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Petruccio Tenrio Medeiros

CROMATOGRAFIA
Histrico

M. TSWEET (1903): Separao de misturas de


pigmentos vegetais em colunas recheadas com
adsorventes slidos e solventes variados.
ter de
petrleo
mistura de
pigmentos

CaCO

pigmentos
separados

Cromatografia =
kroma [cor] + graph [escrever]
(grego)

CROMATOGRAFIA
Princpio Bsico

Separao de misturas por interao diferencial dos seus


componentes entre uma FASE ESTACIONRIA (lquido ou
slido) e uma FASE MVEL (lquido ou gs).

CROMATOGRAFIA

Modalidades e Classificao

FM = Lquido

Cromatografia
Lquida

FM = Gs

Cromatografia
Gasosa (CG)

Slida

Cromatografia
Gs-Slido (CGS)

Lquida

Cromatografia
Gs-Lquido (CGL)

Em CG a FE
pode ser:

CROMATOGRAFIA GASOSA
Histrico

1940

CGS rudimentar
CGL proposta (Martin e Synge)
Separao de cidos orgnicos por CGL: primeiro cromatgrafo (Martin e James)

1950

Primeiro equipamento comercial (Griffin & George)


Detector por Densidade de
Gs (Martin e James)
Detector por Ionizao em
Chama (McWillian e Dewar)
Detector por Captura de Eletrons
(Lovelock e Lipsky)

1960

Colunas Capilares (Golay)

Presentemente:
Vendas de equipamentos e acessrios para CG nos EUA
estimadas em mais de US$ 750.000.000 (1995).

CROMATOGRAFIA GASOSA
Aplicabilidade

Quais misturas podem ser separadas por CG ?

(para uma substncia qualquer poder ser


arrastada por um fluxo de um gs ela
deve ser dissolver - pelo menos parcialmente nesse gs)

Misturas cujos constituintes sejam

VOLTEIS (=evaporveis)
DE FORMA GERAL:
CG aplicvel para separao e anlise
de misturas cujos constituintes tenham
PONTOS DE EBULIO de at 300oC
e que termicamente estveis.

O Cromatgrafo a Gs
1

6
2

5
3
1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso.
2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra.
3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna.
4 - Detector.
5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal.
6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador).
Observao: em vermelho: temperatura controlada

INSTRUMENTAO
Gs de Arraste

Fase Mvel em CG: NO interage com a


amostra - apenas a carrega atravs da coluna.
Assim usualmente referida como GS
DE ARRASTE

Requisito
s:

INERTE No deve reagir com a amostra,


fase estacionria ou superfcies do
instrumento.
PURO Deve ser isento de impurezas que
possam degradar a fase estacionria.
Impurezas tpicas em gases e seus
efeitos:

H2O,
O2
hidrocarbonet
os

oxida / hidroliza algumas


FE
incompatveis com DCE
rudo no sinal de
DIC

INSTRUMENTAO
Gs de Arraste

Requisito
s:

CUST
O

CUSTO Gases de altssima pureza podem


ser muito caros.
A = 99,995 %
(4.5)
B = 99,999 %
(5.0)
C = 99,9999 %
(6.0)

C
A

PUREZ
A

COMPATVEL COM DETECTOR Cada


detector demanda um gs de arraste
especfico para melhor funcionamento.
Seleo de Gases de Arraste em Funo do
Detector:
He ,
DC
H2
T
N2 ,
DI
H
C
N2 (SS), Ar + 5%

DC
E

CH4

INSTRUMENTAO

Alimentao de Gs de Arraste
Componentes necessrios linha de
gs:
controladores de vazo / presso
de gs
dispositivos para purificao de gs
(traps)
3
6
4

2
1
5

1 - Cilindro de Gs
2 - Regulador de Presso Primrio
3 - Traps para eliminar impurezas do gs
4 - Regulador de Presso Secundrio
- Regulador de Vazo (Controlador Diferencial de Fluxo
6 - Medidor de Vazo (Rotmetro)
Nota: Tubos e Conexes: Ao Inox ou Cobre

INSTRUMENTAO

Dispositivos de Injeo de Amostra


Os dispositivos para injeo (INJETORES
ou VAPORIZADORES) devem prover
meios de introduo INSTANTNEA da
amostra na coluna cromatogrfica
Injeo
instantnea:
t=0

t=x
Injeo lenta:
t=0

t=x

INSTRUMENTAO

Injetor on-column Convencional


1
2
3
4

1
2
3
4

Septo (silicone)
Alimentao de gs de arraste)
Bloco metlico aquecido
Ponta da coluna cromatogrfica

INSTRUMENTAO

Injeo on-column de lquidos

1 - Ponta da agulha da microseringa


introduzida no incio da coluna.
2 - Amostra injetada e vaporizada
instantneamente no incio da coluna.
3 - Plug de vapor de amostra forado pelo
gs de arraste a fluir pela coluna.

INSTRUMENTAO
Parmetros de Injeo

TEMPERATURA DO INJETOR Deve ser


sufi-cientemente elevada para que a
amostra vapo-rize-se imediatamente, mas
sem decomposio
Regra Geral: Tinj = 50oC acima da
temperatura de ebulio do componente
menos voltil
VOLUME INJETADO Depende do tipo de
coluna e do estado fsico da amostra
COLUNA
empacotada
= 3,2 mm
(1/4)
capilar
= 0,25 mm

Amostra
s
Lquidas

Amostra
s
Gasosas

0,2 L ... 20
L

0,1 ml ... 50
mL

0,01 L ... 3
L

0,001 ml ... 0,1


mL

Slidos: convencionalmente se dissolve


em um solvente adequado e injeta-se a
soluo

INSTRUMENTAO

Microsseringas para Injeo


LQUIDOS Capacidades tpicas: 1 L, 5 L e 10
L
Microseringa de 10
L:

agulha (inox
316)

mbol
o

corpo
(pirex)

Microseringa de 1 L (seo ampliada):


corpo

agulha

guia
mbolo (fio de
ao soldado ao
guia)

INSTRUMENTAO

Colunas: Definies Bsicas

EMPACOTADA
= 3 a 6 mm
L = 0,5 m a 5 m

CAPILAR
= 0,1 a 0,5 mm
L = 5 m a 100 m

Recheada com slido


pul-verizado (FE
slida ou FE lquida
depositada sobre as
partculas do recheio)

Paredes internas
recober-tas com um
filme fino (fra-o de
m) de FE lquida ou
slida

INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna

Alm da interao com a FE, o tempo que


um analito demora para percorrer a coluna
depende de sua PRESSO DE VAPOR
(p0).
Estrutura
qumica
do analito
p0 =
Temperatur
f
a
da coluna
Temperatura
da
coluna

Presso
de
vapor

ANALITO ELUI MAIS RAPIDAMENTE (MENOR RETENO)

Velocidade
de
migrao

INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna

TEMPERATURA DA
COLUNA
CONTROLE CONFIVEL DA
TEMPERATURA DA COLUNA
ESSENCIAL PARA OBTER BOA

INSTRUMENTAO
Forno da Coluna

Caractersticas Desejveis de um
Forno:
AMPLA FAIXA DE TEMPERATURA
DE USO Pelo menos de Tambiente at
400oC. Sistemas criognicos (T <
Tambiente) podem ser necessrios em
casos especiais.
TEMPERATURA
INDEPENDENTE
DOS DEMAIS MDULOS No deve
ser afetado pela temperatura do
injetor e detector.
TEMPERATURA UNIFORME EM
SEU
INTERIOR
Sistemas
de
ventilao interna muito eficientes
para
manter
a
temperatura
homognea em todo forno.

INSTRUMENTAO
Forno da Coluna

Caractersticas Desejveis de um
Forno:
FCIL ACESSO COLUNA A
operao de troca de coluna pode
ser frequente.
AQUECIMENTO E ESFRIAMENTO
RPIDO
Importante
tanto
em
anlises de rotina e durante o
desenvolvimento de metodologias
analticas novas.

