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Les modifications du matriel gntique sont l'origine

de mutations.

Les mutations sont des variations de proprits qui


apparaissent soudainement chez certains individus dans
une population.

Ces changements sont rares et hrditaires.

Ces modifications ont pour causes principales:


des erreurs accidentelles, non rpares, au cours de
la rplication de l'ADN, ou

des modifications de l'information gntique sous


l'effet d'agents mutagnes.

Les mcanismes de transposition sont galement une


source de changements qui affectent l'expression du
matriel gntique.

Fidlit de la rplication
La prennit du gnome est assure par la rplication
les mcanismes qui en assurent la fidlit permettent,
quelques erreurs prs ( l'origine de certaines
mutations), la conservation de l'information au fil des
gnrations.
Cependant, des contrles sont tout moment exercs et,
si des modifications de l'ADN ponctuelles ou plus
importantes apparaissent les mcanismes de rparation
sont activs.

Pour que deux cellules hritent par division du mme


patrimoine gntique, pour que la reproduction conforme
soit assure, l'ADN, support de l'information gntique,
doit tre au pralable dupliqu
fidlement.

Cependant des erreurs se produisent au cours de la


rplication qui, paradoxalement se trouve donc tre
une source importante de mutations dites
spontanes et ce, malgr les mcanismes de
correction qui interviennent pour assurer au mieux la
fidlit de la rplication.

une molcule d'ADN peut tre modifie la suite de


changements de bases nucliques dus une
instabilit chimique :
des bases elles-mmes,
ou des liaisons N-glycosidiques entre une base et le
dsoxyribose adjacent.

des lsions diverses dues des agents


environnementaux (chimiques ou physiques)
altrent les molcules d'ADN et finalement
perturbent la fidlit de la rplication.

La cellule possde des systmes de rparation qui permettent de


restaurer l'information gntique et qui peuvent intervenir aprs
la rplication si des erreurs subsistent.

Cependant certains systmes dits de rparation peuvent tre


eux-mmes l'origine de mutations.

Des modifications plus ou moins spontanes des bases nucliques


peuvent se produire : tautomrisation, dsamination, alkylation.
l'ADN est sujet de nombreuses agressions physiques et
chimiques
qui en altrent la structure, provoquent diverses lsions qui, terme,
perturbent la fidlit de la rplication.
Les modifications ainsi produites peuvent tre corriges durant la
rplication ou rpares par la suite.

Une mutation a des rpercussions diverses sur le phnotype selon


sa nature et sa localisation dans le gnome,
Parfois, dans le cas de la substitution d'un nuclotide, du fait de la
dgnrescence du code gntique,
le changement de la squence nuclotidique n'entrane pas de
changement de la squence peptidique : la mutation est dite
muette ou silencieuse.

Origine
Spontanes ou induites (mutagnse)
Bases:
Incorporation dune mauvaise base
Analogue de base
Modification chimique des bases
Glissement pendant la rplication
Mutagne spcifique (Beth par exemple)
Coupure dans le squelette phosphodiester
Radiation ionisante
Blocage de la rplication
Dimres de thymine induits par les UV

Mutations ponctuelles
Les mutations ponctuelles concernent un seul
nuclotide. Il existe diffrents types de mutations
ponctuelles :
- Conservatives.
- Faux sens.
- Non sens.
- Dcalantes.

