Vous êtes sur la page 1sur 53

Regulacin de la Expresin gentica

en Procaritas

Cmo la clula controla la sntesis de sus


protenas?
A pesar de su simplicidad las bacterias tienen en
comn con organismos superiores la regulacin
de la expresin gentica..Por qu?
son oportunistas nutricionales
Obtienen azcares, aminocidos y nucletidos ya sea del
ambiente o lo sintetizan.
Sntesis involucra un extra costo de energa as que prefiere
tomarlos del ambiente

Con sistemas de regulacin que acoplan la expresin


gentica con sistemas sensoriales para detectar
compuestos relevantes en su ambiente local

Bacterias
Diferentes
fuentes
de
Carbono
(azcares,glucosa, galactosa, xilosa) requieren
diferentes enzimas metablicas
Las enzimas permiten la entrada (protena de
importe) de cada uno de ellos y enzimas que los
catabolizan
Sntesis de todas las enzimas requiere de un
costo energtico alto
Los niveles de protenas son regulados por
mecanismos que operan durante la trascripcin y
traduccin

Eucariotas especializacin de las clulas:


Expresin de slo un grupo de sus protenas

La
clula
debe
reconocer
condiciones
ambientales en las cuales puede activar o
reprimir la trascripcin de genes relevantes
La clula necesita activar o desactivar la
trascripcin de un gen o grupo de genes cuando
las enzimas se requieran o no.
Modelo bsico: Como el metabolismo de la
Lactosa
es
genticamente
regulado:
REGULACION NEGATIVA
Franois Jacob y Jacques Monod en 1965
ganan premio Nobel en su trabajo: cmo el
metabolismo de la lactosa es genticamente
regulado

Genes
estructurales:
segmentos
codificadores de protenas
Concepto de operon: codifica mRNA
multignico, ms el promotor y la regin
reguladora. Transcritos en nico mRNA lo que
permite la regulacin coordinada de la
sntesis de las protenas
Concepto de represor-induccin
Activadores

Figure 11-1. Regulation of the lac operon. The I gene continually makes repressor. The repressor binds to the
O (operator) region, blocking the RNA polymerase bound to P (the promoter region) from transcribing the
adjacent structural genes. When lactose is present, it binds to the repressor and changes its shape so that
the repressor no longer binds to O. The RNA polymerase is then able to transcribe the Z, Y, and A structural
genes,
and
the
three
enzymes
are
produced.

Figure 11-2. The metabolism of lactose. The enzyme b-galactosidase catalyzes a reaction in which water is added to
the b-galactosidase linkage to break lactose into separate molecules of galactose and glucose. The enzyme lactose
permease is required to transport lactose into the cell.

Jacob y Monod explicaron que la sntesis de enzimas


para el metabolismo de un sustrato responde al
proceso de induccin
Cmo una clula sabe que enzimas sintetizar o
cmo un sustrato induce la aparicin de estas:
En el sistema lac, la presencia de lactosa causa
a la clula a sintetizar 1000 veces ms la
betagalactosidasa que en su ausencia
Galactsidos (inductores) inducen la sntesis de un
grupo de enzimas no slo la galactosidasa,
tambin la permeasa y la transacetilasa.
Identificaron
tres
genes
controlados
coordinadamente via produccin de un mRNA nico
IPTG: isopropyl--D thiogalactsido que no es
segmentado por la galactosidasa, permite el
control de la concentracin de la enzima dentro de
la clula

Figure 11-3. Structure of IPTG, the inducer of the lac operon.


The b-d-thiogalactoside linkage is not cleaved by bgalactosidase, allowing manipulation of the intracellular
concentration of this inducer.

El gen lac I
Jacob y Monod lo caracterizaron a travs de un mutante que sintetizaba todas las
enzimas inclusive en ausencia del inductor (I-):
Expresin constitutiva
Por primera vez se aislo una mutacin no con el defecto en la actividad enzimatica sino en
el control de la produccin de la enzima: Mutaciones regulatorias
I es trans actuante: Una copia del gen es suficiente para regular ambas copias del
operador en la clula diploide. Puede regular todos los genes estructurales ya se que
residen en la misma molcula de DNA o en otra diferente (en cis o en trans
respectivamente)

Figure 11-4. The I locus is the region


controlling the inducibility of the lac
enzymes.

