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Principios. Principales
Aplicaciones
03/04/16
Desproteinizacin
Es la remocin o eliminacin de protenas
del plasma, suero sangre con el fin de
obtener un filtrado o sobrenadante libre de
protenas y poder cuantificar la sustancia
materia de anlisis sin interferencias.
Evita: la formacin de espuma, turbidez,
precipita-dos y que las protenas
interfieran reaccionando con los reactivos.
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Condiciones de un buen
desproteinizante :
1. No agregar ninguna sust. que pueda interferir
con las determs. posteriores.
2. No pptar ni retener por adsorcin la
sustancia a determinar, lo que se verifica por
mtodos de recuperacin (agregar al lq. a
desprot. una cant. conocida de la sust. a
valorar, la que debe recuperarse en cantidad
aproximadamente igual a la terica desp. de
desprot.)
3. Eliminar otras susts que puedan estar ptes. en
el fluido a desproteinizar y que interfieran con
las tcnicas que se aplicarn posteriormente.
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Mtodos de desproteinizacin:
A) M. Fsicos: No alteran las protenas q separan
1. Dilisis
2. Ultracentrifugacin
3. Ultrafiltracin
4. Adsorcin por susts particuladas.
B) M. Fsico Qumicos: Protenas se separan x
pptacin, q generalm. altera su estado fsico
inicial, y no puede ser retomado:
1. Desnaturalizacin x el calor
2. Deshidratacin
a) Deshid. con solventes miscibles con el
agua
b) Deshid. con
soluciones salinas
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T. Hayde Ziga Cceres
Desproteinizacin es necesaria p. la
determ. de diversos metabolitos y
conviene realizarla rpidam. despus de la
recoleccin de las muestras.
Puede realizarse utilizando diferentes
agentes que provocan la pptacin de las
protenas, que se separan por
centrifugacin filtracin, recogin-dose
un sobrenadante libre de protenas.
T. Hayde Ziga Cceres
Deben corresponderse
Ba(OH)2 0,3 N
NaOH
fenolftalena 1% en etanol
Muestra
1,0
mL
sang
re
1,0 mL
plasma o
suero
1,0 mL
L.C.R.
Tg Na 10
%
H2SO4
0,66 N
1,0
mL
0,5 mL
0,25 mL
1,0
mL
0,5 mL
0,25 mL
1:10
1:5
1:10
DILUCIN:
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1,0 mL
de
Orina
1:100
Agua destilada
3.5 mL
3.5 mL
3.5 mL
Suero
0.5 mL
0.5 mL
0.5 mL
Sangre
Orina
ATC 5 %
3.5 mL
1 mL
Tungstato Na 10
%
0.5 mL
H2SO4 2/3 N
0.5 mL
ZnSO4
0.5 mL
Ba(OH) 2
0.5 mL
cido actico 2
%
Diluc. de
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1.5 mL
0.5:5
0.5:5
0.5:5
3.5:5 10
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Mtodos de cuantificacin
a) Mtodo qumico (M. de Caraway)
c. rico + H3PW12O40
Alantona +
CO2 + Azul de
Tungsteno
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CIDO RICO
Mtodo de Caraway
Fundamento:
El c. rico es oxidado a alantona y CO 2 por
el cido fosfotngstico en solucin alcalina.
El c. fosfotngstico es reducido a azul de
tungsteno que se mide a 710 m
c. rico + H3PW12O40
Alantona + CO2 +
Azul de Tungsteno
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+
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CIDO RICO
Mtodo de Caraway
REACTIVOS:
Tungstato Na 10 %
c. Sulfrico 2/3 N
Carbonato de Na 14 %
R. cido fosfotngstico
Stock c. rico 100 mg/dL
Sols Sts de 5, 10 y 15 mg/dL
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Desproteinizado:
0,5
4,0
0,25
0,25
mL
mL
mL
mL
de
de
de
de
suero
agua
H 2SO 4 0,66 N
Tungstato de Na
0.5 mL de suero
5 mL de
filtrado
X V.R.
1.5 mL
X = 0.75 = 0.15 = V.R.
5
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Procedimiento:
Agua
Suero desprot. (1:10)
u Orina (1:100)
Estndar 0,5, 1,0, 1,5
%
Carbonato Na 14 %
Bl M.P. St.
1,5
1,5
1,5
0,5
0,5
0,5
0,5
Agit., reposo 15
min.
Leer a 710 m vs16
T. Hayde
Ziga Cceres
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0.5
1.0
de agua
En 1.5 mL de
c/St. hay:
0.0075
0.015
0.0225 mg c.
rico
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[CST]
100
AMP
VR
AST
1-10
0.0075-0.15mLsuero
0.15-1.5
x-100mLsuero
=0.0075x100=5mg/dLsuero
0.15
=0.015x100=10mg/dLsuero
0.15
=0.0225x100=15mg/dLsuero
0.15
cido ricomg/dL =
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CST AST
X AMP
CST x AMP
AST
cido ricomg/dL =
Factor 1 . +
Factor 2
Factor 3 .
/ 3
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Fp %
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cido ricomg/dL =
1-100
0.015-1.5
[CST]
100
AMP
VR
AST
0.0075-0.015
x-100mLorina
x
=0.0075x100=50mg/dLorina
0.015
=0.015x100=100mg/dLorina
0.015
=0.0225x100=150mg/dLorina
0.015
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CIDO RICO
Mtodo enzimtico
Fundamento:
c. rico + 2H 2O + O 2 Uricasa Alantona +
H 2O 2 +
CO 2
H 2O 2 + 4 AF + Clorofenol POD Quinona
coloreada +
H 2O
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b) Mtodos enzimticos
c. rico + 2H 2O + O 2
Uricasa
Alantona +
H 2O 2 + CO 2
1. Por espectrofotometra diferencial:
c. rico abs a 283 m a pH<7
y de 290 a 293 m a pH>7
Se mide Abs a las longs de onda
mencionadas antes y despus de la
incubacin del c. rico con la Uricasa
pte. en suero, plasma u orina.
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Procedimiento:
Bl
M.P. St.
Estndar
Suero 20 uL
u Orina (1:100)
R. 1 800
800
800 L
20 L
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Catalasa
Acetaldehdo + H2O
y N,N-dimetilanilina en pcia de
peroxidasa dando un col. azul de
indamina, que abs a 600 m
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ALIMENTOS A
LIMITAR
50-150 mg./100 g.
Fruta
Zumos de fruta
Verduras
(excepto del
grupo de
alimentos a
limitar)
Nueces
Cereales
Pan (excepto
integral)
Bebidas (caf, t,
)
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Grasas
Guisantes
Legumbres secas
Coliflor
Esprragos
Espinacas
Setas
Productos
integrales
Aves (pollo, pato,
)
Carne (ternera,
cordero, cerdo)
Pescado
(excepto
T. Hayde Ziga
Cceres
los de G3)
ALIMENTOS A
EVITAR
150-1000
mg./100 g.
Vsceras
(hgado,
riones,
sesos)
Extracto de
carne
Anchoas
Arenque
Sardina
Caballa
Moluscos
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cido rico:
Componente del riesgo
cardiovascular en el Sndrome
Metablico
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