TEMPERATURA ESTVEL E
REPRODUTVEL

A temperatura deve ser mantida com


exatido e preciso de 0,1C.
Em cromatgrafos modernos (depois de
1980),
o controle de temperatura do forno
totalmente operado por

INSTRUMENTAO
Forno da Coluna

Caractersticas Desejveis de um
Forno:
FCIL ACESSO COLUNA A
operao de troca de coluna pode
ser frequente.
AQUECIMENTO E ESFRIAMENTO
RPIDO
Importante
tanto
em
anlises de rotina e durante o
desenvolvimento de metodologias
analticas novas.

TEMPERATURA ESTVEL E
REPRODUTVEL

A temperatura deve ser mantida com


exatido e preciso de 0,1C.
Em cromatgrafos modernos (depois de
1980),
o controle de temperatura do forno
totalmente operado por

INSTRUMENTAO

Programao Linear de Temperatura


Misturas complexas (constituintes
com volatilidades muito diferentes)
separadas ISOTERMICAMENTE:
TCOL BAIXA:
- Componentes mais
volteis so separados
- Componentes menos
vol-teis demoram a
eluir, saindo como picos
mal definidos

TCOL ALTA:
- Componentes mais
vol-teis no so
separados
- Componentes menos
vol-teis eluem mais
rapidamente

INSTRUMENTAO

Programao Linear de Temperatura


A temperatura do forno pode ser
variada linearmente durante a
separao:
Consegue-se boa
separao dos
componentes da
amostra em
menor tempo

TINI

Temperatura Inicial

TFIM

Temperatura Final

tINI

Tempo Isotrmico

Inicial

tFIM

Tempo Final do

Programa

Velocidade de
Aquecimento

TEMPERATURA

Parmetros de uma programao de


temperatura:
TFIM
R
TIN
I

tFIM

tINI
TEMPO

INSTRUMENTAO

Programao Linear de Temperatura


Possveis problemas associados
PLT:
VARIAES

DE

VAZO

DO

GS

DE

A viscosidade de um gs
aumenta com a temperatura.
ARRASTE

viscosidad
e

vaz
o

DERIVA (DRIFT) NA LINHA DE BASE

Devido ao aumento de volatilizao


de FE lquida

INSTRUMENTAO
Detectores

Dispositivos que examinam


continuamente o material eluido, gerando
sinal quando da pas-sagem de
substncias que no o gs de arraste

Grfico Sinal x Tempo = CROMATOGRAMA


dealmente: cada substncia separada aparec
como um PICO no cromatograma.

INSTRUMENTAO
Detectores

Mais Importantes:
DETECTOR

POR

CONDUTIVIDADE

TRMICA (DCT OU

condutividade
arraste.

TCD) Variao da
trmica do gs de

DETECTOR POR IONIZAO EM CHAMA


(DIC OU

FID) ons gerados durante a


queima dos eluatos em uma chama
de H2 + ar.
DETECTOR POR CAPTURA DE ELTRONS
(DCE OU

ECD) Supresso de corrente


causada pela absoro de eltrons
por eluatos altamente eletroflicos.
ANALGICO

REGISTRO
DE
SINAL

Registradores
XY

DIGITAL

Integradore
s
Computador

TEORIA BSICA

Tempo de Reteno Ajustado, tR


O parmetro diretamente mensurvel de
reteno de um analito o
TEMPO DE RETENO AJUSTADO, tR:

SINA
L

tR
tR = tR tM

t
M

TEMP
O
tR = Tempo de Reteno (tempo decorrido
entre a in-jeo e o pice do pico
t = Tempo decromatogrfico)
Reteno do Composto NoM

Retido (tempo mnimo para um composto


que no interaja com a FE atravesse a
coluna) Ajustado (tempo
t = Tempo de Reteno
R

mdio que as molculas do analito passam

TEORIA BSICA

Volume de Reteno Ajustado, VR


Embora no diretamente mensurvel, o
par-metro fundamental de reteno o
VOLUME DE RETENO AJUSTADO,
VR:
vazo do gs de
arraste

t R t R t M x FC
VR = Volume de Reteno (volume de gs de
arraste necessrio para eluir um analito)
VM = Volume de Fase Mvel (volume de gs
de ar-raste contido na coluna; volume
morto) Ajustado (volume
VR = Volume de Reteno
de gs de arraste consumido enquanto o
analito est sorvido na FE)

V R =
f

Fatores
termodinmicos

Parmetros dimensionais da
coluna

TEORIA BSICA

Constante de Distribuio, KC
Coluna cromatogrfica: srie de estgios
inde-pendentes onde acontece o equilbrio
entre o analito dissolvido na fase estacionria
e no gs de arraste:

Ocorre um quaseequilbrio en-tre o analito


sorvido na FE e dis-solvido
no gs de arraste.

KC

A S
A M

KC = Constante de
Distribuio

[A]S = concentrao do analito


na FE
Afinidade pela
[A]
[A]M = concentrao do analito
FE
S
no gs
MENOR

RETENO !!!

Volatilida
de

[A]

TEORIA BSICA
Fator de Reteno, k

Exprimindo o equilbrio em termos da MASSA


do analito em cada fase, ao invs da
concentrao:

FATOR DE RETENO,
k: razo entre as
massas de analito
contidas na FE (Ws) e
gs de arraste (WM)
RAZO DE FASES, :
razo entre volumes
de FE e gs de arraste
na coluna

WS
k
WM
VM

VS

O fator de reteno k
depen-de da constante
termodi-nmica de
distribuio KC e da
razo de fases

da

TEORIA BSICA
Razo de Fases,
Depende das DIMENSES da coluna:
L = comprimento da
coluna

rC = raio
da
coluna

df =
espessura
do filme de
FE rC

df
2rCd f

Valores de para
colunas capilares
de dimenses
tpicas:
Empacotadas
:
5 < < 50

rC >>
df

dC / mm

df / m

0.10
0.20
0.20
0.25
0.25
0.32
0.32
0.32
0.53
0.53
0.53

0.10
0.11
0.33
0.25
1.00
0.17
0.52
1.00
0.88
2.65
5.00

250
455
152
250
63
471
154
80
151
50
27

TEORIA BSICA
Relaes entre VR, KC e

VR pode ser definido em funo de KC


e
VR depende diretamente da constante de
dis-tribuio do soluto entre a FE e o gs
de arraste e das dimenses da coluna.
Outra
combina
o
possvel:

possvel estimar
tanto o fator de
reteno quanto a
constante de
distribuio a
partir do
cromatograma

TEORIA BSICA
Eficincia de Sistemas
Cromatogrficos

TEMP
O

A migrao um
analito pela
coluna provoca
inevitavelmente
o alargamento da
sua banda:

Efeitos do alargamento excessivo de picos:


Picos mais largos e
Separao
menos intensos =
deficiente de
menor
analitos com
detectabilidade
retenes prximas.

EFICINCIA Capacidade de eluio


com o mnimo de disperso do

TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
Supondo a coluna cromatogrfica como uma
srie de estgios separados onde ocorre o
equilbrio entre o analito, a FE e o gs de
arraste:

Cada estgio de
equilbrio chamado
de PRATO TERICO
O nmero de pratos
te-ricos de uma
coluna (N) pode ser
calculado por:

t
R

Coluna
mais
eficiente

TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
ALTURA EQUIVALENTE A UM PRATO
TERI-CO (H) Tamanho de cada estgio
de equilbrio
(L = comprimento da
coluna)

Valores tpicos de H e N:

Capilares, L =
30 m

Empacotadas, L =
2m

dC

df

0.10
0.25
0.32
0.32
0.32
0.32
0.53
0.53
2.16
2.16

0.25
0.25
0.32
0.50
1.00
5.00
1.00
5.00
10%
5%

0.081
0.156
0.200
0.228
0.294
0.435
0.426
0.683
0.549
0.500

370370
192308
150000
131579
102041
68966
70423
43924
3643
4000

Valores de H para colunas capilares e


empacotadas so prximos, mas como L
para capilares MUITO maior tipicamente

TEORIA BSICA
Otimizao da Eficincia

A altura equivalente a um prato torico


funo da velocidade linear mdia do gs
de arraste u:

HMIN
uMAX

O valor de
H pode ser
minimizad
o
otimizando
-se a vazo
de gs de
arraste

Relaes algbricas entre


H e u:

- Colunas Empacotadas: Equao de van


Deemter

(A, B, C =
constantes)
- Colunas Capilares: Equao de
Golay

(B, CM, CS =
constantes)

FASES ESTACIONRIAS
Conceitos Gerais
LQUIDOS Depositados sobre a superfcie
de: s-lidos porosos inertes (colunas
empacotadas) ou de tubos finos de materiais
inertes (colunas capilares)
FE
lquida
SUPORTE
Slido
inerte
poroso

Tubo capilar
de material
inerte

Para minimizar a perda de FE lquida por


volatilizao, normalmente ela :

Entrecruzada: as
cadeias
polimricas so
quimicamente
ligadas entre si

Quimicamente
ligadas: as cadeias
polimricas so
presas ao suporte
por ligaes
qumicas
SLIDOS Colunas recheadas
com material
finamente granulado (empacotadas) ou
depositado sobre a superfcie interna do tubo

FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
SELETIVA Deve interagir
diferencialmente com os
componentes da amostra.
FE Seletiva:
separao
adequada dos
constituintes
da amostra

FE pouco
Seletiva: m
resoluo
mesmo com
coluna de boa
eficincia
Regra geral: a FE deve ter caractersticas
tanto quanto possvel prximas das dos
solutos a serem separados (polar, apolar,
aromtico ...)

FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
AMPLA FAIXA DE
TEMPERATURAS DE USO Maior
flexibilidade na otimizao da
separao.

BOA ESTABILIDADE QUMICA E


TRMICA Maior durabilidade da
coluna, no reage com componentes
da amostra

POUCO VISCOSA Colunas mais


eficientes (menor resistncia
transferncia do analito entre fases)

DISPONVEL EM ELEVADO GRAU


DE PUREZA Colunas reprodutveis;
ausncia de picos fantasma nos
cromatogramas.

FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas: Adsoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel
pela interao analito + FE slida a

ADSORO

A adsoro ocorre na interface entre o


gs de arraste e a FE slida
Slidos com grandes
reas superficiais
(partculas finas,
poros)
ADSOR
O

Solutos polares
Slidos com grande
nmero de stios
ativos (hidroxilas,
pares de eletrons...)

FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas
Caractersticas
- Slidos Gerais:
finamente granulados

(dimetros de partculas tpicos de 105 m a 4202 m).


- Grandes reas superficiais (at 10 m2/g).

Mais
usados:
Polmeros Porosos
Porapak (copolmero
estireno-divi-nilbenzeno), Tenax (polixido de
difenileno)
Slidos Inorgnicos Carboplot, Carboxen
(carves ativos grafitizados), Alumina, Peneira
Molecular (argila microporosa)

Principais
Aplicaes:

- Separao de gases
fixos
- Compostos leves
- Sries homlogas
GASES DE REFINARIA
Coluna:Carboxen-1000 6080
mesh; 15 x 1/8
TCOL: 35oC a 225oC / 20oC.
min-1
Gs de Arraste: He @ 30
ml.min-1

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
POLIGLICIS Muito polares; sensveis
a umidade e oxidao; ainda muito
importantes. Principal: Polietilenoglicol
(nomes comerciais: Carbowax, DB-Wax,
Supelcowax, HP-Wax, etc.)
Estrutura
H O CH2 CH2 OH
Qumica:

AMINAS ALIFTICAS
Coluna:4 % Carbowax 20M s/ Carbopack B + 0,8% KOH
TCOL: 200oC (isotrmico)
Gs de Arraste: N2 @ 20
mL.min-1

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Maior parte das aplicaes em CG
moderna
Quatro grandes
grupos
estruturais:
PARAFINAS Apolares; alta inrcia
qumica; praticamente abandonadas.
Principais: esqua-lano (C30H62), Apiezon
(graxas para vcuo).

POLISTERES steres de dilcoois


com di-cidos. Polares; altamente
sensveis a umidade e oxidao; uso
em declnio. Principais: DEGS, EGA,
EGS.
STERES METLICOS DE
CIDOS GRAXOS
Coluna:5%DEGS-PS s/ Supelcoport 100/120 mesh; 6 x
1/8
TCOL: 200oC (isotrmico)
Gs de Arraste: N2 @ 20
ml.min-1
Detector: FID
Amostra: 0,5 L de soluo
em clorofrmio contendo
0,5 g de cada ster

FASES ESTACIONRIAS
FE Lquidas: Absoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel
pela interao analito + FE lquida a

ABSORO

A absoro ocorre no interior do filme


de FE lquida (fenmeno INTRAfacial)
Filmes espessos de
FE lquida

ABSOR
O

Grande superfcie
lquida exposta ao
gs de arraste
Interao forte
entre a FE lquida e
o analito (grande
solubilidade)

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
SILICONES (polisiloxanas) As FE
mais em-pregadas em CG. Cobrem ampla
faixa de pola-ridades e propriedades
qumicas diversas.
CH3
H3C Si
CH3

R1
O Si
R2

CH3
O Si CH3 R1, R2 = qualquer
n

CH3

radical orgnico

- Ligao Si-O extremamente estvel =


elevada estabilidade trmica e qumica das
FE.
- Silicones so fabricados em larga escala
para diversas aplicaes = minimizao de
custo do produto + tecnologia de produo e
purificao largamente estudada e conhecida.

- Praticamente qualquer radical orgnico ou


inorgnico pode ser ligado cadeia
polimrica = FE ajustveis a separaes
especficas + facilidade de imobilizao por

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
FE derivadas de polidimetilsiloxano (PDMS)
por substituio de -CH3 por radicais
orgnicos, em ordem crescente aproximada
de polaridade:
Substituintes
Nomes Comerciais
Observaes
-

SE-30 OV-1 OV-101 SP-2100

mais apolares da srie


pouco seletivas
similar a PDMS
estvel at > 400oC

carborano ?

Dexsil 300GC

fenil 5 %

SE-52 SE-54 OV-3 OV-5


OV-73

pouco polar

cianopropil 7%

fenil 7%

OV-1701 SPB-7 CP-Sil 19CB

moderadamente polar

fenil 50 %

OV-17 SP-2250 HP-50+


SPB-50

moderadamente polar
retm aromticos

trifluoropropil 50%

OV-210 QF-1

moderadamente polar
retm compostos carbonlicos

cianopropil 50%

fenil 50%

OV-225 SP-2300 CP-Sil


43CB

polar
retem doadores de eltrons

cianopropil 100%

SP-2340 SP-2330 Silar-9 CP

altamente polar

Diferenas entre FE de composio


similar provenientes de
fornecedores diferentes: pureza,
viscosidade.

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de pesticidas - FE = 100 %
PDMS
1 - TCNB
2 - Dichloram
3 - Lindano
4 - PCNB
5Pentacloroanilina
6 - Ronilano
7 - Antor
8 - pp-DDE
9 - Rovral
10 - Cypermetrin
11 - Decametrin

17 min

Coluna: CP-Sil 5 (25 m x 0,32 mm x


0,12 om)
TCOL:195 C (6,5 min) / 195oC a 275oC
(10oC.min-1)
Gs de Arraste: He @ 35
Detector:
cm.min-1
FID
Amostra: 2 L de soluo dos pesticidas on-

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de piridinas - FE = 100 %
CNpropilsilicone
1 - piridina
2 - 2-metilpiridina
3 - 2,6dimetilpiridina
4 - 2-etilpiridina
5 - 3-metilpiridina
6 - 4-metilpiridina

3 min

Coluna: CP-Sil 43CB (10 m x 0,10 mm x


0,2 m)
TCOL:110oC
(isotrmico)
Detector:
Gs de Arraste:
N2 @ 16
FID
cm.min-1
Amostra: 0,1 L de soluo 1-2% das
piridinas em 3-metilpiridina

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de fenis - FE =
fenilmetilsilicones

50%
Ph
50%
Me

5% Ph
95%
Me

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Separao de ismeros
ticos:
PRODUTOS BIOLGICOS Distino entre
pro-dutos de origem sinttica e natural
(natural = normal-mente substncias
oticamente puras; sinttico = mui-tas vezes
so misturas racmicas).
FRMACOS Em muitos frmacos apenas um
dos ismeros ticos tm atividade
farmacolgica.
Propriedades fsico-qumicas de ismeros
ticos so MUITO SIMILARES

FE convencionais no interagem
diferencialmente com ismeros ticos

Separao de misturas de ismeros


ticos s possvel com FE
oticamente ativas
=

FE Quirais

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
FE oticamente ativas mais
importantes:
CH
3

Si

CH3

Derivados de
aminocidos:
Misturas de
compostos
formadores de
pontes de
hidrognio.

