UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO

VILLARREAL
FACULTAD DE OCEANOGRAFIA, PESQUERIA
Y CIENCIAS ALIMENTARIAS
ESCUELA PROFESIONAL INGENIERIA
ALIMENTARIA
TEMA: Determinacion de Vibrio Cholerae
Curso: Microbiologa General y de los alimentos
DOCENTE: Ing. Nilda Quispe
HORARIO: 11:20-1:00pm
ALUMNOS: Pezo Olivera, Noyuri
Raymondi Laredo, Lucero
Ruiz Abanto, Nathaly
Miraflores, 2014

DETERMINACIN DE VIBRIO
CHOLEARE
I. OBJETIVOS:
Aprender a determinar presencia de Vibrio
cholerae presentes en productos hidrobiologicos.
Familiarizarse con la tcnica de aislamiento de
Vibrio Cholerae a partir de alimentos.
Explicar el fundamento en cada etapa de
anlisis.

II. FUNDAMENTO
Es

este el medio selectivo ms adecuado

para el aislamiento de las especies de Vibrio
e inhibidor para la mayora de las
enterobacterias. Esta inhibicin se basa en
las altas concentraciones de tiosulfato y
citrato, la presencia de las sales biliares y
un pH fuertemente alcalino.

III. MARCO TERICO

Vibrioes un gnero de bacterias Gram
negativas, perteneciente al orden de los
Vibrionales, de lasgammaproteobacterias, con forma de bacilos
curvados. Bioqumicamente se
caracterizan por dar positivo en las
pruebas de la catalasa y de la oxidasa,
tambin dan negativo en la adenina
dihidrolasa,y positivo en la ornitina
descarboxilasa. Vibrio cholerae
concretamente es sacarosa y manitol
positivo y nitrato reductasa positivo. Es
una bacteria anaerobia facultativa, y su
metabolismo es fermentativo; pueden
fermentar, entre otros sustratos, la
glucosa. Poseen flagelacin polar, que les
otorga una movilidad mxima.

CARACTERISTICAS

Vibrio es un genero de bacteria Gram negativas, con forma

de bacilos, curvados. Bioqumicamente se caracterizan por
dar positivo en las pruebas de catalasa y de la oxidasa. Es
una bacteria anaerobia facultativa, y su metabolismo es
fermentativo, pueden fermentar, entre otros sustratos, la
glucosa.
Pese a que nutricionalmente son un poco exigentes, se
emplean medios especificos para aisalarlos de muestras
clinicas. El sodio estimula su crecimiento y ademas tolera
pH alcalinas por eso se utiliza para su cultivo agua de
peptona alcalina.

Sus requerimientos ambientales: el rango de temperaturas

de crecimiento estan entre 16y 42C con un optimo de 37C,
con un rango de pH de 6.8 a 10.2 y un pH optimo de 7.0 a 8.0

Habitat natural: Se lo ha encontrado en ambientes marinos

en regiones templadas o tropicales, en lagos y rios, en
moluscos y crustaceos, en pajaros y herbivoros aun lejos de
las costas marinas. El numero de bacterias de Vibrio
cholerae disminuye a medida que la temperatura del agua
baja por debajo de 20C

El clera es una enfermedad

relacionada con el abastecimiento de
aguas con poca higiene, o bien de los
alimentos provenientes de aguas
contaminadas con materia fecal y que
se consumen crudos. Tambin puede
aparecer V. cholerae O1 en moluscos
bivalvos, crustceos o pescados que se
obtienen de aguas no contaminadas en
donde el microorganismo forma parte
de la microbiota autctona.
La enfermedad del clera fue descrita
por primera ocasin por Pacini en 1854.
Esta se presenta por la ingesta de la
bacteria viable, la cual se establece en
el intestino delgado y libera una toxina
termolbil. La produccin de esta toxina
provoca diarrea acuosa causando los
sntomas caractersticos del clera.

Otros microorganismos pertenecientes al

gnero Vibrio que son causantes de
enfermedades gastrointestinales
transmitidas por alimentos son V.
parahaemolyticus y V. vulnificus.
V. parahaemolyticus es una bacteria
haloflica encontradas normalmente con
microbiota normal de aguas y animales
estuarios. El microorganismo tiene una
distribucin mundial en ambientes
estuarios y costeros, y se ha aislado de
muchas especies de pescados, mariscos y
crustceos.
V. vulnificus es una bacteria haloflica
encontrada en ambientes estuarios y es
fenotpicamente similar a V.
parahaemolyticus. Esta bacteria causa
enfermedades transmitidas por alimentos
y en heridas, cualquiera de stas puede
progresar rpidamente hasta una
septicemia mortal. Los moluscos bivalvos
crudos son la principal
fuente de transmisin alimentaria del V.
vulnificus.