- conversion dune base en une autre qui ne sapparie


pas correctement avec la base partenaire.
- affecte la squence dADN mais pas sa structure
globale
- transcription et rplication = brins spars
- consquences pour les gnrations futures
2 types principaux:
- transition:

- Purine / purine
- pyrimidine / pyrimidine

- transversion: - purine / pyrimidine


- pyrimidine / purine

AT en GC

Transition

C G en GC

Transversion

Taux de mutation
Probabilit quun mutant apparaisse partir dun gne de type sauvage
Diffrent de la frquence des mutants

3.2

Taux de mutation (exemples)


Organisme

Mutation

Taux

par

E. Coli

His+->His-

2.10-6

division cellulaire

4.10-5

gamte

Polypose intestinale

1-3.10-5

Hmophilie

2-4.10-5

Drosophile
Humain

il blanc
W -> w

3.3

Mutations spontanes, mutations induites


Augmentation des taux de mutation aprs exposition
- des agents physiques (rayonnements X, g, UV),
- des composs chimiques,
qui tous affectent, directement ou indirectement la structure de la
molcule dADN.
Leffet nest pas limit un gne, et na pas de valeur adaptative.

3.4

Recherche des mutants.


Toute analyse gntique dbute par lisolement dun mutant. On
identifie ensuite le gne mut. On peut aussi prendre un gne, le faire
muter, le remettre dans la cellule et comprendre son rle : cest de
la gntique inverse.
A\ dfinitions.
Mutation : cest le changement hrditaire dans la squence
nuclotidique qui ne se traduit pas forcment par un phnotype
observable.
Mutant : un mutant est un organisme ou une cellule qui porte une
mutation (pas forcment observable).
En pratique, on parle de mutant quand celui-ci prsente un phnotype
diffrent de celui du sauvage et on considre que le nombre de
mutants est gale au nombre de mutations.

Frquence de mutants : cest le nombre de cellules mutantes sur le


nombre total de bactries.
Taux de mutation : cest la probabilit quun vnement mutationnel se
produise en un laps de temps donn. Le taux de mutation est obtenu
en mesurant la frquence de mutant par unit de temps choisi.
B\ Diffrents types de mutants et les stratgies disolement (reprage
et isolement).
Une souche auxotrophe est incapable de synthtiser un constituant
cellulaire.
Une souche prototrophe est capable de synthtiser tous ses
constituants cellulaires sur un milieu minimum (eau, sels minraux,
sucre).

Les mutants de sucre : ces mutants sont incapables de dutiliser un


sucre donn comme source dnergie (C et N).
Les mutants de rsistance ( un compos toxique) : cest un mutant
qui

pousse

mme

en

prsence

dun

compos

toxique.

Les mutants de fonctions essentielles ou Mutants conditionnels : en


conditions permissives, la mutation ne sexprime pas et la bactrie
pousse. En conditions non permissives, la mutation sexprime et la
bactrie meure. On trouve dans ce cas, les mutants thermosensibles.
Ce sont des mutations qui changent un acide amin, donc il y a
variation dans la structure tridimensionnelle de la protine.
Isolement
- Mutant de rsistance : slection.
Mutant auxotrophe : reprage.
Mutant de sucre : reprage.
- Mutant conditionnel : reprage.

1\ Slection.
Si la frquence de mutation de rsistance lampicilline est de 10-9, on
fait une structure dau moins 109 cellules ; on centrifuge puis n tale
sur une boite contenant de lampicilline. Sur les 109 cellules, une seule
poussera ? La souche est isole.
2\ Reprage.
Reprage de mutants dauxotrophie, de sucre et conditionnels.
Si la frquence Arg rsistance est gale 10-6, on tale sur une
premire boite de milieu complet : tout pousse. On repique ensuite sur
une seconde boite sans arginine et lon regarde ce qui ne pousse pas
et

par

corrlation

avec

la

boite

1,

on

repre

la

souche.

Pour esprer reprer un mutant, on doit faire un million de boites !!!


Pour diminuer le nombre de boites, on peut augmenter la frquence de
mutation par mutagense.

Mutation spontane Nature des mutations Suppression.


