Espectrometra de masas

MALDI-MS

ESI-MS

TNDEM (MS/MS)

Bioqumica I
7 octubre 2015
Espinosa Ruiz Ivonne Nallely
Torres Torres Yahaira Desiree
Tern Infante Laura Viridiana

Qu es un espectrmetro de masas?

Los espectrmetros de masas se pueden describir como instrumentos que

pesan molculas, que son muy pequeas para ser pesadas en una escala
tradicional.

Utilizan una propiedad que poseen todas las molculas: la masa. Cada
molcula tiene una masa nica, por ejemplo, una molcula de agua pesa
3x10-23 gramos; la masa de una molcula de cloruro de sodio (sal de mesa) es
9.6x10-23 gramos

Se obtiene el informe de qu molculas est compuesta una mezcla y en qu

cantidad est presente cada una de ellas.

Cmo est constituido un

espectrmetro de masas?
Un equipo de espectrometra de masas consta de cinco mdulos fundamentales:
1.

Sistema de introduccin de muestra

2.

Fuente de ionizacin

3.

Analizador de masas

4.

Detector

5.

Procesador de datos

1) Como sistema de introduccin de muestra existen dos mtodos

cromatogrficos distintos:
El de lquido de alta resolucin (HPLC) y el de gases (GC).

2) La funcin de la fuente de ionizacin en un equipo de EM es:

Aplicar energa a la muestra para generar molculas cargadas positiva o negativamente, ya que para medir
las molculas por EM stas deben estar elctricamente cargadas (se consigue por bombardeo mediante
electrones )

3) Analizador de masas

Los iones provenientes de la fuente de ionizacin pasan al analizador de masas, que tiene como
funcin separarlos y ordenarlos de acuerdo a su m/z. El intervalo de m/z, su precisin y exactitud
dependen del tipo de analizador que se utilice

4) Detector
Registra y amplifica la seal proveniente del analizador de masas
5) Procesador de datos
Es en donde esta informacin se registra en forma de espectro de masas, que es una
representacin grfica de los iones separados por su valor de m/z y ajustados de acuerdo al
porcentaje de las especies ms abundantes en la muestra

Matrix-Assisted Laser
Desorption/Ionization (MALDI)

Esta tcnica de ionizacin, comnmente llamada MALDI, fue descrita por

Karas y Hillenkamp en 1988.

MS (Mass spectrometry) Es una tcnica analtica para la determinacin de la

composicin elemental de una muestra.

Proceso

En este mtodo de ionizacin los analitos son disueltos en una solucin de un

compuesto que absorbe UV, llamado matriz (matrix).

Los solventes se van secando, los compuestos de la matriz cristalizan y los

analitos quedan contenidos dentro de la matriz de cristales.

Pulsos de lser de luz UV (3-5 ns, 337 nm, 107 W/cm2) son utilizados para
vaporizar pequeas cantidades de la matriz donde se incluyen los iones del
analito y llevados a fase gaseosa en el proceso.

Debido a que con la desorcin por lser la produccin de iones es discreta y

es pequeos paquetes, el MALDI esta comnmente combinado con un
analizador de tipo time-of-flight (TOF) dando un sistema de alta sensibilidad.

Debido a que con la desorcin por lser la produccin de iones es discreta y es pequeos
paquetes, el MALDI esta comnmente combinado con un analizador de tipo time-of-flight (TOF)
dando un sistema de alta sensibilidad.

La ionizacin del analito puede ser afectada por deprotonacin, al aceptar o ceder un electrn,
por unin de cationes o fotoionizacin, por lo que los iones generados por MALDI son de una
amplia variedad de molculas, ya que dependiendo de la combinacin entre el analito y la
matriz ser el tipo de iones predominantes en el espectro obtenido.

IONIZACIN POR ELECTROESPRAY

es una tcnica utilizada enespectrometra de masaspara producir iones (ESI-MS).

Es especialmente til en la produccin de iones a partir de macromolculas, pues
supera la propensin de estas a fragmentarse cuando se ionizan.

El uso de la fuente de ionizacin por electrospray como un medio de establecer

una interfaz entre uncromatgrafo de lquidosy unespectrmetro de masasvino
directamente de la obra de Dole, et al. y fue inventada por vez primera como una
unidad LC-Electro-Spray-Ionizacin-MS por Horton a finales de 1975 (publicado en
1979 en una patente de Phillips Petroleum Co.) La tcnica fue reinventada por Fite
y publicado en 1980. Debido a que la unidad LC-ESI-MS an no estaba totalmente
preparada para la industria de anlisis comercial, estos inventos son anteriores a
un hito importante, el trabajo deJohn Bennett Fennet al., que persistieron desde
finales de los aos 1980 en adelante con el refinamiento, desarrollo y consultora
para ayudar a la comercializacin de la tecnologa, lo que llevo finalmente a que
fuera galardonado con elpremio Nobel de qumicaen2002.por el desarrollo de la
ionizacin por electroespray para el anlisis de macromolculas biolgicas

FUNCIONAMIENTO

Se introduce elanalito(que serionizado) disuelto en unsolventems voltil

por uncapilarde metal muy pequeo y cargado.

