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- Tcnicas bsicas de
ingeniera gentica.
corta
Sitio de restriccin
Secuencia palindrmo
Visualizacin de productos
de la restriccin:
ADN de virus / endonucleasa de
restriccin PsiI
M: marcador de peso
molecular (fragmentos del
DNA de virus lambda /enzima
BmeI8I).
1-2-3: ADN de diferentes virus
Importancia :
Enzima de restriccin : EcoRI
ADN del organismo 2
M: marcador de peso
molecular (fragmentos del
DNA de virus lambda /enzima
BmeI8I).
1-2-3: ADN de diferentes virus
Mutacin en el sitio de
restriccin : Marcador gentico
Normal
Enfermo
Gen mutado
Huellas.
Huellitas .
Marcas
Marcadores..
* Marcadores
genticos
Locus marcador
MARCADORES GENTICOS
Loci heredables asociados
(ligados) a un carcter de
inters agronmico y se
heredan juntos.
* Isoenzimticos
Utilidad :
Agronmicamente :
asisten al mejorador en el
proceso de seleccin
artificial temprana de un
fenotipo superior.
Marcadores Morfolgicos
Maz
Endosperm
a blanco
Y
Y
5 cM
5 cM
Androesterilidad
ms1
En cebada
ms1
Endosperm
a blanco
Androesterilida
d
sex1
1cM
ms 9
sex1
1cM
ms 9
MARCADORES GENTICOS
*Marcadores isoenzimticos
- Polimorfismo a nivel del producto gnico
(polipptido o protena)
Replicacin
Replicacin del
del DNA
DNA
Reaccin en Cadena
de la Polimerasa
(PCR)
Los pasos 2 a 4 se
repiten 30-35 veces
e incrementan ms
de 106 veces el
fragmento de DNA
de inters
Reaccin
de
PCR
4
oli 11
oli 12
oli 17
MPM
(pb)
oli 22
500
400
300
200
100
Fingerprinting de la Variedad
Arbequina de Olivo
MPM (pb)
Figura 3: Electroforesis
en gel de agarosa 3%
200
2- Empeltre LP;
3- Manzanilla de refer.
(CSIC, Espaa);
4-Manzanilla EC;
5- Manzanilla 4S;
6- Manzanilla gigante
4S;
7- Picual de refer.
8- Nevadillo EC;
9- Nevadillo 4S;
M: 100 pb. DNA ladder
(Sigma).
Utilidad de los
Marcadores genticos
1- FINGERPRINTING (huella gentica)
2- BANCOS DE GERMOPLASMA
3- MAPAS GENTICOS
4- LOCI LIGADOS
5- DIVERSIDAD Y ESTRUCTURA
GENTICA
6- FORMA DE REPRODUCCIN
7- EVOLUCIN Y FILOGENIA
Seleccin Asistida
por Marcadores
(MAS)
Marcadores Genticos
*MARCADORES MOLECULARES: - Polimorfismo gentico directamente a nivel del DNA
1- Basados en la PCR
(Reaccin en Cadena
de la Polimerasa)
Enzimas de restriccin
Enzimas de tipo II :
- Corte simtrico exacto en
secuencias especficas
palindrmicas
- Origen : diferentes organismos
-Denominacin : sistema alfa
numrico, (EcoRI proviene de
Escherichia coli
- Generan extremos cohesivos
romos
Tcnica
de RFLP
NlaIII
TaqI
RsaI
Tsp509I
MseI
Reaccin en
cadena de la
polimerasa
(PCR)
Ciclo 3
Marcadores morfolgicos:
controlados por un solo loci y
presentan expresin temprana
a) En Brassica:
primera hoja
vellosa
b) En maz: raz
primaria prpura
coleoptilo prpura
Asociados a la
Haploida
G5'
PstI
ADN del
organismo 1
ADN del
organismo 2
Figure3.3.
b.
Bluntends
Marcador Isoenzimtico
Enzima
monomrica
Enzima
dimrica