Diploides parciales se pueden construir con el factor de fertilidad F

El producto de I es una protena que se puede difundir en la clula y actuar


en ambos operadores

Demostracin del sitio alostrico en otra mutacin de I

La mutacion I- afecta la region de enlace al DNA del


represor, de manera que no enlaza a este (DNA) y
permite la transcripcion inclusive en ausencia del
inductor
La mutacion Is (superrepresor) afecta la region del
represor que enlaza el inductor y reprime la transcripcion
inclusive en presencia del inductor

Figure 11-5. A simplified lac operon model. The three genes


Z, Y, and A are coordinately expressed. The product of the I
gene, the repressor, blocks the expression of the Z, Y, and A
genes by interacting with the operator (O). The inducer can
inactivate the repressor, thereby preventing interaction with
the operator. When this happens, the operon is fully
expressed

Figure 11-6. The recessive nature of I mutations demonstrates that the


repressor is trans acting. Although no active repressor is synthesized from
the I gene, the wild-type (I+) gene provides a functional repressor that binds
to both operators in a diploid cell and blocks lac operon expression (in the
absence of an inducer).

Figure 11-7. The dominance of Is mutations is due to the inactivation of the


allosteric site on the Lac repressor. In an Is/I+ diploid cell, none of the lac
structural genes are transcribed, even in the presence of an inducer. In contrast
with the wild-type repressor, the Is repressor lacks a functional lactose-binding
site (the allosteric site) and thus is not inactivated by an inducer. Thus, even in
the presence of an inducer, the Is repressor binds irreversibly to all operators in
a cell, thereby blocking transcription of the lac operon

La mutacin Oc afecta solo a los genes estructurales en el mismo


cromosoma: cis actuante

Figure 11-8. O+/Oc heterozygotes demonstrate that operators are cis acting. Because a
repressor cannot bind to Oc operators, the lac structural genes linked to an Oc operator are
expressed even in the absence of an inducer. However, the lac genes adjacent to an O+
operator
are
still
subject
to
repression.

La especificidad del represor es su reconocimiento


del operador, descrito por Jacob y Monod
Las mutaciones en el operador son cis actuantes
que significa adyacente.(trans a travs)
La actividad del represor indica que esta es una
secuencia trans actuante. Accin de un producto
difusible (a travs). Cis reconocimiento de una
secuencia
Ambas mutaciones (I- y Oc) son constitutivas
El segmento OZYA constituye una unidad gentica
de expresion coordinada bajo un Control Negativo
del represor

Represor constituidos por 4 monmeros idnticos con 4 sitios para


enlazar IPTG. MW 38000
DNasa permiti identificar la secuencia del operador: 17- 25 bp antes del
gen Z (El represor protege bases especficas en el operador)
Reconocimiento especfico represor-operador, que puede ser afectada
por una simple substitucin de una base
Walter Gilbert y Benno Muller Hill, 1966.

Mutaciones polares:
Algunas mutaciones en Z o Y demostraron
ser polares es decir afectan los genes
corriente abajo (downstream) en el operon
Ej. Mutacin Z resulta no slo en una funcin nula
de este gen sino tambin de Y y A
Ej. Mutacin en Y es polar sobre A pero no en Z
Resultan de codones de terminacin que causan
que los ribosomas se separen del transcrito

Represin catbolica del operon lac:


control positivo
Para maximizar la eficiencia de energa, dos condiciones
ambientales tienen que ser satisfechas para que las
enzimas del operon lac sean expresadas
Lactosa debe estar presente en el ambiente
Glucosa no puede estar presente. La clula captura
ms energa de la degradacin de la glucosa que de
otras azcares, es ms eficiente para la clula
degradarla que a lactosa
La represin de la transcripcin del operon lac en
presencia de glucosa es un ejemplo de represin
catablica . Un producto (catabolito) del catabolismo de
la lactosa (glucosa) previene la induccin del operon lac
por la lactosa

Figure 11-11. Catabolite control of the lac operon.