CH3
Si
CH2

CH3

CH O

NH C
C

CH3

CH3

C*

CH CH3
CH3

ChiralsilVal
CH3
O

Si
CH3

Organometlicos:

CH3

CH3
O

Si
CH2

CH2

Separao de
enantimeros
formadores de
complexos.

O
Ni
O
C3F7

Chiralsil-

/
2

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Derivados de ciclodextrinas
alquiladas:
-ciclodextrina:
oligosacardeo
cclico quiral

ChiralsilDex

- Introduzidas em
1983
- Quando ligadas a cadeias de polisiloxano:
uso extremamente favorvel como FE lquida
(viscosidade baixa, estabilidade ...)
- Podem ser quimicamente imobilizadas nas
colunas
- Colunas disponveis comercialmente

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
leo essencial artificial de limo:
separao de terpenos primrios

1 - (+/-) pineno
2 - sabineno
3 - (+/-) pineno
4 - (+/-)
limoneno

Coluna: Rt-DEXsm (30 m x 0.32 mm x


0.25 m)
TCOL: 1 min a 40C / 2C min-1 / 3 min a 200C
Gs de Arraste: H2 @ 80

Detector:

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
Aroma de bergamota: distino entre
aroma natural e artificial

leo essencial
natural

Essncia
artificial

Coluna: Rt-DEXse (30 m x 0.32 mm x


0.25 m)
TCOL: 1 min a 40C / 4C min-1 / 200C
Gs de Arraste: He @ 80

Detector:

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
Anfetaminas: resoluo dos ismeros

Coluna: Rt-DEXcst (30 m x 0.25 mm x


0.25 m)
TCOL: 1 min a 120C / 1,5C min-1 / 3 min A
175C

Gs de Arraste: He @ 25
cm.min-1

Detector:

COLUNAS EMPACOTADAS
Definies Bsicas
Tubo de material inerte recheado com FE
slida gra-nulada ou FE lquida depositada
sobre suporte slido.
MATERIA
L
DO
TUBO

Granulometr
ia
do
recheio

ao
inox
vidro
pirex
nque
lTEFLON
MES
H
60 - 80
mesh
80 - 100
mesh
100 - 120
mesh

= 3 mm a 6
mm
L = 0,5 m a
5m
dp
177 - 250
m
149 - 177
m
125 - 149
m

Eficincia maximizada
com:
Limitados pela
- Diminuio de
resistncia
dC
passagem de gs de
- Diminuio de
arraste
dp
- Recheio
regular

COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Suporte
A FE lquida deve
ser disposta
sobre um
SUPORTE slido

rea superficial entre 0,5 e 10


m2.g-1
microporos regulares (~
1 m)
NO interagir com a
amostra
boa resistncia
mecnica

Uso quase universal:

TERRA

DIATOMCEA

Esqueletos
fsseis (SiO2 +
xidos
metlicos) de
algas
microscpicas

secage
m
calcina
o
fuso com
soda
lavagem com
cido
silaniza
o

Chromosorb
Anachrom
Supelcoport
...

COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Suporte
Chromosorb - caractersticas
gerais
Chromosorb P Rseo, muito
ativo.
Chromosorb
W Branco, mais inerte
que o P.

AW

NOME

m 2 .g -1

Chromosorb P
Chromosorb W
Chromosorb G

4,0
1,0
0,5

g.ml

-1

0,47
0,24
0,58

Tratamentos
especiais:

% Mx. de FE

Tamanho de Poro

rea Superficial

Ordem
crescente
de inrcia

mecnica

Densidade Aparente

Chromosorb G Similar ao W, maior resistncia

0,4 - 2
8-9
-

30
15
5

Lavado com cido, para remoo de


metais
NAW Sem lavagem com
cido
HP ou DMCS ou HDMS Silanizados (menor
adsoro)

COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Carga de FE
df = f (% FE no
recheio)

Maior eficincia (d f =
Menor sangria da FE com temperatura
N)
programada
Separaes rpidas e em temperaturas
menores

%
FE
Maiores
volumes de
Melhor blindagem amostra
dos stios adsortivos do
suporte
Melhor reprodutibilidade no preparo do
recheio

TIPICAMENTE % FE = 1 % a 30 % do
recheio

COLUNAS CAPILARES
Definies Bsicas
Tubo fino de material inerte com FE lquida
ou slida depositada sobre as paredes
internas.
slica
= 0,1
MATERIA
vidro
fundida
mm
ao
L
pirex
aL0,5
mm
=
5
Nylon
inox
DO
m
Silcostee
TUBO
a 100
l
Colunas de slica so revestidas externamente com
m

CAPILARES

camada de polmero (poliimida) para aumentar


resistncia mecnica e qumica

Colunas Capilares x
Empacotadas:
L = N Colunas mais
eficientes
FC = 1 ... 10 mL.min-1 Controle de vazo
mais difcil
Vi Dispositivos especiais de
injeo

WCOT

Famlias de Colunas
Capilares :

(Wall coated open tube) FE liquida deposida


(ligada // entrecruzada) sobre as paredes internas.

PLOT

(Porous layer open tube) Camada de FE slida


presa s paredes internas

SCOT

(Support coated open tube) Predes internas


revestidas com material de recheio similar ao das

COLUNAS CAPILARES
Dimetro Interno
dC =
Eficincia

0,10
mm

1
1

Valores
comuns:
0,25
0,32
mm
mm

0,53
mm

Colunas de altssima eficincia


(amostras complexas, Fast GC);
capacidade volumtrica limitada de
processamento de amostra
Dimetros mais comuns; capacidade
volumtrica limitada de amostra requer
dispositivos especiais de injeo
Colunas megabore: menor eficincia,
mas maior capacidade de
processamento permite uso de injetores
convencionais

COLUNAS CAPILARES
Fast GC: Colunas Capilares
Finas

Alm de colunas finas: necessrio


controle acurado de vazo (controle
eletrnico de presso) e altas velocidades
de aquecimento da coluna.
Destilao simulada de leo
diesel:

Coluna: HP-1 (1 m x 0.10 mm x


0.40 m)
TCOL: 35C / 40C min-1 / 0,75 min A 310C
Gs de Arraste: He @ 90
ml.min-1

Detector:
FID

COLUNAS CAPILARES
Colunas Capilares: Injeo
Baixa capacidade de processamento de
amostra (sub-microlitro)

Injeo direta com microseringa muito


difcil !!!

Injetores com diviso (splitters)


Sistema pneumtico despreza frao da
1 amostra injetada

2
3
4

1 - Septo;
2 - Entrada de gs de
arraste;
3 - Liner (misturador);
4 - Coluna Capilar
5 - Purga de gs de
arraste;
6 - Vlvula de controle de
purga.
6

- Menor sensibilidade (boa parte da amostra


desprezada)
- Diviso da amostra raramente uniforme
(frao purgada dos constituintes menos volteis
sempre menor)
- Ajuste da razo de diviso mais uma fonte de
erros

COLUNAS CAPILARES
Large Volume Injection (LVI)
Combinando injetores com temperatura
programada, vl-vulas controladas por
microprocessador e pr-colunas pode ser feita
injeo de grandes volumes (> 100 L) de amostra

1 Colunas e
injetor frios;
vlvula de
purga aberta
(solvente
eliminado)

2 Colunas e
injetor
aquecidos;
vlvula de
purga fechada
(constituintes
de interesse
transferidos
para coluna

COLUNAS CAPILARES
Large Volume Injection (LVI)
Separao de PAH com LVI (Vinj = 25 L,
soluo 400 ppb em CH2Cl2)