On a deux hypothses quant lapparition des mutations :
- Au hasard : ce sont des mutations spontanes ou directes.
- Pour sadapter : on parle dans ce cas de mutations adaptatives.
A\ Exprience de dmonstration (Lederberg 1952).
On prend des chantillons mutants dtermins par lexprience I sur le
tapis cellulaire et lon recommence autant dexpriences que
dchantillons.
Si lon obtient la mme frquence de mutation quen I, la mutation est
dite adaptative.
Si la frquence augmente chaque exprimentation, on parle alors de
mutations spontanes.
On note que si la frquence augmente jusqu 100% pour de
nombreux cycles, cest que lon est en prsence de mutation
spontane indpendante de lagent slectif (cest un dogme).

Deux faons de slectionner


la slection directe et la slection indirecte

La slection directe

crible positif

seuls les mutants avec le phnotype recherch survient; tous les autres
phnotypes sont limins
La slection indirecte

crible ngatif

les mutants recherchs ne survivent pas dans lune des deux


conditions de croissance. Ils sont reprs par comparaison avec le
tmoin

Crible positif
-la rsistance un des antibiotiques (ex. rifampicine )
sans slection Sans rifampicine mlange RifS+ RifR
croissance en tapis
avec slection + rifampicine

seuls les mutants RifR poussent


leur quantification est maintenant possible

Comment une bactrie devient-elle rsistante la rifampicine (et dautres


antibiotique)?
antibiotique

gne

processus biologique

phnotype

Rifampicine
Acide nalidixique
Streptomycine

rpoB
gyrA
rpsL

Transcription
Rplication
Traduction

RifR
NalR
StrR

Pour devenir rsistant aux certains dautres antibiotiques, la bactrie doit


recevoir un gne spcifique de rsistance

Gnes de rsistance ports par des Transposons et des plasmides

Antibiotique Gne
Processus biologique Phnotype
Ttracycline tetR Traduction
TetR
Chloramphnicol cam Traduction
CmR
Ampicilline ampPeptidoglycane
AmpR

Rsistance au phage
La rsistance au bactriophage lambda est dpendante de ltat du
gne lamB dE. coli
avec le rcepteur membranaire
LamB

sans rcepteur membranaire


LamB

souche sauvage E. coli K-12

souche mutante E. coli K-12

sensible

rsistante

- pas dadsorption = pas dinfection


- croissance des cellules

- la slection des mutants auxotrophes Leu- par les rpliques

Milieu slectif:
absence dun nutriment
prsence dun antibiotique
prsence de virus

Phnotypes:
croissance
morphologie des colonies

Caractristiques de la croissance bactrienne

Prototrophe = capable de crotre sur un milieu minimum

Auxotrophe = capable de crotre sur un milieu supplment par des


substances non requises pour la croissance du sauvage

After incubation, count colonies on


plates that have 25250 colonies
(CFUs)

AAT ADN
UUA ARNm
Leu acide amin

Peut muter en..

CUA GUA AUA UCA UUC UUG UUU UCA UGA UAA
Leu

Val

Ile

Ser

Phe

Leu

Phe

Ser

Stop Stop

Consquences au niveau des acides amins


- Mutation silencieuse ou conservatrice
Cette mutation ne modifie pas lacide amin intgr
dans la chane polypeptidique. En effet, le code
gntique est dgnr.

G en C

Transversion

Cette mutation entrane lincorporation dun autre acide amin, on


obtient un phnotype mutant.
Changement de nuclotide qui change lacide amin
Les consquences sur la protine sont variables

G en C

Transversion

Parfois peu ou pas d'effet.


Parfois diminue ou supprime l'efficacit de la protine.
Rarement confre une nouvelle proprit (enzyme plus efficace
ou possdant de nouvelles proprits catalytiques par exemple).

- Mutation non sens


Changement de nuclotide qui transforme un codon pour un acide amin
par un codon fin de traduction
Consquence: une terminaison prmature de la synthse de la protine

A en T

Transversion

- Mutation dcalante
il sagit ici de la dltion ou de linsertion dun nuclotide qui
dcale le cadre de lecture. Il y a souvent engendrement dune
mutation faux sens et apparition dun peptide incorrect et donc
un phnotype mutant.