The operon is inducible by lactose to the maximal
levels when cAMP and CAP form a complex. (a)
Under conditions of high glucose, a glucose
breakdown product inhibits the enzyme adenylate
cyclase, preventing the conversion of ATP into
cAMP. (b) Under conditions of low glucose, there is
no breakdown product, and therefore adenylate
cyclase is active and cAMP is formed. (c) When
cAMP is present, it acts as an allosteric effector,
complexing with CAP. (d) The cAMP-CAP complex
acts as an activator of lac operon transcription by
binding to a region within the lac promoter. (CAP,
catabolite activator protein; cAMP, cyclic adenosine
monophosphate.)

Catabolite activator
protein.Codificada por
el gen crp

CAP enlaza una secuencia especfica en el DNA e incrementa la afinidad de la RNA polimerasa por el
promotor lac
Ambas secuencias tiene en comn su simetria rotacional doble (rotational twofold symmetry). Si se rota
la secuencia 180 en el plano de la hoja, la secuencia de las bases resaltadas ser la misma

Palindrome: A nucleotide sequence on a DNA


molecule in which the same sequence is found
on each strand, but in the opposite direction,
leading to the formation of a repetitious
inversion.
In genetics, dyad symmetry (diada) refers to
two areas of a DNA strand whose base pair
sequences are inverted repeats of each other.
They are often described as palindromes.For
example, the following shows dyad symmetry
between sequences GAATAC and GTATTC
which are reverse complements of each other.

El dobles en el DNA puede ayudar al enlace de la RNA polimerasa

When CAP binds the promoter, it creates a bend greater that 90 degrees in the
DNA.

La secuencia de bases muestra que la RNA pol y CAP enlazan adyacentemente

Sumario del
Operon lac

Bases de la regulacin de la transcripcin


procariotica
La regulacin de la transcripcin depende de
dos tipos de interaccin DNA-protenas
Represor: Regulacin negativa
Interfiere con el enlace de la RNA polimerasa a su promotor
o bien impide su movimiento

Activador: Regulacin positiva


Ayuda a unir la RNA polimerasa a su promotor para iniciar la
transcripcin

Ambos, la protenas reguladoras y sus sitios de


enlace: Genetic switches (interruptor gentico)
Control eficiente de los cambios en la expresin gentica
que ocurre en respuesta a condiciones ambientales

Figure 11-13. Comparison of positive and


negative control. The basic aspects of negative
and positive control are depicted. (a) In negative
control, an active repressor (encoded by the R
gene in the example shown here) blocks gene
expression of the A B C operon by binding to an
operator site (O). An inactive repressor allows
gene expression. The repressor can be
inactivated either by an inducer or by mutation.
(b) In positive control, an active factor is required
for gene expression, as shown for the X Y Z
operon here. Small molecules can convert an
inactive factor into an active one, as in the case
of cyclic AMP and the CAP protein. An inactive
positive control factor results in no gene
expression. The activator binds to the control
region of the operon, termed I in this case. (The
positions of both O and I with respect to the
promoter, P, in the two examples are arbitrarily
drawn

El represor y activador deben existir en


dos formas
Una que enlace el DNA y otra que no
DNA binding domain
Sitio alostrico
Interactan con efectores alostricos

Ambos deben reconocer cuando las


codiciones ambientales son apropiadas
para su accin

Figure 11-14. The effects of allosteric effectors on the


DNA-binding activities of activators and repressors

Control dual: Regulacin positiva y negativa del operon


Arabinosa

Figure 11-15. Map of the ara region. The B, A, and D genes together with
the I and O sites constitute the ara operon

Figure 11-16. Dual control of the ara operon. (a) In the presence of arabinose, the AraC protein binds to the araI region and, when bound to cAMP,
the CAP protein binds to a site adjacent to araI. This binding stimulates the transcription of the araB, araA, and araD genes. (b) In the absence of
arabinose, the AraC protein binds to both the araI and araO regions, forming a DNA loop. This binding prevents transcription of the ara operon

Vas metablicas y niveles adicionales de


regulacin: Atenuacin
El control coordinado
de genes en bacterias es
ampliamente distribuido (operones)
Degracin de azcares
Para la sntesis de molculas esenciales, tambin los
genes que codifican estas enzimas estan organizadas
en operones y completan con el mRNA multignico
Adems en casos donde la secuencia cataltica es
conocida, hay una congruencia entre el orden de los
genes en el operon en el cromosoma y el orden de sus
productos en la va metablica

