UNIVERSIDAD

NACIONAL MAYOR DE
SAN MARCOS
FACULTAD DE QUMICA E
INGENIERA QUMICA

BIOTECNOLOGA
Mg. JUAN CARLOS WOOLCOTT
HURTADO

Qu son los microorganismos?

Son seres como nosotros?
Cmo realizan los cambios
en la materia?
Qu condiciones requieren
para realizar tales cambios?

QU ES LA VIDA?

Es ms fcil reconocer la vida que definirla.

Por ejemplo: El hombre es un ser vivo, la
piedra no lo es.
Los seres vivos son: animales, plantas y los
microorganismos
(bacterias,
hongos,
levaduras, algas y protozoarios).
Los virus en el sentido estricto no son seres
vivos
sino
grandes
partculas
de
nucleoprotena que penetran en las clulas
huspedes, sean bacterias,
animales o
vegetales, donde se multiplican formando
nuevas partculas virales a base de los
componentes del husped.

QU ES LO QUE
CARACTERIZA A LA VIDA?
1.
2.

3.
4.
5.
6.
7.

Tomar materia prima de su entorno

Extraer energa til de esta materia
prima y almacenarla cono ATP
proceso denominado catabolismo.
Sintetizar sus propias molculas por
el proceso de anabolismo.
Crecer en forma ordenada
Reaccionar a los estmulos
Reproducirse
Adaptacin (evolucin)

IMPORTANCIA Y SIGNIFICADO DE
LOS M.O. EN LA BIOTECNOLOGA

Desde los tiempos remotos el hombre utiliz los

M.O. para preparar bebidas, alimentos y vestidos
Los M.O. son los responsables de los cambios de
la materia orgnica e inorgnica (fermentaciones,
ciclo biogeoqumico) y de enfermedades para el
hombre, animales y plantas.
Comprenden: Bacterias, hongos y levaduras
Biotecnologa clsica
Vino, vinagre, cerveza, sake, hongos para
produccin de alimentos
Biotecnologa moderna: Nanotecnologa,
Ingeniera gentica

 Prisma
de
Senaquerib,
20,000
caracteres, 50kg, 2,500 aos
ADN 10 millones de caracteres, 10-10
g, cambios menores a travs de
millones de aos.

ESTADO ESTACIONARIO DINMICO

SECUENCIA LINEAL DEL ADN

REPLICACIN DEL ADN

SECUENCIA LINEAL DEL ADN

CONDICIONES QUE DEBEN REUNIR

LOS M. O CON FINES
INDUSTRIALES

1 La cepa debe ser genticamente estable no es deseable

un cultivo que constantemente y espontneamente
produzca una o ms formas diferentes.
2. La cepa fcilmente debe producir muchas clulas
vegetativas, esporas u otras unidades reproductivas.
3. La cepa debe crecer vigoroza y rpidamente despus
de la inoculacin en los tanques de sembrado u otros
contenedores usados para preparar grandes cantidades
de inculo antes e una fermentacin industrial.
4. La cepa debe ser un cultivo puro, no solamente libre
de otros microorganismos, sino tambin de fagos.
5. La cepa deber producir el producto requerido dentro
de un perodo corto de tiempo, preferiblemente en 3
menos das.

CONDICIONES QUE DEBEN REUNIR

LOS M. O CON FINES
INDUSTRIALES

6. La cepa deber producir el producto deseado con

la exclusin de cualquier sustancia txica. El

producto deseado deber ser fcilmente separado
de las otras sustancias.
7. La cepa deber ser capaz de autoprotegerse frente
a
la
contaminacin,
si
es
posible
una
autoproteccin puede ser bajar el pH, crecer a alta
temperatura, o elaborando un inhibidor.
8. La cepa deber ser fcilmente mantenida por
perodos razonablemente largos de tiempo
9. La cepa deber ser accesible a cambiar o mutar
por mutgenos o grupo de agentes mutagnicos.
Un programa de mutacin puede ser conducido
con el objetivo de desarrollar cepas que aumenten
la productividad.
10. La cepa deber dar una cantidad predecible del
producto deseado en un tiempo de fermentacin
dado.

CEPAS UTILIZADAS PARA SELECCIN

El xito de la seleccin depende de la clase de M.O. y el

mtodo para determinar la actividad.
Se aslan cepas de ambientes extremos o poco
corrientes.
ENRIQUECIMIENTO DE M.O. POR SELECCIN APROPIADA DE
CONDICIONES DE CULTIVO

METODO DE
ENRIQUECIMIENTO

TIPO DE AISLADO

Valores extremos de pH (2-4) Aciddfilos

Bajas temperaturas (4-15C)

Psicrfilos

Altas temperaturas (42100C)

Termfilos

Altas concentraciones de
NaCl

Halfilos

Atmsfera de N2

Anaerobios

Quitina como sustrato

Lysobacter

SISTEMAS PARA SELECCIN DE

METABOLITOS
PRODUCTO BUSCADO

SISTEMA DE PRUEBA

Antibiticos

Placas con cepas del M.O. de ensayo.

Zonas de inhibicin como indicador de
actividad

Antibiticos
resistentes a lactamasas

Placas de agar con M.O. de ensayo a

las cuales se aade -lactamasas

Proteasas

Placas
de
agar
con
casena,
produccin de halos claros sobre las
placas turbias

Amilasas

Placas de agar almidn, seleccin de

colonias despus de teir con yoduro

Lipasas

Placas
con
emulsin
de
seleccin de colonias al pp los
grasos con Ca2+.