Coluna: HP-5 (30 m x 0.25 mm x


0.25 m)
TCOL: 5 min a 50C / 20C min-1 / 2 min A
320C

Gs de Arraste: He @ 2
ml.min-1

Detector:
FID

COLUNAS CAPILARES
Colunas Multicapilares
Feixes paralelos
de colunas
capilares com dC
convencional
- Eficincia prxima das colunas
- Capacidade similar das colunas
convencionais
- Colunas mais curtas: anlises mais
empacotadas
rpidas
Separao de
explosivos em
coluna multicapilar
(OV-17, 1000
capilares
x 6 m)
1 - 2,6-DNT
2 - 2,4-DNT
3 - 2,4,6TNT
4 - 3,4,5TNT
5 - 2,3,4TNT
6 - RDX ?
7 - tetryl

DETECTORES
Definies Gerais
Dispositivos que geram um sinal eltrico
proporcional quantidade eluida de um
analitoj usados
~ 60 detectores
em CG
~ 15 equipam cromatgrafos
comerciais
4 respondem pela maior parte das
aplicaes

DCT TCD

DIC FID

Detector
por
Condutivida
de
Trmica

Detector
por
Ionizao
em
Chama

DCE ECD

EM MS

Detector
por
Captura de
Eletrons

Detector Espectromtri
co de
Massas

DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho
QUANTIDADE MNIMA DETECTVEL

SINAL
(S)

Massa de um analito que gera um pico com


altura igual a trs vezes o nvel de rudo

S =
N 3
RUDO
(N)

RUDO Qualquer componente do sinal gerado


pelo detector que no se origina da amostra

Fontes
de
Rudo

Contaminantes nos
gases
Impurezas acumuladas no
detector
Aterramento eltrico
deficiente

DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho
LIMITE DE DETEO
Quantidade de
analito que gera um pico com S/N = 3 e w b =
1 unidade de tempo
Mesmo detector, nvel de rudo e massa de analito
MAS diferentes larguras de base:

QMD =
f

wb
Detector (sinal gerado,
rudo)
Largura do pico
cromatogrfico

Definindo limite de deteco


como:
LD independente da eficincia do sistema
cromatogrfico !
[QMD] =
massa
(ng,
pg ...)

[LD] =
massa / tempo
(ng.s-1, pg.s1

...)

DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho

VELOCIDADE DE RESPOSTA Tempo


decorrido entre a entrada do analito na cela
do detector e a gerao do sinal eltrico.

SINA
L

Constante de
Tempo, :
tempo
necessrio para
o sinal chegar a
63,2 % FSD (full
63,2%
scale deflection
FSD
= fundo de
escala) aps a
entrada de
TEMP
amostra
O
A constante de tempo do sistema (detector +
dispositivos de registro de sinal) igual ou menor a
10% da largura a meia altura (w0.5 ) do pico mais
estreito do cromatograma

>>

w0.5

R medido

>t

real
w medida > w
real
Deformao no pico
(cauda)
Diminuio do rudo
(damping)

DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho
SENSIBILIDADE
Relao entre o
incremento de rea do pico e o incremento
de massa do analito

RE
A

Fator de
Resposta, S:
inclinao da
reta rea do
pico x Massa
do analito
MASS
A

Sensibilidad
e

o mesmo
incremento de
massa causa um
maior incremento
de rea

Na ausncia de erros
determinados:
A = rea do pico
cromatogrfico
m = massa do
analito

DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho
FAIXA LINEAR
DINMICA Intervalo de
massas dentro do qual a resposta do
detector linear

REA

A partir de
certo ponto
o sinal no
aumenta
mais
linearmente

MASS
A
O fim da zona de linearidade pode ser
detectado quando a razo (rea / Massa)
diverge em mais de 5 % da inclinao da
reta na regio linear:

REA /
MASSA

1,05
S

0,95
S
MASS

DETECTORES
Classificao

UNIVERSAIS:
Geram sinal para qualquer
substncia eluida.

SELETIVOS:
Detectam apenas substncias
com determinada propriedade
fsico-qumica.

ESPECFICOS:

Detectam substncias que


possuam determinado elemento
ou grupo funcional em suas
estruturas

DETECTORES
Detector por Condutividade
Trmica
PRINCPIO Variao
na condutividade
trmica do gs quando da eluio de um
analito.
A taxa de transferncia de calor entre
um corpo quente e um corpo frio
depende da condutividade trmica do
gs no espao que separa os corpos

Se a condutividade trmica do gs
diminui, a quantidade de calor
transferido tambm diminui - o corpo
quente se aquece.

Cela de Deteco do
DCT:
1 Bloco metlico (ao)
2 Entrada de gs de
arraste

3 Sada de gs de arraste
4 Filamento metlico (liga

4
2

W-Re) aquecido

5 Alimentao de corrente
eltrica para aquecimento
do filamento

DETECTORES
Detector por Condutividade
Configurao tradicional
Trmica do DCT: bloco

metlico com quatro celas interligadas em


par - por duas passa o efluente da coluna e
por duas, gs de arraste puro:
CELAS
DA

CELAS DA
AMOSTRA

CORTE
LATERAL

CORTE
SUPERIOR

AMOSTR
A

CELAS DE
REFERNCI
A

CELAS DE
REFERNCI
A

Quando da eluio de um composto com


condutividade trmica menor que a do gs de
arraste puro:
Filamentos
nas celas de
amostra se
aquecem

Filamentos
nas celas de
referncia no
se aquecem

Resistncia
eltrica dos
filamentos nas
celas de amostra
aumenta
Resistncia
eltrica dos
filamentos nas
celas de
referncia fica
constante

Diferena
de
resistncia
eltrica
entre os
filamentos
de amostra
e
referncia

DETECTORES
Detector por Condutividade
Os filamentos do DCT
so montados numa ponte
Trmica
de Wheatstone que transforma a diferena de
resistncia quando da eluio de amostra numa
diferena de voltagem:

Fonte de CC / Bateria (18 V a 36 V,


tpico)
F Ajuste da corrente nos
filamentos
I Medida da corrente nos filamentos (100 mA - 200
mA, tpico)
B1 B2 Balanceamento / ajuste de
zero
R1 R2 Filamentos das celas de
referncia
A1 A2 Filamentos das celas de
amostra

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCT sinal para qualquer
SELETIVIDADE Observa-se
subs-tncia eluida diferente do gs de arraste =

UNIVERSAL
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE Dependendo
da configurao particular e do analito: QMD
= 0,4 ng a 1 ng com linearidade de 104 (ng dezenas de g)
VAZO DE GS DE ARRASTE O sinal
proporcional concentrao do analito no
gs de arraste que passa pela cela de
amostra.

Fc =
0
VAZO DE GS DE
ARRASTE CONSTANTE
DURANTE A ELUIO

VARIAO DA VAZO DE
GS DE ARRASTE DURANTE
A ELUIO

Com DCT, a rea dos picos cromatogrficos


MUITO dependente da vazo do gs de

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
NATUREZA DO GS DE
ARRASTE Quanto maior
DCT
a diferena

entre a condutividade trmica do

gs de arraste puro, A, e do analito,


resposta.

X, maior a

Como
(M = massa
:
molecular)
QUANTO MENOR A MASSA MOLECULAR DO
GS DE ARRASTE, MAIOR A RESPOSTA

Gs de arraste com DCT:


ou H2
He ou
H2

1
1
2

He
outr
o
gs

Usando He ou H2 como gs de
arraste, maximizado: MAIOR
RESPOSTA
Com outros gases,
eventualmente
X > A: PICOS NEGATIVOS

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCT
FATORES DE RESPOSTA Quanto menor a

condutividade trmica do analito, maior o sinal.

Os fatores de resposta
dependem da condutividade
trmica do analito
Quantidades iguais de substncias
diferentes geram picos cromatogrficos com
reas diferentes !!!

CHCl
Mistura de
quantidades
equimolares de:
Etano = 17,5
Clorofrmio =
6,0
Etanol =
12,7

C2 H
6

C2 H 5 O
H

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCT

TEMPERATURAS DE OPERAO Quanto maior a


diferena entre a temperatura dos filamentos e do
bloco metlico maior a resposta.
Temperatura do filamento, TF: entre 300oC e
350oC. funo da corrente de alimentao
dos filamentos, i.

