MTODOS DE

DETECCIN DE HPV.

Integrantes: Bianca Jimnez Natalia Arellano

Valentina Matthews Daro Carrasco Mario
Montesinos Marcelo Muoz.

Introduccin.

Las infecciones por Virus del Papiloma

Humano (HPV) representan una de las
infecciones de transmisin sexual ms
comunes en la mayor parte de los pases.
Uno de los mayores intereses de la
investigacin en HPV reside en la asociacin
etiolgica, recientemente caracterizada, de
algunas de estas infecciones con el
carcinoma de crvix y con otros tumores del
tracto anogenital masculino y femenino.

Una fraccin considerable de las infecciones

por HPV es subclnica; el varn puede ser
portador y vehculo de la infeccin y
socialmente pueden identificarse grupos de
alta prevalencia en la poblacin de prostitucin
y en los grupos infectados por el VIH. La
diseminacin es por contactos sexuales y los
rganos ms susceptibles de infeccin con
potencial de iniciar una transformacin
neoplsica son el cuello uterino (zona de
transicin) y la lnea pectnea del canal anal.

Virus de papiloma humano.

Virus de DNA doble
hebra circular de
8000 pb.
Presenta
una
capside
isosadriica
formada por 72
capsmeros.

Para que la replicacion del virus sea completa y

eficaz
( para la sintesis de proteinas capsulares y el
ensamblaje del virion) se requiere de celulas
epiteliales escamosas bien dierenciadas ( epitelio
pluriestratificado maduro).

Los genes que codifican a proteinas se ubican solo

a nivel de una de las dos cadenas, de manera que
solo una presenta transcripcin.

Regiones del Genoma Viral del

HPV
Se encuentran 3 tipos de regiones:
a) Region early o temprana: presenta varios
genes E y estos codifican a proteinas
involucradas en la replicacin del DNA viral,
regulacin de la transcripcin y transformacin
celular.
b) Region Late (genes L): codifican proteinas de la
capside viral.
c) LCR (region de largo control): posee elementos
de regulacin transcripcionales, replicativos ,
se localizan a nivel de los promtores.

Esquema del Genoma del

HPV

Genes tempranos. E1-E2-E4-E5-E6E7.

Genes tardos. L1-L2

Oncognesis Cervical por HPV

El Virus generalmente infecta a nivel de las clulas basales

del epitelio, las cuales al diferenciarse presentaran
expresion de todos los genes virales produciendo: sintesis
del DNA viral, ensamblaje y produccin de viriones en
forma completa (episomal), en el caso de LIE de bajo
grado.
En LIE de alto grado se relaciona directamente con la
infeccion de HPV de alto riego, provocando una perdida de
la proliferacin celular de los genes transformantes E6/E7
y provocando su expresin. De manera que el DNA viral se
encuentra inserto en el husped, lo que finalmente
produce una maduracin escamosa desorganizada,
La expresin de las Oncoproteinas E6 (HPV 16), E7 y otros
factores afectan directamente el control de la proliferacin
celular por parte del p53.

Se conocen al menos 100 tipos de HPV, y

se cree que entre 30 a 50 de ellos estn
asociados con el tracto genital femenino.

ALTO RIESGO

16-18-31-45-46

RIESGO INTERMEDIO

30-31-33-35-39-51-52-5866

RIESGO BAJO

6-11-42-43- 44- 53-54-55

El ms comn de los virus de alto

riesgo es el HPV 16, se encuentra app
en el 50% de las mujeres con cncer
cervical.
El segundo ms comn es el HPV 18,
asociado a adenocarcinoma.
Los viruses ms asociados a verrugas
genitales (condiloma) son HPV 6 y 11.

Tipos de enfermedades causadas

por el HPV

Formas de transicin de
HPV.

La principal va de
transmisin de HPV
es la va sexual.
Los virus de HPV
establecen
infecciones
productivas con el
epitelio estratificado
de la piel y mucosas.

Tipos de infeccin.

No Productiva o latente: El virus

permanece en un bajo nmero de copia,
infectando slo la capa basal. Se puede
detectar slo por mtodos moleculares.
Productiva: Se replica el DNA viral en las
capas basales, se produce la formacin de
coilocitos.
Persistente: En este caso se detecta el
mismo tipo de virus 2 veces en 12 meses,
la paciente se considera de alto riesgo.

Lesiones.

Puede afectar en las mucosas de la boca,

vas respiratorias y genitales, adems del
epitelio de la piel. Tanto en hombres
como en mujeres.
Verrugas cutneas.
Verrugas genitales.
Lesiones en vas respiratorias. Contagia
atreves del parto.
Neoplasias intraepiteliales.
Cncer cervical.

METODOS DE
DETECCION.