El operon lac es un ejemplo de sistema inducible en


el sentido de que la sntesis de una enzima es
inducida en presencia de su sustrato
Sistemas represibles tambin existen cuando un
exceso del producto lleva a la desactivacin de las
enzimas que lo sintetizan
Sntesis de triptofano
Grupo de 5 genes estructurales (Jacob y Monod)
Se diferencia del operon Lac en que el represor
slo enlazar el operador slo cuando este es
enlazado por el triptofano
Feedback inhibition: la primera enzima de la va
metablica es inhibida por el triptofano

Figure 11-17. The chromosomal order of genes in the trp operon of E. coli and the sequence of reactions catalyzed by the
enzyme products of the trp structural genes. The products of genes trpD and trpE form a complex that catalyzes specific
steps, as do the products of genes trpB and trpA. Tryptophan synthetase is a tetrameric enzyme formed by the products
of trpB and trpA. It catalyzes a two-step process leading to the formation of tryptophan. (PRPP, phosphoribosyl
pyrophosphate; CDRP, 1-(o-carboxyphenylamino)-1-deoxyribulose 5-phosphate.) (After S. Tanemura and R. H. Bauerle,
Genetics 95, 1980, 545.)

Otro sistema de control diferente al mecanismo de


represor-operador: Atenuacin
Dos mecanismos de regulacin transcripcional para la sntesis
de triptfano y otros aminocidos:
Control global del operon para la expresin del mRNA: reresor-trp
Una ms afinado: Atenuacin despus de la iniciacin de la
transcripcin

Analisis de mutantes:
trp R-: en presencia de triptfano, se produce trp mRNA;
eliminacin de triptofano incremento 10 veces mRNA
El represor estaba inactivo y no poda participar del
mecanismo de control, no poda ocurrir la
derepresion en el operador debido a estos bajos
niveles de triptfano

Yanofski aisl un mutante constitutivo que


sintetizaba estos mismos niveles inclusive en
presencia de triptfano
Delecin en una regin entre el operador y el
gen trp E
Secuencio el mRNA del operon triptfano
Secuencia lider de ~160 bp
Mutacin desde la base 130 a la 160
La denomin Atenuador, su presencia
reduce la rata de la transcripcin cuando el
triptfano esta presente

Figure 11-18. The leader sequence, showing the attenuator segment of the trp operon,
along with the beginning of the trpE structural sequence (showing the amino acid
sequence of the trpE polypeptide). (After G. S. Stent and R. Calendar, Molecular
Genetics, 2d ed. Copyright 1978 by W. H. Freeman and Company. Based on
unpublished data provided by Charles Yanofsky.)

Figure 11-19. Diagram of the trp operon showing the promoter (P), operator (O),
and attenuator (A) control sites and the genes for the leader sequence (L) and
the enzymes of the tryptophan pathway (E, D, C, B, and A). (After L. Stryer,
Biochemistry, 4th ed. Copyright 1995 by Lubert Stryer.)

11-20. Model for attenuation in the trp operon. (a) Proposed secondary structures in E. coli terminated trp leader RNA. Four regions can base
pair to form three stem-and-loop structures. (b) When tryptophan is abundant, segment 1 of the trp mRNA is fully translated. Segment 2 enters
the ribosome (although it is not translated), which enables segments 3 and 4 to base pair. This base-paired region somehow signals RNA
polymerase to terminate transcription. In contrast, when tryptophan is scarce (c), the ribosome is stalled at the codons of segment 1. Segment 2
interacts with segment 3 instead of being drawn into the ribosome, and so segments 3 and 4 cannot pair. Consequently, transcription continues.
(After D. L. Oxender, G. Zurawski, and C. Yanofsky, Proceedings of the National Academy of Sciences, 76, 1979, 5524.)

Factores sigmas alternativos regulan muchos grupos de genes

Bacterias gram+ requieren expresin coordinada de grupo


de genes separados localizados en el genoma para
producir cambios fisiolgicos y morfolgicos dramticos
ej. Esporulacin en Bacillus subtilis
La expresin de distintos factores sigmas permite la
transcripcin coordinada de diferentes grupos de genes o
regulones por una sola RNA polimerasa