Sina
l

TF

Limitaes:

- Correntes excessivas podem fundir o


filamento ( tpicos do filamento = 20
m)
- Diminuio do tempo de vida til dos
filamentos (oxidao por traos de O2 no
gs de arraste)

Temperatura do bloco, TB: mantida to baixa


quanto possvel

TB
Limitao:

Sina
l

- Temperaturas excessivamente baixas


podem provocar a condensao de
analitos nas celas (erros analticos, danos
aos filamentos)

DETECTORES
DCT: Aplicaes
1 Separao e quantificao de compostos que
no geram sinal em outros detectores (gases
nobres, gases fixos)

Separao de Gases Fixos e


Hidrocarbonetos:

Coluna: CP Sil 5CB


(50 m x 0.32 mm x 5
m)
Gs de Arraste: He @ 3
ml.min-1
TCOL: 40C Detector:
1 N2

DCT

2 CH4

3 CO2

4 n-C2

5 NH3

6 n-C3

7 i-C4

8 n-C4

2 Por ser um detector no-destrutivo, pode ser


usado em CG preparativa ou deteco sequencial
com dois detectores em tandem

DETECTORES
Detector por Ionizao em
Chama
PRINCPIO Formao
de ons quando um
composto queimado em uma chama de
hidrognio e oxignio

O efluente da coluna
misturado com H2 e O2 e
queimado. Como numa
chama de H2 + O2 no
existem ons, ela no
conduz corrente eltrica.

Quando um composto
orgnico elui, ele
tambm queimado.
Como na sua queima so
formados ons, a chama
passa a conduzir
corrente eltrica

DETECTORES
Detector por Ionizao em
Chama

COLETOR

AR
FLAME
TIP

H2
BLOCO

COLUNA
O ar e o H2 difundem para o
interior do coletor, onde se
misturam ao efluente da
coluna e queimam:

Uma diferena de potencial


eltrico aplicada entre o
flame tip e o coletor quando se formam ons na
chama, flue uma corrente
eltrica:

DETECTORES
Detector por Ionizao em
Qumica
da Chama de
Chama
Hidrognio:

Incandescnc
ia

Estrutura da
chama
trs regies
bsicas

Reao
Quebra

Regio de quebra
Mistura dos gases, praquecimento, incio da quebra das molculas de
H2, O2 de
e dos
analitos. Reaes exotrmicas com
Zona
reao
produo e/ou consumo de radicais H, O, OH, HO2
(provenientes do H2), CH e C2 (proveniente do
analito)
CHO+ (analito).
Zona
dee ons
incandescncia
Emisso de luz por
decaimento de espcies excitadas: OH (luz UV), C H
e C2 (visvel).

Queima de
substncias com
ligaes C-H
Queima de H2

CH + O CHO+ +
e-1 on formado a cada ~10
5

tomos de C queimados

Formam-se apenas
radicais !!!

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DICpara substncias que
SELETIVIDADE Seletivo
contm ligaes C-H em sua estrutura
qumica.
(como virtualmente todas as substncias analizveis por
CG so orgnicas, na prtica o DIC UNIVERSAL)

Compostos que NO produzem resposta


no DIC:
Gases
nobres
H 2 , O2 ,
N2
CO, CO2, CS2

NH3, NxOy

CCl4,
peralogenados

HCOOH, HCHO *

DI
C

SiX4 (X =
halognio)
H2 O

CH
4

CO
2

O2

DC
T

N2

SENSIBILIDADE / LINEARIDADE QMD tpicas =


10 pg a 100 pg com linearidade entre 107 e
108 (pg a mg)

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DICdo gs de arraste, as
VAZES DE GASES Alm
vazes de alimentao de ar (comburente) e
hidrognio (combustvel) devem ser
otimizadas.

SINAL

Grficos Sinal x Vazo de Gases


tpicos:

H2

AR

150

300

450

600

15

30

45

60

O sinal se mantm aproximadamente


constante em uma larga faixa de vazes
de ar e H2
VARIAES NAS VAZES DE AR E H2
AFETAM APENAS MARGINALMENTE O SINAL
= MAIORES REPRODUTIBILIDADE E
REPETIBILIDADE

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
TEMPERATURA DE DIC
OPERAO O efeito da
temperatura sobre o sinal do DIC
negligencivel.
TRATAMENTO DE SINAL Por causa da baixa
magnitude da corrente eltrica gerada (pA a
nA) ela deve ser amplificada para poder ser
registrada.
2

Diagrama
eletrnico
simplificado
de um DIC

1
4

Flame tip / Chama /


Coletor
Bateria ou Fonte de CC Voltagens de

operao normais de 200 V a 300 V (no


varivel - valor depende da geometria
especfica do detector).
3 Amplificador Eletromtrico Deve
amplificar o sinal e converter uma corrente
varivel em uma voltagem varivel (pA
mV).

Sada de Registro de

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DICO fator de resposta de
FATORES DE RESPOSTA
um determinado composto aproximadamente
proporcional ao nmero tomos de carbono.
Presena de heteroelementos diminui o fator de
resposta.

Nmero Efetivo de Carbonos (NEC) Prev com


~20% de aproximao o fator de resposta de um
composto.

(X = Contribuio de
cada tomo ao NEC)

Mistura com
quantidades
equimolares de:
C2H6 NEC = 2,00
C2H5OH NEC =
1,40
CH3CHO NEC =
1,00

tomo
C aliftico
C aromtico
C olefinco
C carbonila
O lcool prim.
Cl aliftico

X
+1,00
+1,00
+0,95
+0,00
-0,60
-0,12

DETECTORES
Detector de Nitrognio - Fsforo
Modificao do DIC altamente seletiva para
compostos orgnicos nitrogenados e
fosforados
Prola de sal de metal
alcalino:
RbCl (normal),
KCl

Seletividade S para fosforados


ou nitrogenados: 10.000 x 100.000 x em relao a
hidrocarbonetos similares
QMD = 0,4 pg a 10 pg (N) e 0,1 a
1 pg (P)

Pesticidas Triaznicos usando


DNP:
1
Desetilatrazina
2
Desisopropilatrazina
3
Atraton
4
Atrazina
5
Trietazina
6
Secbumeton
7
Sebutilazina
8
Simetrin
9
Dipropretrina
10
Dimetametrina
11
Metroprotrina

(100 pg
cada)

DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
PRINCPIO Supresso de um fluxo de
eletrons lentos (termais) causada pela sua
absoro por espcies
eletroflicas
Um fluxo
contnuo de
eletrons lentos
estabelecido entre
um ando (fonte
radioativa
-emissora) e um
catodo.

Na passagem de uma
substncia
eletroflica alguns
eletrons so
absorvidos,
resultando uma
supresso de

DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
1

3
4

1 Ando (fonte radioativa emissora)


2 Sada de
gases

4
Cavidade

3
Catodo
5 Coluna
cromatogrfica

DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
Mecanismo de Captura de
Eletrons

Gerao de eletrons lentos pela interao


entre a radiao molculas do gs de arraste G e
molcu - + G G + + e - + e*
las de bloqueador
(quencher) Q
energia
- + G G* + Q G + e - + Q
energia

Eletrons lentos so capturados pela


espcie eletroflica AB AB + e - AB - +
energia

O decrscimo na corrente eltrica fluindo pela


cela de deteco proporcional
concentrao a da espcie absorvente no gs
de arraste

Ib corrente de
repouso
Ie corrente na eluio do
analito
K constante de
captura

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE
FONTE RADIOATIVA
O ando deve estar

dopado com um istopo radioativo - ou


- emissor
Emprego universal em DCE
3comerciais:
63
H ( -, 0,02
Ni ( -, 0,06
MeV)
MeV)

Sob a forma de
Ta3H3
Maior
sensibilidade
Tdet deve ser <

Usado como
63
Ni 0
Maior
linearidade
til at
~400oC

225oC

- Maior durabilidade (t1/2 = 100 a


x 12 a
para 3H)
- Maior estabilidade
trmica
- Menor risco de uso
(radioatividade)

63

Ni preferido
em
equipamentos
modernos

Raramen
te
usados:

85

Kr, 90Sr,
226
Ra

99

Tc,

147

Pm,

241

Am,

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE

POLARIZAO DOS ELETRODOS Vrios modos


de polarizao possveis
VOLTAGEM CONSTANTE Pouco usada
modernamente - picos cromatogrficos podem
ser deformados.
VOLTAGEM PULSADA Menos anomalieas
eltricas: maior sensibilidade e linearidade.