Existen vatios mtodos de deteccin del

virus HPV, como por ejemplo:
Dot Blot.
Sauthern Blot.
Hibridacin in situ.
Captura de hbridos.
PCR.
Citologa.
IHQ.

Citologa.

Coilocitos.
Disqueratocitos.
Multinucleacin.
Acantosis
Papilomatosis.
Hiperqueratosis.

Inmunihistoqumica.

Indicadores del estado celular tras

la infeccin por HPV.

Reguladores de ciclo celular:

- p14: inhiben especficamente los
complejos de ciclina D/CDK4 y D/CDK6
que estn implicados en el control de la
fase G1.
- p16: regulador de protena pRb.

ndice de proliferacin celular.

- Ki-67: protena que se expresa en el
ciclo celular.
- PCNA: anticuerpo monoclonal
reconoce un antigeno nuclear, el cual se
expresa en las clulas proliferantes.

Hibridacin in
situ. Evala la
presencia
de
expresin
gnica del virus
en un contexto
histopatolgico
(tejido).
Slo
detecta
infecciones
productivas.

Resultados:
Similar al de IHQ.
Permite localizar la situacin de las
clulas positivas.
Dos tipos de imgenes: mancha
(situacin episomal del virus) y granular
(integracin).

PCR.

Permite la amplificacin
in vitro de regiones de
DNA.
Presenta
tres
pasos:
Denaturacin,
hibridacin y elongacin.
Estos
tres
pasos
conforman un ciclo y se
pueden repetir las veces
necesarias.

Se pueden utilizar indicadores para la

regin viral L1 y L2, los cuales
permiten detectar HPV.
Es
la tcnica ms sensible y
especfica de todas.
Adems permite detectar DNA de
HPV en muestras citolgicas e
histolgicas,
permitindonos
conservar la morfologa.

Captura de Hbridos.

Son mtodos patentados que no son de

dominio pblico.
La prueba de captura hbrida 2 (CH II) es
una de estas pruebas.
Esta prueba (CH II), utiliza sondas de
RNA
especficas
dirigida
hacia
secuencias individuales del DNA viral.
Para detectar esta hibridacin se emplea
un anticuerpo.

Adems de confirmar la presencia del

virus en la muestra, por positividad para
virus de alto riesgo, permite determinar
la carga viral en la muestra.
- Alto riesgo.
- Bajo riesgo.

Clart HPV

Es una prueba de deteccin para HPV

mediante amplificacin genmica.
Detecta hasta 35 genotipos de HPV.
Utiliza una plataforma de miccroarray de
baja densidad para diagnostico in vitro.
Identifica HPV de alto riesgo y de bajo
riesgo, adems puede identificar
coinfeciones.

Tipos
de
muestras:
Citologa
lquida,
muestras incluidas en
parafina.
Se utiliza un producto
amplificado marcado con
biotina, hibridacin con
sonda
especfica,
incubacin
con
STRVPeroxidasa.
La
lectura
de
los
resultados es automtica.

Prevalencia Mundial de HPV

Alcanza un 10.41%

Aprox. 291millones de
mujeres portan el ADN DEL
HPV en algn momento.
23% de esas infecciones se
relacionan con HPV 16.
8.5% se relacionan con el
HPV18.

HPV en Chile
Segn datos entregados por el MinSal:
2008: El HPV es considerado una de las
enfermedades de transmisin sexual
mas habituales.
2006, Estudio publicado en Chile
(Nazzal): prevalencia varia con la edad

Antes de los Entre 30 y

30 aos
50 aos

Despus de
los 50 aos

30%

Menor a 5%

10%

Prevalencia de HPV en
mujeres
La literaturachilenas
basada en estudios

poblaciones en este tema es escasa.

Sin embargo, en Chile la Encuesta
Nacional de Salud 2003 (Minsal, 2003)
consider muestras crvico-vaginales en
mujeres sobre 17 aos. La prevalencia
poblacional del VPH fue del 15,6%.
Prevalencia Prevalencia Prevalencia
poblacional Zonas
Zonas
HPV
urbanas
rurales
15.6%

16.0%

13.0%

Prevalencia por edades

Conclusin.

La infeccin genital por virus papiloma humano (HPV) es una

enfermedad de transmisin sexual con una reconocida
asociacin con lesiones preneoplsicas y neoplsicas del
cuello uterino

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es,

actualmente, el mtodo ms sensible para la deteccin de
HPV

La alta frecuencia de HPV en lesiones de alto y bajo grado

surge como buena explicacin para las altas incidencias de
cncer cervicouterino

Conocer la frecuencia y distribucin de los subtipos virales de

HPV puede contribuir a medir la efectividad de una eventual
vacuna en nuestro pais y ayudar a racionalizar los recursos
del programa nacional de deteccin de cncer cuello uterino.

Fin