Fosfatasas

Placas de agar con fenoltalenadifosfato e indicador de pH, seleccin

aceite,
cidos

SISTEMAS DE ENSAYO

El
xito
del
procedimiento
de
seleccin depende del desarrollo de
pruebas <<inteligentes>> con lo
cual
pueden
ser
eliminados
antibiticos
conocidos
o
no
deseados.

Primera fase: se buscan metabolitos

que inhiban Bacillus subtilis pero
que no inhiban a Acholeplasma
laidlawii.

SISTEMAS DE ENSAYO
Segunda fase:
Se seleccionaron
sustancias que inhiban la sntesis de
cido diaminopimlico, componente
de la pared celular: pero que no
inhiban la incorporacin de leucina,
un indicador de sntesis de protenas.
Tercera
fase:
Fueron
eliminados
mediante membranas las sustancias
cuyo PM fuera mayor a 1,000 debido a
que
molculas
grandes
son
indeseables
cuando
se
utilizan
teraputicamente.
Con estos pasos se hizo el estudio de

DESARROLLO DE CEPAS

Los procesos comerciales de fermentacin se

lleva a cabo cepas que han sido adaptadas,
es decir modificadas genticamente.
Porque el mejoramiento gentico trae:
Econmico: aumento de produccin
Rentabilidad: Sistemas de fermentacin ms
cortos.
Mejora
de
Sntesis:
Simplificacin
de
procesos.
Biosntesis de nuevos metabolitos
Dificultades:
Los M.O ms estudiados no son los ms
utilizados en la industria.

ENFOQUES GENTICOS
MUTACIN
Espontneas o inducidas: tasa de 10 10- 10-5; 10-5 - 10-3.
Los mutantes pueden tener cambios:
Cambios en el genoma: nmero de
cromosomas
Cambios en el cromosoma
Cambios puntuales o en genes

CAMBIOS DEL ADN - EVOLUCIN

MECANISMOS DE
REPARACIN

Sistemas de reparacin:

a.
b.

Fotorreactivacin: UV- 254 nm

Escisin reparacin:
1. Lesiones inducidas por UV
2. Reparacin de ADN alquilado y
deaminado
Reparacin
post-replicativa
de
la
recombinacin
Reparacin SOS
Reparacin adapttiva.

c.
d.
e.

MECANISMOS DE LOS
MUTGENOS

Los mutgenos inducen ms de una lesin.

A. Mutacin mediante radiacin:
1. UV de onda corta
2. UV de onda larga
3. Radiaciones ionizantes
B. Mutaciones por agentes qumicos:
1. Afectan al ADN que no se replica:
Hidroxilamina
2. Anlogos de bases: 5-bromouracilo
3. Corrimiento de lectura: Acridina
C. Adicionales de mutagnesis:
-Genes mutadores, bacterifago Mu,
Transposones, Elementos-IS.

MUTAGNESIS

Tcnicas que conducen a mutacin

de genes especficos.
1. Delecciones
2. Inserciones: Adaptador-conector y
transposones
3 Mutacin puntual: Con Bisulfito,
anlogos de nucletidos.
4. Con oligonucletidos

EXPRESIN FENOTPICA

El fenotipo resultante de la
mutacin debe ser expresado
despus de una etapa de
crecimiento
Pueden observarse retrasos en
la expresin

OPTIMIZACIN DE LA
MUTAGNESIS
Factores especficos de las cepas
Accin:
Temperatura
pH
Composicin del tampn
Concentracin del mutgeno
Fase de crecimiento del
organismo.

SELECCIN DE MUTANTES
1. Bsqueda al azar:
Habilidad de producir el producto de
seleccin,
2. Aislamiento selectivo.
a. Mutantes resistentes
b. Auxotrofos Reduccin de vas
metablicas
c. Otros procedimientos: presencia o
ausencia de actividad enzimtica

RECOMBINACIN
La informacin gentica de dos
organismos puede ser agrupada en
uno slo.
Recombinacin sexual y asexual en
hongos.
Recombinacin en bacterias:
1. Transformacin
2. Transduccin
3. Conjugacin
Recombinacin de actinomicetos.

RECOMBINACIN
Fusin de protoplastos:
1- Intraespecfica: Cepas que carecen
de sistema sexual o parasexual, o
recombinacin baja. Lactobacillus,
Streptococcus,
Bacillus,
Corynebacterium,
Brevibacterium,
Aspergillus, Penicillium, Mucor etc.
2. Interespecfica: Nuevos organismo.
ADN recombinante.
Nuevas tcnicas de recombinacin

REGULACIN

El metabolismo esta regulado.

1. Actividad enzimtica:
a. Retroinhibicin
b. Carga energtica
c. Degradacin de las enzimas
d. Modificacin de las enzimas.
2. Sntesis de protenas
3. Exceso de produccin de metabolitos
primarios

REGULACIN
4. Regulacin y superproduccin de
metabolitos secundarios.
Metabolitos secundarios regulados
por: genes estructurales, regulatorios
de M. primarios y secundarios, de
resistencia, de permeabilidad.
a. Induccin
b. Regulacin por producto final
c. Regulacin catablica: C y N
d. Regulacin por fosfato
e. Autorregulacin.

TECNOLOGA DE GENES
Manipulacin de genes
Incluye:
1. Recombinacin in vitro

2. Clonacin gnica
3. Ingeniera gentica

PRINCIPIOS DE LA LGICA
MOLECULAR
Todos los seres
vivos poseen
las
mismas
clases
de
subunidades
monomricas
Existen
patrones
comunes
en
la
estructura de las macromolculas.
La identidad de cada organismo queda
preservado por la posesin
de un
conjunto distintivo de cidos nucleicos
y protenas.

GRACIAS