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UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA

ESCUELA LUIS RAZETTI


CTEDRA DE HISTOLOGA NORMAL Y
EMBRIOLOGA

LA TCNICA HISTOLGICA.
Curso 2010-2011

LA TCNICA HISTOLGICA.
HISTOLOGA
Es la rama de la Anatoma que
estudia los tejidos de los animales y
las plantas

ANATOMA MICROSCPICA

LA TCNICA HISTOLGICA.
QU ES LA TCNICA
HISTOLGICA?

TODOS LOS

PROCEDIMIENTOS
DESTINADOS A
OBTENER
PREPARADOS
HISTOLGICOS.

QU ES UN PREPARADO
HISTOLGICO?

Una preparacin

histolgica no es ms
que una rebanada muy
delgada (corte
histolgico) de una
pequea parte de tejido
corporal, colocado
sobre una lmina portaobjeto, coloreada y
cubierta por una lmina
cubre-objeto.

LA TCNICA HISTOLGICA.

Finalidad del estudio microscpico


Conocimiento
microscpica
comprender

de
del

la

estructura

organismo
los

para

procesos

bioqumicos y fisiolgicos que en l


tienen
lugar.
Diagnstico
patolgicos.

de

procesos

LA TCNICA HISTOLGICA.
DEBEMOS TENER PRESENTE

LA TECNICA HISTOLOGICA.
1. CARACTERISTICAS DE LOS TEJIDOS
a. SON BLANDOS
b. RICOS EN AGUA
c. SE AUTOLISAN CUANDO SON RETIRADOS DE SU
IRRIGACIN

2. NECESITAMOS HACER REBANADAS MUY


DELGADAS
a. Poder colorear el tejido
b. Permitir el paso de la luz y ser observado
el tejido bajo el microscopio
Fijarlo
Fijarlo

Endurecerlo
Endurecerlo
POR LO TANTO DEBEMOS

ETAPAS DE LA TCNICA
HISTOLGICA
Obtencin del material
Fijacin
Inclusin y elaboracin del bloque de parafina
Deshidratacin
Aclaramiento
Impregnacin en parafina
Inclusin y elaboracin del bloque de parafina

Elaboracin del corte de tejido y colocarlo

sobre la lmina porta-objeto.


Coloracin
Medio de montaje y lmina cubre-objeto

Organismo
Material de estudio

Fijacin

DESHIDRATACIN
Congelacin

Inclusin +
bloque
Corte
Tincin

Montaje

Observacin

ACLARAMIENTO
INCLUSIN

Obtencin de la muestra

BIOPSIA

AUTOPSIA

Organismo
Material de estudio

Fijacin

DESHIDRATACIN
Congelacin

Inclusin +
bloque
Corte
Tincin

PRINCIPAL USO EN
MEDICINA
Montaje

Observacin

ACLARAMIENTO
INCLUSIN

Organismo
Material de estudio

Fijacin
Fijacin

DESHIDRATACION
Congelacin

Inclusin +
bloque
Corte
Tincin

Montaje

Observacin

ACLARAMIENTO
INCLUSION

FIJACIN.
El objeto de la fijacin es

interrumpir el desarrollo
de los procesos
orgnicos, fijando y
conservando de la forma
ms fidedigna posible el
estado y la situacin en
que se encontraban los
tejidos.
Los fijadores actan
coagulando las sales
proteicas de las clulas,
endureciendo los geles e
inactivando las enzimas.

Condiciones
que debe
cumplir un
fijador:
Preservar el tejido.

No producir

artificios.
No dificultar el
tratamiento
ulterior.
Poder y velocidad
de penetracin.

RECUERDA:
Los tejidos deben ser

colocados en un fijador
tan pronto hayan sido
extirpados.
Los fragmentos de
tejido deben ser
colocados para su
fijacin en un volumen
de fijador que sea 10 a
20 veces mayor que su
volumen, por un
perodo de 6 a 24 horas

Cmo se fija
Sumergiendo un pequeo trozo
de tejido en el fijador
inmediatamente
despus de
Cmo se fija
haber sido extrado. A esta
tcnica se la denomina FIJACIN
POR INMERSIN.

