.
Durante o crescimento do microrganismo
podem ocorrer variaes de pH, para

Necessidades do
Ambiente
Temperatura:
Cada microrganismo cresce numa faixa de
temperatura
Cultivar o microrganismo em condies um
pouco abaixo da tima de forma a evitar que
uma elevao acidental da temperatura
provoque a morte dos microrganismos
Psicrfilos crescem em baixas temperaturas
Mesfilos timo prximo temperatura
ambiente (18-25 C) e corporal (37 C)
Termfilos temperatura tima elevada (acima

Necessidades do
Ambiente

Meios de Cultura
Meio de Cultura: soluo aquosa que contm
os nutrientes
Meio de Cultura deve conter os elementos
essenciais ao crescimento do microrganismo
No existe um meio de cultura universal

Cada
microrganismo
duplicado
multiplicado
deve
possuir
todos
componentes da clula original

ou
os

Meios de Cultura

Composio dos Meios de Cultura

Meios
de
definidos)

Cultura

Sintticos

(meios

Cada componente do meio obtido na sua

forma pura. Sua composio qualitativa e
quantitativamente conhecida
Alguns componentes do meio exercem dupla
funo

Meios de Cultura
Meios de Cultura Complexos
Meio enriquecido com substncias mais
complexas
(vitaminas
e
aminocidos)
usadas
para
o
crescimento
de
microrganismos mais complexos
Composio qumica no perfeitamente
conhecida
Exemplos: extrato de malte, extrato de carne
(msculo) e extrato de levedura; triptofano;
extrato de casena, peptona; extrato de
rgos animais (fgado, corao); extrato de
vegetais (soja, arroz); sangue, soro

Meios de Cultura
Estado Fsico dos Meios de Cultura
Meios de cultura podem ser preparados em
estado lquido ou slido (gel)

Meios lquidos: dispersos em tubos ou

frascos onde pode ocorrer a inoculao e
incubao

Meios slidos: ao meio lquido adiciona-se

um agente gelificante (gar, gelatina e
slica-gel). Contem de 15 a 30g/L de agente
solidificante (quando a placa invertida no
ocorre derramamento)

Meios de Cultura
Estado Fsico dos Meios de Cultura
Meio semi-slido: contem de 2 a 10 g/L de
agente solidificante
Agar polissacardeo obtido de algas
marinhas. No nutriente para a maioria dos
microrganismos, logo no produz alteraes
significativas na qualidade do meio. Funde a
100 C e solidifica a 45 C

Microrganismos crescem melhor em meio

lquido se houver mais de um tipo de
organismo difcil de separar aquele de
interesse

Culturas puras: geralmente obtidas em

Meios de Cultura
Meios Seletivos e Diferencias
Seletivos: impedem o crescimento de certos
microrganismos
Corantes bsicos impedem o crescimento
de bactrias gram-positivas; azida sdica
inibe o crescimento das gram-negativas.
Normalmente contem substncias inibidoras
ao
crescimento
de
microrganismos
indesejados

Meios de Cultura
Meios Seletivos e Diferencias
Diferenciais:
conferem
caractersticas
especiais s colnias que em condies
normais seriam idnticas.
Embora muitos microrganismos possam
crescer neste meio, somente um tipo
capaz de realizar a reao especfica.
Normalmente adiciona-se um corante
Muito usados em anlises clnicas, anlises
de alimentos, de leite.

Conservao dos
Microrganismos
A cultura pura deve ser conservada para
estudo ou uso futuro Cultura Estoque

Cultura Estoque (cepa): deve ser mantida

livre de contaminantes; deve reter a
viabilidade, e manter as caractersticas
verdadeiras do microrganismo.

Conservao dos
Microrganismos
Tcnicas de Manuteno das Culturas:
Semear em meio slido distribudo em
tubos, e periodicamente transferi-lo para
novo meio
Tempo
de
transferncia:
depende
resistncia do microrganismo

da

Reduzir o metabolismo
mnimo geladeira

ao

microbiano

Recobrir a cultura com uma camada de leo

mineral estril (menor suprimento de O2)

Conservao dos
Microrganismos
Liofilizao microrganismos so suspensos
em meio adequado (leite ou albumina),
colocados em uma ampola e rapidamente
congelados a 30 C. Secar o material por
sublimao
da
gua,
e
aps
fechar
hermeticamente as ampolas. Conservar
temperatura ambiente.
Conservao em temperatura de nitrognio
lquido (-179 C)
Combinando-se a tcnica de liofilizao e
nitrognio lquido os microrganismos podem
ser conservados por muito tempo, sem
necessidade de renovao e sem alteraes

Conservao dos
Microrganismos
Fungos: conservar os esporos em areia, solo
ou slica previamente esterilizados

Instituies especializadas em identificar,

armazenar e vender culturas de bactrias,
fungos e vrus:

ATCC American Type Culture Collection

German Collection of Microrganisms
NRRL Culture Collection (EUA)
Coleo de Culturas Tropical (Campinas,
http://www.cct.org.br)