Vibrio parahemolitico

Vibrio vulnificus

IV. PARTE EXPERIMENTAL

Materiales, reactivos y
equipos
Gradilla
Mechero
Tubos de ensayo
Placas petri
Pipetas
Balanza
Pinzas

Vaso de licuadora y licuadora

SSP (solucin salina peptonada)
TCBS

Estufa a 37C

MUESTRA: PESCADO PEJERREY

Proveedor: VIVANDA Av.
Pardo-Miraflores.
Responsable: Lucero
Raymondi
Fecha de compra: 27/10/14
Hora: 5:00 pm

PRE- ENRIQUECIMIENTO
Pesar 25g muestra en
un matraz
Agregar 225ml Agua
Peptonada
Alcalina(APA)
Esta solucin va a
preenriquecer, revitalizar
si es que hubiese
presencia de Vibro
cholerae.
Incubar por 6h/37C

TCNICA DE AISLAMIENTO
A partir de la solucin incubada, sembrar en un
AGAR TCBS(Tiosulfato Citrato Sales Biliares).
Dejar incubar por 24h/ 37C

DETECCIN DE VIBRIO CHOLERAE

Confirmacin Bioqumica (TSI):

Si se encontraron colonias en la placa con
agar TCBS, Inocular en un tubo con TSI
Incubar a 37C por 24h y confirmar lo
siguiente:

Lactosa (+)

Glucosa (+)

SH2 (-)

Gas (-)

DETECCIN DE VIBRIO CHOLERAE

RESULTADOS:
No se encontraron
colonias
Especificas
(amarillas )
-No se realizaron
pruebas bioquimicas
REPORTE: Vibrio cholerae/25g muestra pescado:
AUSENCIA

CONCLUSIONES

Se aprendi a determinar presencia de Vibrio

cholerae presentes en productos hidrobiolgicos.
Se conoci la tcnica de aislamiento de Vibrio
Cholerae a partir de alimentos.
Se explic el fundamento en cada etapa de
anlisis.

DISCUSIONES:

Segn Durazo Beltrn El Agua peptonada

alcalina es un medio de enriquecimiento
utilizado para la bsqueda de Vibro cholerae a
partir de muestras clnicas y de alimentos ya que
la viabilidad de los vibrios se mantiene intacta a
pH alcalino para incrementar la recuperacin
de los mismos.

En la practica, se utiliz 225ml de Agua

Peptonada Alcalina(APA) en 25g de muestra, con
el objetivo de revitalizar la presencia de Vibrio
cholerae ya que la muestra de pescado se
encontraba en refrigeracin antes de usarla.

DISCUSIONES
Segn M Pascual y V Caldern en su libro microbiologa de
los alimentos: Metodologa analtica para alimentos y
bebidas dice: Entre las especies bacterianas de inters
sanitario que pueden formar parte de la microflora
normal del pescado, se encuentran : clostridium
botulinum tipo E y Vibrio parahemolyticus; existe
otra flora que, aunque no es normal en el pescado, se
puede transmitir al hombre por pescado
contaminado: Salmonella,Shigella y vibrio cholerae.
En la practica, el resultado fue AUSENCIA de Vibrio
Cholerae, y es por que debi a las buenas conservacion que
la muestra tuv (en congelacion manteniendo su cadena de
frio), mas no se realiz la Determinacion de Vibrio
parahemolitico que es uno de los microorganismos con
mayor riesgo de presencia en productos hidrobiologicos

BIBLIOGRAFIA
Durazo B. (2006). Aprovechamiento de los
productos pesqueros. Universidad Autonoma de
Baja California. Edicion Tomas Di Bella.
Fernndez Escartn, E. 1981. Microbiologa
Sanitaria. Agua y Alimentos. 1. EDUG.
Guadalajara, Jalisco, Mxico.
ICMSF. 1978. Microorganismos de los Alimentos
1. Tcnicas de anlisis microbiolgico. Ed.
Acribia. Zaragoza, Espaa.