OTRAS FORMAS DE FIJACIN

CON
CALOR

CON
ALCOHOL

Organismo
Material de estudio

Fijacin

DESHIDRATACION
Congelacin

Inclusin +
bloque
Corte
Tincin

Montaje

Observacin

ACLARAMIENTO
INCLUSION

ETAPAS DE LA INCLUSIN EN PARAFINA


TEJIDOS (Ricos en agua)
ALCOHOL
DESHIDRATACION
TEJIDOS RICOS EN ALCOHOL
ACLARAMIENTO
XILOL
TEJIDOS RICOS EN XILOL
IMPREGNACIN EN PARAFINA

PROCESADOR DE TEJIDOS.
Deshidratacion
Aclaramiento
Embebido en la

Parafina (INCLUSION)
DISEO DEL BLOQUE
DE PARAFINA

Realizando el bloque de parafina

BLOQUE DE PARAFINA.

Organismo
Material de estudio

Fijacin

DESHIDRATACION
Congelacin

Inclusin +
bloque
Corte
Corte
Tincin

Montaje

Observacin

ACLARAMIENTO
INCLUSION

MICROTOMO

REALIZANDO EL CORTE

MONTANDO EL CORTE EN LA LMINA


PORTAOBJETO

Organismo
Material de estudio

Fijacin

DESHIDRATACION
Congelacin

Inclusin +
bloque
Corte
Tincin
Tincin

Montaje

Observacin

ACLARAMIENTO
INCLUSION

Para
lograr
contraste
suficiente
entre
los
distintos componentes de
las clulas y poderlos
diferenciar
con
el
microscopio de luz, se
emplean
substancias
denominadas colorantes.

COLORACION CON HEMATOXILINA y EOSINA

HEMATOXILINA

EOSINA

BASOFILO
CAPTA LA HEMATOXILINA

ACIDOFILO
CAPTA LA EOSINA

EOSINA
Colorantes cidos:

como por ejemplola


eosina, colorante
cargado en forma
negativa, se une a
componentes celulares
cargados
positivamente. Estos
componentes cargados
positivamente se
denominan acidfilos,
porque tienen afinidad
por los colorantes

HEMATOXILINA
Colorantes bsicos: como

por ejemplo el azul de


metileno, colorante cargado
positivamente, se une a
componentes celulares
cargados negativamente.
Estos componentes cargados
negativamente se
denominan basfilos, porque
tienen afinidad por los
colorantes bsicos. Por
ejemplo, estos colorantes se
unen al ncleo y ciertas
regiones del citoplasma.

Como caso particular, la

hematoxilina no tiene carga,


para teir un tejido se la une a
un mordiente que junto a la
hematoxilina forman una laca.
La laca es bsica y por lo tanto
se une a cargas negativas de
la clula o matriz extracelular.

CUALES SON LAS


CARACTERISTICAS DEL TEJIDO
CORTADO Y COLOCADO EN LA
LAMINA PORTAOBJETO
TEJIDO EMBEBIDO EN PARAFINA

OS COLORANTES SON A BASE DE AGUA Y ALCOHOL

QUE HACEMOS???

Es necesario desparafinar e hidratar


los cortes invirtiendo el orden de la
inclusin en parafina.

Coloracin de H/E
Etapas de la coloracin de Hematoxilina y
Eosina
DESPARAFINAR
REHIDRATAR
HEMATOXILINA
DIFERENCIAR
EOSINA
DESHIDRATACIN
ACLARAMIENTO
BATERIA DE COLORACIN.

FINALMENTE
La

seccin
teida
debe
colocrsele un cubreobjetos
para proteger el tejido y
poderlo
observar
durante
aos.

Previamente a la
colocacin del
cubreobjetos se cubre con
una resina inmiscible en
agua. Ejemplos: Blsamo
de Canad, Mar-Tex etc

Colocando la lmina cubre-objetos

FJATE, Como la resina es


inmiscible en agua, una vez
coloreado el preparado, ste
es deshidratado en
soluciones de alcohol
crecientes y luego colocado
en un agente aclarante como
el xilol, de manera tal la
resina sea miscible en el
tejido.

Preparados histolgicos teidos


con H/E

COMPLETA EL SIGUIENTE CUADRO


ETAPA
FIJACIN
DESHIDRATACIN
ACLARAMIENTO
INCLUSIN
CORTE

FINALIDAD

DURACIN

COLORACIONES ESPECIALES
HISTOQUMICA
GRAM

TRICROMICO DE GOMORI

COLORACIONES ESPECIALES
HISTOQUMICA

PAS

TCNICAS DE
INMUNOHISTOQUMICA

TCNICA HISTOLGICA
PROBLEMAS DE INTERPRETACIN

TCNICA HISTOLGICA
PROBLEMAS DE INTERPRETACIN

Corte transversal
LUZ

PARED

Corte
longitudinal

LUZ

PARED

LUZ

10
x

40x