Debido a la repulsin de las cargas elctricas, el lquido se sale del capilar y

forma un aerosol, una nube de pequeas gotas (10m) altamente cargadas.

Conforme el solvente se evapora, las molculas de analito se aproximan, se

repelen y finalmente, cuando la repulsin de las cargas positivas vence la
tensin superficial, estallan las gotas (Explosin de Coulomb).

El proceso se repite hasta que el analito est libre de solvente, de modo que
no quedan ms que iones.

Los iones se mueven hacia el analizador de masa.

Ventajas

Desventajas

Campo de aplicacin

La muestra en solucin se hace pasar a travs de un capilar al que se aplica

un alto potencial elctrico, a la salida del capilar la solucin se dispersa en
forma de spray formado por pequeas gotas cargadas, las cuales se evaporan
rpidamente bien por un proceso de desorcin del campo elctrico de
evaporacin del solvente, liberando molculas (pptidos protenas)
protonadas a la fase gaseosa. Los iones generados pueden estar protonados
de forma mltiple dando lugar a diferentes especies para una misma
molcula. En el caso de pptidos y protenas, el extremo N-terminal y los
residuos de histidina, arginina y lisina son los candidatos a protonarse. Todo el
proceso de ionizacin se realiza a presin atmosfrica. Al igual que la
ionizacin MALDI es un mtodo de ionizacin suave ya que no se detecta
fragmentacin de las molculas

Qu es un espectrmetro de
masas Tndem (MS/MS)?
Es una tcnica analtica que permite la separacin, identificacin y
cuantificacin de mltiples metabolitos, basada en su relacin masa/carga
(m/z), en diferentes matrices (lquidas, slidas), despus de su ionizacin en
diferentes matrices biolgicas, en un tiempo muy corto y de manera simultnea.
Presentan los resultados en la forma de espectro de masas.
Un espectro de masas es una grfica que muestra cada molcula especfica por
peso y cantidad de molculas presentes.
Ha tenido diversas aplicaciones para el anlisis de: Compuestos presentes en
nuestro organismo, en el ambiente, los medicamentos, materiales
manufacturados, alimentos, toxicologa y medicina forense.
Una de las aplicaciones ms comunes de la EM en tndem es el tamiz neonatal.

Un equipo de MS/MS est constituido de siete

componentes bsicos:

1.Sistema de
introduccin
de muestra.

HP
GC

2.Fuente de
ionizacin.

ESI
MALDI
APC
CI
EI
FAB FD/FI TSP

3.Primer
analizador de
masas (MS1 ).

Q
TOF
MS
ESFT-ICR

4.Cmara o
celda de
colisin.

5.Segundo
analizador de
masas (MS2 ).

Q TOF MS ES FT-ICR

6.Detector.

7.Procesador
de datos.

PM EM MP

Esquema general de un sistema MS/MS con ejemplos de cada mdulo en la parte inferior. Abreviaturas: HPLC High Performance
Liquid Chromatography, GC Gas Chromatography, ESI Electrospray Ionisation, MALDI Matrix Assisted Laser Desorption Ionisation;
APCI Atmospheric Pressure Chemical Ionisation; CI Chemical Ionisation; EI Electron Impact; FAB Fast Atom Bombardment; FD/FI
Field Desorption/Field Ionisation, TSP Thermospray Ionisation, Q Quadrupole, TOF Time of Flight, MS Magnetic sector, ES
Electronic sector, FT-ICR Fourier transform, PM Photomultiplier, EM electron multiplier, MP Microchannel Plate.

1.- Introduccin de muestras.

2.- Fuerza de ionizacin.

Sufre una ionizacin suave por ESI para adquirir carga.

3.- Primer analizador de masas (MS1 ).

Posteriormente pasa al MS1 en donde los componentes de la muestra se separan

y ordenan de acuerdo a su m/z.
4.- Cmara o celda de colisin.

Los iones pasan por la celda de colisin en donde se generan fragmentos como
producto de su colisin con un gas inerte.
5.- Segundo analizador de masas (MS2 ).

Los fragmentos generados pasan por el MS2, los cuales se pueden correlacionar
con las molculas intactas producidas en el MS1.
6.- Detector.
7.- Procesador de datos.