Effet dsastreux: tous les acides amins sont changs


sauf si la modification fait intervenir un multiple de
trois nuclotides.
= mutation dcalage du cadre de lecture (frame shift)

Fig. 7.8 Spontaneous generation of addition and deletion mutants by DNA


looping-out errors during replication

NH2 Gln Lys Thr Leu Val Ala Trp Gly Pro Thr Leu Ser Arg COOH
-A

+C

CAA AAA ACU UUA GUU GCU UGG GGU CCU ACU UUA UCU CGU
CAG AAG ACC UUG GUC GCC
GGC CCC ACC UUG UCC CGC
ACA CUU GUA GCA
GGA CCA ACA CUU UCA CGA
ACG CUC GUG GCG
GGG CCG ACG CUC UCG CGG
CUA
CUA AGU AGG
CUG
CUG AGC AGA
5 CAG AAG ACA UUG GUG GCA UGG GGU CCC ACU CUA UCA AGG 3
NH2 Gln Arg His Trp Trp His Gly Val Pro Leu Leu Ser Arg COOH
CAA CGU CAU UGG UGG CAU GGU GUU CCU UUA UUA UCU CGU
CAG CGC CAC
CAC GGC GUC CCC UUG UUG UCC CGC
CGA
GGA GUA CCA CUU CUU UCA CGA
CGG
GGG GUG CCG CUC CUC UCG CGG
AGG
CUA CUA AGU AGG
AGA
CUG CUG AGC AGA

5 CAG AGA CAU UGG UGG CAU GGG GUC CCA CUC CUA UCA AGG 3

Ex. la chane de l'hmoglobine 145 AA)


Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Lys-Ser-Ala-Val-Thr-Ala-Leu-Try-Gly-Lys-ValAsp-Val-Asp-Glu-Val-Gly-Gly-Glu-Ala-Leu-Gly-Arg-Leu-Leu-Val-Val-TyrPro-Try-Thr-Glu-Arg-Ph-Ph-Glu-Ser-Ph-Gly-Asp-Leu-Ser-Thr-Pro-AspAla-Val-Met-Gly-Asp-Pro-Lys-Val-Lys-Ala-His-Gly-Lys-Lys-Val-Leu-GlyAla-Ph-Ser-Asp-Gly-Leu-Ala-His-Leu-Asp-Asp-Leu-Lys-Gly-Thr-Ph-AlaThr-Leu-Ser-Glu-Leu-His-Cys-Asp-Lys-Leu-His-Val-Asp-Pro-Glu-Asp-PhArg-Leu-Leu-Gly-Asp-Val-Leu-Val-Cys-Val-Leu-Ala-His-His-Ph-Gly-LysGlu-Ph-Thr-Pro-Pro-Val-Glu-Ala-Ala-Tyr-Glu-Lys-Val-Val-Ala-Gly-ValAla-Asp-Ala-Leu-Ala-His-Lys-Tyr-His

Anmie falciforme = maladie gntique caractrise par une hmoglobine


anormale.
Anomalie dans la chane de l'hmoglobine : 6e acide amin = VAL alors qu'il
devrait tre GLU

Tautomrisation

La tautomrisation change la complmentarit des bases.


Les bases nuclotidiques, peuvent se trouver sous deux formes
tautomres.
C'est habituellement la forme ctone qui se trouve dans l'ADN, alors
que les formes imino et nol y sont plus rares.
Elles peuvent apparatre la suite d'une tautomrisation spontane.
les formes imino et nol des bases nucliques n'tablissent plus les
mmes associations prfrentielles que la forme ctone.

La forme imino de la cytosine va s'apparier avec l'adnine au lieu de la


guanine,
la thymine sous sa forme nol ne s'apparie plus avec l'adnine mais
avec la guanine,
l'adnine sous sa forme imino tablit un appariement illgitime avec la
cytosine,
la forme nol de la guanine lui permet de s'apparier avec la thymine
plutt que la cytosine.
Ces msappariements, s'ils ne sont pas corrigs, mnent alors des
mutations de transition: une purine est remplace par une purine et une
pyrimidine par une pyrimidine.