Controle dos
microrganismos
Controle dos Microrganismos pela Ao dos
Agentes Fsicos
Esterilizao: inativao irreversvel dos
organismos de um material em suspenso,
inclusive as formas esporuladas
Temperatura
Mtodo mais eficiente

Calor Seco promove uma oxidao

violenta dos componentes do protoplasma

No tem muita capacidade de penetrao

Baixa eficincia
Temperatura 160 180 C
Tempo: mnimo 2 horas
Usos: vidraria, leos e ps

Controle dos
microrganismos
Calor mido promove a desnaturao de
protenas e dissoluo de lipdeos
Alta capacidade de penetrao, podendo ser
utilizado para uma grande variedade de
materiais, inclusive biolgicos
Temperatura: 60 C
Tempo: 1 hora
Microrganismos termfilos: necessrio 100 C
por 15min
Microrganismos mais resistentes: 120 C, 1
atm, 20min (autoclave)

Controle dos
microrganismos
Pasteurizao aquecimento a 62 C por
30min, seguido de resfriamento brusco.
No um processo de esterilizao
Utilizado para interromper certos processos
microbiolgicos industriais (leite, cerveja)

Flambagem passar o material diretamente

na chama do bico de bunsen
Congelamento lento promove a formao
de cristais de gelo, que perfuram a
membrana e a parede celular. Alternar
congelamento e descongelamento

Controle dos
microrganismos
Radiaes
Ultravioleta (UV)
Comprimento de onda entre 240 e 280 nm
(absorvidas pelos cidos nuclicos)
Lmpadas de mercrio
Ionizantes
Atingem os tomos; so mais eficientes
(seringas, agulhas e materiais descartveis)

Controle dos
microrganismos
Filtrao
Filtros
com
poros
capazes
de
reter
microrganismos podem ser usados para
remover bactrias e fungos, porm no so
eficientes para vrus
Aplicaes:
esterilizao
de
solues
termossensveis ou entradas de ambientes
onde
no
podem
estar
presentes
organismos no ar

Controle dos
microrganismos
Vibraes snicas
Destruio de microrganismos em vibraes
ultra-snicas (> 200,00 kHz).
Ocorre destruio por lise e extravasamento
do contedo celular
Princpio: cavitao gases dissolvidos em
lquidos submetidos a tais vibraes
microbolhas chocam-se com as paredes
microbianas rompendo-as.

Controle dos
microrganismos
Controle pela Ao de Agentes Qumicos

Classificao: desinfetantes e agentes

quimioterpicos

Desinfetantes substncias que agem

diretamente sobre estruturas microbianas,
causando a morte dos microrganismos.
No matam, necessariamente, todos os
microrganismos.
Diminuio do nmero dos indesejveis at um
certo limite
Estruturas e molculas alvo: membrana
citoplasmtica (dissoluo dos lipdeos que a
formam)
e
protenas
(enzimticas
ou

Controle dos
microrganismos
Agentes Quimioterpicos interferem, em
muitos casos, em determinadas vias metablicas
Aplicao:
em
microrganismos
metablica sensvel.

com

via

Exemplo: sulfanilamida age competindo com o

cido p-aminobenzico (metablito essencial
para a sntese do cido flico).
Microrganismos incapazes de sintetizar cido
flico so resistentes a esse composto.
Sintticos sulfas
Naturais

estreptomicina...)

antibiticos

(penicilina,

Controle dos
microrganismos
Agente
microbicida:
microrganismo

morte

Agente
microbiosttico:
impede
proliferao dos microrganismos

do

Terminologia industrial:
Desinfetante
qualquer
agente
qumico
empregado num processo microbiolgico para
inibir ou matar microrganismos contaminantes
indesejveis

Controle dos
microrganismos
Fatores que influem na atividade do
desinfetante:

temperatura,
pH,
presena de sais,
presena de protenas estranhas.

Controle dos
microrganismos
Principais grupos:
lcoois: etlico, isoproplico, propilenoglicol,
etilenoglicol
Aldedos: frmico (formol), glutrico
Fenis: fenol,
cloroxilenol

cresol,

timol,

clorocresol,

Halognios: iodo, cloro, cido hipocloroso,

cloraminas, hipoclorito

Controle dos
microrganismos
Principais grupos:
Metais pesados: sais de mercrio, prata, cobre,
zinco
Agentes
oxidantes:
permanganato de potssio

gua

oxigenada,

Agentes de superfcie: cloreto de benzalcnio,

cloreto de benzetnio, cloreto de cetil-piridineo,
clorohexidina
Gases: xido de etileno, xido de propileno,
beta-propil-lactona, dixido de cloro, ozona.

Referncia
BORZANI, W.; SCHMIDELL, W.; LIMA, U.A. &
AQUARONE, E. Biotecnologia Industrial, vol. 1
Fundamentos. Editora Edgard Blcher Ltda,
So Paulo, 2001. Captulo 1.