Con esta tcnica se pueden detectar y cuantificar selectivamente mltiples

analitos dentro de una familia de compuestos.
Tambin se puede obtener informacin estructural acerca de un compuesto a
travs de la formacin de fragmentos especficos y es til para descubrir
compuestos en mezclas complejas de acuerdo a su patrn de fragmentacin.
Gracias al desarrollo de este tipo de tecnologas, la qumica clnica est pasando
por un periodo de transicin de los anlisis individuales, aquellos en los que se
utilizaba una muestra de sangre (del orden de mililitros) para la determinacin de
un solo metabolito, hacia la obtencin de perfiles en los que se obtiene una
gran cantidad de informacin a partir de una muestra de aproximadamente 100
microlitros de sangre, en un tiempo muy corto.

Qu es el tamiz?
Es un estudio que se realiza a recin nacidos con fines preventivos.
Se busca identificar enfermedades congnitas.
Se debe realizar entre las primeras 24 y 72 horas de vida, una vez que se haya normalizado su
alimentacin.
ste consiste en tomar sangre del taln mediante una puncin con lanceta, la sangre se coloca en papel
filtro y se enva al laboratorio.
Una sencilla muestra de un recin nacido contiene miles de molculas que van desde molculas
pequeas tales como sales hasta protenas grandes como lo es la hemoglobina.
Cuando se agrega alcohol a la mancha de sangre seca, se extraen varios cientos de molculas las cuales
pueden ser estudiadas

Por qu es el MS/MS el mejor

mtodo para tamiz de recin
nacidos?
El espectrmetro de masas tndem mide muchas molculas diferentes en una
sola prueba. Mtodos ms antiguos de prueba requieren del uso de varios
exmenes para observar diferentes tipos de molculas resultando en un alto
consumo de tiempo y alto costo.
Con el espectrmetro de masas tndem los resultados estn disponibles
rpidamente y adems son ms exactos.

Las principales enfermedades que detecta el tamiz son:

Hipotiroidismo congnito:deficiencia de la hormona tiroidea que puede provocar retardo mental y en el desarrollo del cerebro.
Hiperplasia adrenal congnita:carencia de una enzima requerida por las glndulas suprarrenales para producir hormonas cortisol y
aldosterona; sin ellas, el cuerpo produce ms andrgenos, que es un tipo de hormona sexual masculina. Esto puede afectar el
desarrollo de los genitales y causar la muerte por prdida excesiva de sodio a travs de los riones
Fibrosis qustica:enfermedad hereditaria que afecta fundamentalmente a los aparatos digestivo y respiratorio, y suele caracterizarse
por enfermedad pulmonar obstructiva Afecta a las glndulas que producen moco, sudor, saliva y sustancias (enzimas) que participan en
la digestin de los alimentos.
Anemia falciforme o drepanoctica:los glbulos rojos de la sangre se deforman, lo que puede causar mala oxigenacin y episodios de
dolor y dao a rganos vitales como pulmones y riones.
Fenilcetonuria:los bebs que tienen este padecimiento no pueden procesar un aminocido y eso puede causar retraso mental
La enfermedad de la orina con olor a jarabe de maple:es un trastorno del metabolismo es hereditario, en el cual el cuerpo no
puede descomponer ciertas partes de protenas.
Homocistinuria:causada por la deficiencia de una enzima que bloquea el metabolismo de un aminocido. Si no se detecta a tiempo
puede promover retraso mental y osteoporosis (prdida de minerales en los huesos).
Acidemia propinica:el organismo del nio que sufre este padecimiento no puede romper adecuadamente las protenas y algunas
grasas en partes ms pequeas. Este defecto provoca la acumulacin de toxinas y cidos dainos para todos los rganos.
Galactosemia:estos bebs no tienen la enzima que convierte la galactosa en glucosa y, como resultado, es necesario suspender todos
los lcteos de la dieta del beb. Si no se hace esto, la acumulacin de la galactosa en los tejidos provoca ceguera y retardo mental.
Deficiencia de la biotinidasa:los bebs con este problema no tienen suficiente biotinidasa, una enzima que recicla el biotn (una de
las vitaminas de complejo B del organismo). Esa deficiencia puede causar convulsiones, control pobre de la musculatura, debilidad del
sistema inmunitario, prdida del odo, retraso mental, coma e, incluso, la muerte.

BIBLIOGRAFA
https
://journalmex.wordpress.com/2008/11/07/programa-de-estudios-de-tamiz-neon
atal
/
http://www.medigraphic.com/pdfs/actpedmex/apm-2009/apm095e.pdf
http://www.perkinelmer.com/industries/healthcare/spanishnewborntestingservi
ces/tecnologia/espectrometria-de-masas%20.xhtml
http://www.scielosp.org/scielo.php?pid=S1020-49892010000400010&script=sci_ar
ttext