Appariement

Cytosine

Imino

Adnine
Thymine
Guanine

Enol

Erron

Normal

Adnine

Guanine

Cytosine

Thymine

Guanine

Adnine

Thymine

Cytosine

tautomres des bases


Tautomresdelathymine
OH

O
CH3

HN
O

kto

N
N

HO

CH3

nol (forme rare)

Tautomresdelaguanine
O
N

HN
H 2N

OH

N
kto

N
H

N
H 2N

N
H

nol (forme rare)

Forme nol
Forme ctone

Forme amino

imino taForme imino

Glissement pendant la rplication

Les dsaminations, les sites AP et leur rparation


transformant une base dans une autre, peut aussi changer les appariements.

Certaines bases peuvent tre dsamines spontanment ou sous l'action de


produits divers dont l'acide nitreux.

Dsamination
Adnine
Cytosine
Guanine

Appariement

Hypoxanthine

A-T

en H-C

Uracile

C-G

en U-A

Xanthine

G-C

en X-C

Dpurination

correspond l'limination d'une base purique (A ou G) qui peut se


produire spontanment des tempratures physiologiques, par rupture
de la liaison N-glycosidique d'une purine.

dans des conditions physiologiques, pH 7 et 37C, chaque cellule


humaine, dont le gnome contient 6,6.1012 paires de
nuclotides, perd environ 10 000 purines par gnration cellulaire, soit
20 h, c'est--dire pratiquement en une journe.

Dpurination de lADN

Des sites apyrimidiques peuvent galement tre crs dans d'autres


conditions.
Les sites apuriniques et apyrimidiques sont quivalents d'un point de
vue biochimique et tous dsigns par l'abrviation "site AP".
La chaleur, les acides et certaines enzymes, ne seraient-ce que
l'uracile-N

glycosylase

et

l'hypoxanthine-N-glycosylase,

entraner une perte de base crant ainsi un site AP.

peuvent

Mutations par modification chimique des bases

Fidlit de la rplication
La prennit du gnome est assure par la rplication
les mcanismes qui en assurent la fidlit permettent, quelques
erreurs prs ( l'origine de certaines mutations), la conservation de
l'information au fil des gnrations.
Cependant, des contrles sont tout moment exercs et, si des
modifications ponctuelles ou plus importantes de l'ADN apparaissent
les mcanismes de rparation sont activs.
Pour que deux cellules hritent par division du mme patrimoine
gntique, pour que la reproduction conforme soit assure, l'ADN,
support de l'information gntique, doit tre au pralable dupliqu
fidlement.

Gnes mutateurs
L'exprience montre que des mutations dans les gnes polA ou dnaQ diminuent
le taux de correction et donc augmentent le taux de mutation.

Chez E. coli, on a identifi plusieurs gnes qui, l'tat mut, sont la cause
d'apparitions trs frquentes de mutations dans l'ensemble du gnome.

Ces gnes portent le nom de gnes mutateurs.

Il existe d'autres gnes mutateurs, En voici quelques exemples:


1 - Les mutants du gne dam, un gne responsable de la mthylation de l'ADN
qui permet au systme de rparation des msappariements de slectionner
correctement le brin matrice.
2 - C'est le cas aussi des gne uvrA, uvrB et uvrC qui interviennent dans une
voie de rparation par excision-resynthse.

3 - Ainsi les gnes mutH, mutL, mutS et mutU dont nous verrons aussi le rle
dans la rparation post-rplicative des
appariements errons.
4 - D'autres mutateurs existent comme mutD, mutY, mutT, la fonction de
certains est identifie mais d'autres ne sont pas encore bien caractriss.