TEMPERATURA DO DETECTOR Dependncia


do sinal com temperatura de operao
bastante significativa
Variao de 3oC na
temperatura
Erro de ~ 10% na rea dos
picos
Magnitude e sinal do erro depende do composto
analisado !

TEMPERATURA DO DCE DEVE


SER RIGIDAMENTE
CONTROLADA

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE
GS DE ARRASTE Funcionamento
do DCE
muito dependente da natureza do gs de
arraste
MAIS
USADOS:

N2
Ar + 5%
CH4

Geram eletrons
lentos quando
bom-bardeados
com -

O gs deve ser o mais puro


(traos de H2O e O2 comprometem o sinal
possvel !!!
do DCE)

Adsoro de
contaminantes
sobre os eletrodos
causa deformao
nos picos

VAZO DE GS DE ARRASTE Sinal depende


dire-tamente da vazo de gs fluindo no
detector

Sina
l

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE
QMD = 0,01
pg a 1 pg (organoclorados), linearidade ~ 10 4
(pg a ng)

10 fg Lindano
(C6H6)
-ECD HP-6890
PESTICIDA
S
1 tetracloro-m~250 fg cada
xileno
analito
2 - BHC
3 Lindano
4 Heptachlor
5 Endosulfan
6 Dieldrin
7 Endrin
8 DDD
9 DDT
10 Metoxychlor
10
decaclorobifenila
O DCE O DETECTOR PREFERENCIAL
PARA
ANLISES DE TRAOS DE
ORGANOALOGENADOS E SIMILARES

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE DE RESPOSTA
SELETIVIDADE / FATORES
Valores de S maximizados para compostos
eletroflicos
S tpicos (clorobenzeno: S =
1)
hidrocarbonetos e esteres alifticos, dienos
lcoois, cetonas e aldedos alifticos, aminas,
nitrilas, mono - Cl, mono - F
enis, oxalatos, mono - Br, di - Cl, hexa - F
tri - Cl, cloretos de cidos, alquil - Pb,
anidridos
mono - I, di - Br, tri - Cl, mono - nitro, CS2
di - I, tri - Br, poli - Cl, di - nitro, 1,2 dicetonas, fumaratos, organo - Hg

Comparando-se
organoalogenad
os:

I > Br > Cl >


F
>>
Terc > Sec >
Prim
trans > cis
Tri > Di > Mono

DETECTORES
DCE: Aplicaes
Contaminantes em ar atmosfrico - deteco
paralela DIC + DCE

DI
C

DC
E

1, 2, 3 - Hidrocarbonetos
4, 5, 6 -aromticos
Hidrocarbonetos

ANLISE QUALITATIVA
Conceitos Gerais

Aplicae
s
Qualitativ
as de CG

Identificao individual das


espcies contidas na
amostra
Determinao da
identidade da amostra
propriamente dita

Fontes de Informaes
Qualitativas
RETENO Uso de dados de reteno de um
analito para sua identificao

DETECO

Detectores que fornecem


informaes estruturais sobre as substncias
eludas

Para anlise qualitativa confivel


por CG recomendvel combinao
de dados provenientes de pelo
menos duas fontes

ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
tR =
f

Interaes analito /
FE
Presso
de vapor do
analitooperacionais (TCOL,
Condies

FC ...)
Fixas as condies operacionais, o tempo
de reteno ajustado de um analito
uma constante
AMOSTR
A

PADRO

Comparao
de
cromatogra
mas da
amostra e de
uma soluo
padro do
analito
suspeito

ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Identificao por tR muito pouco
confivel:
Dependncia com FC e TCOL Variaes
nestas condies afetam sensivelmente
os tR
T
=
COL

VARIAO
DE 1% NO

0,1%

tR

FC = 1%

MASSA

Sobrecarga na coluna Aumento


excessivo na massa de material eluido
deforma o pico croma-togrfico e altera
o seu tR
Saturao da
coluna
cromatogrfica
com aumento
de massa eluida
provoca cauda
frontal no pico

ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Comparao de tR usando dopagem
(spiking) da amostra com o analito
suspeito: aumento da confiabilidade de
identificao.

Amostra complexa:
incerteza nos tR
medidos pode levar
a identificao
errnea

Comparao com
cromatograma da
amostra dopada
permite
identificao mais
confivel do
desconhecido

ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
FUNDAMENTO Os tR isotrmicos para uma
srie homloga de compostos dependem
logaritmicamente do nmero de tomos de
carbono na cadeia.

Separao isotrmica
de uma mistura de nalcanos (n-C4, n-C5, ...
n-C16)

Um grfico de log(tR)
em funo do nmero
de tomos de carbono
do analito nC LINEAR

ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
O ndice de reteno de Kovts I para um
analito definido por:

tR (A) Tempo de
reteno ajustado do
analito A
tR (N) Tempo de
reteno ajustado do nalcano com N carbonos
tR (n) Tempo de
reteno ajustado do nalcano com n carbonos (n
= N + 1)

Interpolao
logartmica
dos tR
Ex.: um analito com I = 874 teria um
tempo de reteno ajustado equivalente
ao de um n-alcano hipottico com cadeia
de 8,74 tomos de carbono

ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
REPETIBILIDADE - REPRODUTIBILIDADE Os
efeitos de TCOL e FC nos ndices de Kovts
so pequenos
ANALITO
I/T
Dependncia de I
para algumas
CHCl3
+0,02 %
substncias em uma
CH3CH2OH
-0,12 %
coluna apolar na
CH3CHO
-0,05 %
faixa de TCOL = 70oC
CH3(CO)CH3 -0,04 %
a TCOl = 130oC
Identificao por ndices de reteno
muito confivel que comparaes baseadas
em tR

NDICE DE RETENO DE KRATZ Para


programao linear de temperatura a relao
entre tR e nC linear: clculo dos ndices de
reteno modificado

ANLISE QUALITATIVA
Retention Time Locking (RTL)
PRINCPIO Em cromatgrafos com:
controles pneumticos e trmicos
microprocessados, injetores automticos e
colunas cromatogrficas de qualidade
excepcional possvel alta repetibilidade
CORRIDA
#1
TCOL (1)
FC (1)

nos tR

CORRIDA
#2
TCOL (2)
FC (2)

Coluna
Coluna
A
B
O software
RTL (Hewlett-Packard)
automaticamente ajusta as condies
operacionais em um segundo CG para reproduzir
os tR obtidos em um primeiro equipamento
Cromatogramas
obtidos em diferentes
equipamentos e
colunas com
condies
operacionais da
segunda corrida
ajustadas pelo
software de RTL

ANLISE QUALITATIVA
Mtodos de Deteco
Qualitativos
Mtodos de
deteco que fornecem
informaes qualitativas sobre os analitos
eludos:

Cromatografia Gasosa com


Deteo Espectromtrica de
Massas (CG-EM)
Cromatografia Gasosa com
Deteo Espectromtrica por
Emisso Atmica (CG-EA)

Cromatografia Gasosa com


Deteo Espectromtrica por
Absoro no Infra-Vermelho (CGEIV)
Identificao muito confivel quando
combinados a tcnicas de identificao
baseadas em reteno

ANLISE QUALITATIVA
Espectrometria de Massas
PRINCPIO A amostra fragmentada e
ionizada em um padro caracterstico da
espcie qumica.
1 Molculas da amostra so bombardeadas por
eltrons (electron impact = EI) ou
(chemical
ionization
=- CI):
ABCDE
+ e
ABCDE.+ +

ons

2 e-

2 O on formado se fragmenta:
ABCDE.+ AB. +
+
ABCDE.CDE
+ AB+ +
.+ .
ABCDECDE
A+ +
BCDE.

ABUNDNCI
A

Os fragmentos inicos formados so


separados magneticamente de acordo com suas
massas moleculares e contados:

MASSA /
CARGA

O grfico do nmero
de ons formados em
funo da razo
Massa / Carga dos
ons o ESPECTRO
DE MASSAS do
analito

ANLISE QUALITATIVA
Espectrmetro de Massas
1

Cmara de Ionizao

Sada de Vcuo

Separador Magntico

Eletrons gerados por


um filamento aquecido bombardeam a amostra. Os
fragmentos ionizados (carga +1) so repelidos pelo
eletrodo positivo e conduzidos ao separador
magntico.
Todo o interior do EM deve
estar sob alto vcuo (natm).
A ao do campo
magntico deixa apenas ons com determinada razo
Massa / Carga atravessar esta rea do equipamento.

Detector

Uma vlvula fotomultiplicadora ou um


fotodiodo gera um sinal eltrico proporcional ao
nmero de ons que incide sobre o elemento.

ANLISE QUALITATIVA
Espectro de Massas

2
0

4
0

6
0

m/Z

8
0

10
0

12
0

CO

m/Z =
118

m/Z =
80

m/Z =
79

- (CO +
H)

m/Z =
90

ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Interface cromatgrafo espectrmetro:

E
M

C
G

Vcu
o

Separador
Molecular
O gs de arraste
leve (He) difunde
mais rapidamente
que o analito e
tende a ser drenado
para o vcuo.

Cmara
de
Ionizao

Colun
a
Capila
r

Interface Capilar
Direta
Com colunas
capilares a vazo
baixa de gs de
arraste pode ser
drenada pelo
sistema de vcuo.

ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Sistema de Controle e Aquisio de
Dados:
MANDATRIO que
sistemas CG-EM
sejam totalmente
controlados por
microcomputador.

Sistema de Controle e Aquisio de


Dados:

Gerencia e monitora o funcionamento dos


mdulos de
CG e EM.
2 Coleta
e arquiva espectros de massa em
intervalos
regulares de tempo e constroi o
cromatograma.
3 Aps a corrida, compara espectros
coletados com
bases de dados para identificao dos
eluatos.

COMPUTADORES RPIDOS E COM


GRANDE CAPACIDADE DE ESTOCAGEM
DE DADOS

ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: Gerao do
Cromatograma
Espectros de massas completos
coletados e arquivados em intervalos
regulares de tempo
Gerao do cromatograma a partir dos
espectros:
CROMATOGRAMA DE ONS TOTAIS (TIC
= ToPara
cada
espectro o nmero total de ons
tal Ion
Chromatogram)
detectados na faixa de massas varrida
somado e plotado em funo do tempo,
gerando o cromatograma.

MONITORAMENTO DO ON
SELECIONADO (SIM = Single Ion
Seleciona-se um fragmento resultante da
Monitoring)

fragmentao da espcie de interesse. Gera-se


o cromatograma plotando-se o nmero de ond
detectados com a massa desse fragmento em
funo do tempo.

TIC

SIM

Universal

Seletivo

Similar a
DIC

Maior
Sensibilidade

ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: TIC x SIM
Aroma de polpa industrializada de caj
aps extrao por SPME

TIC
Aparecem os picos
correspondentes a
todas substncias
eludas

SIM (m/z =
149)
Cromatograma
construido a partir
dos mesmos dados
acima, mas apenas
usando
fragementos com
massa = 149
(ftalatos:
plastificante)

ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
1 Seleo manual ou automtica do

CONTAGEN
S

espectro de massa correspondente a um


eluato.

CONTAGEN
S

MASSA /
CARGA

TEMP
O

2 Interpretao manual do espectro e / ou

com-parao automtica com biblioteca de


espectros padro do equipamento.

ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
Busca automtica em bibliotecas de
espectros: comparao estatstica
( Probability Based Matching )

ESPECTRO
DESCONHECID
O

PB
M

BIBLIOTECA DE
ESPECTROS

PBM de um
eluato
desconhecido
(1-dodeceno)

#
1

NOME
1-dodeceno

1-dodecanol

ciclododecano

2-dodeceno

5
6

LIMITAES
:

Lista com
possveis
candidatos +
porcentagem de
confiabilidade

FRM. %
C12H24 99
C12H26O 91
C12H24 91
C12H24 66

C11H22 35
8-metil-3-undeceno C12H24 32
1-undeceno

Identificao pouco confivel


de es-pectros muito simples
Limitada pelo tamanho da
base de dados (NIST = 66.000
espectros)
Diferenas entre espectros
gerados por diversos EM

ANLISE QUALITATIVA
Emisso Atmica em Plasmas
PRINCPIO A amostra fragmentada num
plasma, os fragmentos so excitados e
emitem luz ao retornarem aos seus estados
fundamentais.
1

Amostra fragmentada ao colidir com


molculas excitadas do gs de suporte do
plasma.
m
+

ABCD + He

+ B + CD +

He + e2 Fragmentos so excitados eletronicamente.


A+ + B + CD + Hem A+* + B* +
CD* + He
3

Ao
retornarem
aos
seus
estados
fundamentais os fragmentos excitados emitem
luz em comprimentos de onda caractersticos.

A+* A+ +
h 1
B* B + h 2
CD* CD +
h 3

O MONITORAMENTO DA EMISSO NOS


COMPRIMENTOS DE ONDAS CARACTERSTICOS DE
CADA FRAGMENTO GERA CROMATOGRAMAS
ELEMENTO-ESPECFICOS

ANLISE QUALITATIVA
Gerao e Sustentao de
Plasmas
PLASMA Gs ionizado
por aplicao de uma
descarga eltrica e sustido por um campo
eltrico oscilante

Eletrons da descarga
eltrica colidem com o
gs gerando ons

ons formados so
acelerados pelo campo
eltrico aplicado gerando
continuamente mais ons e
espcies excitadas

Gs de Suporte: HLIO (espcies formadas


tem energia suficiente para excitar tomos e
fragmentos de no metais)
Sustentao: MICROONDAS (outros tipos de
campos eltricos oscilantes no mantm
plasmas estveis de He a presso atmosfrica
de forma conveniente)

ANLISE QUALITATIVA
Espectro de Emisso Atmica
Mistura de raias de emisso atmicas e
moleculares de frag-mentos do analito e raias de
emisso do plasma e impurezas

nHexano
Fragmento
s:
C2
OH

CN
NH

200
nm

800
nm

Naled
(C4H7Br2Cl2O4P)
Fsfor
o
Bromo
Cloro

456
nm

566
nm

ANLISE QUALITATIVA
Esquema Tpico de um CG-DEA

1 Cromatgrafo
Gasoso
2 Alimentao de Gs de Suporte do
Plasma (He)
3 Linha de Transferncia (acoplamento
CG - DEA)
4 Cavidade Ressonante (gerao do
plasma)
5 Lente de
Focalizao
6 Monocromador /
Policromador
7 Detector de Luz (fotomultiplicadora /
diode array)
8 Amplificao / Digitalizao
de Sinal
9
Computador

ANLISE QUALITATIVA
DEA: Gerao de Plasma
Uma cavidade ressonante focaliza potncia gerada
por uma fonte de microondas no interior de uma
cela de deteco por onde passa o gs de suporte.

Cavidade Ressonante Beenaker


TM010:
CABO DE
ALIMENTAO
DE
MICROONDAS
CAVIDADE
RESSONANTE

H
e

CELA DE
DETEC
O

PLASM
A

Permite plasmas de He estveis a presso


atmosfrica e potncias de microondas <
100 W
CELA DE DETECO Tubo de material
isolante eltrico e altamente refratrio
(quartzo, alumina, BN)

ANLISE QUALITATIVA
Interface CG - DEA
Plasmas de He se extinguem pela passagem de
grandes quantidades de material (~ 1 L de
lquido vaporizado)

Interface para colunas


empacotadas:
Antes de ser
misturado ao
He, o efluente
da coluna
passa por uma
vlvula
diversora

H
e

PURGA

COLUN
A

CELA

VLVULA
DIVERSOR
A

Quando da
eluio de
grandes
quantidades de
analito o fluxo
da coluna
desviado para
a purga

Colunas capilares: no h necessidade de


diverso.