ADN

REPLICACIÓN

CZ

Griffith Experiment

History of DNA
• Cromosomas están hechos de
DNA y proteínas
• Experimentos en virus
bacteriophage por Hershey &
Chase probó que el DNA fue el
material genético de las células

P Radioactivo fue inyectado dentro de la
bacteria!
32

Hershey & Chase Experiment .

9% .Descubrimiento de la estructura del ADN • Erwin Chargaff mostró las cantidades de las cuatro bases en el ADN ( A.3% G = 19.T.C.G) • En una célula somática o corporal: A = 30.5% C = 19.3% T = 30.

Regla de Chargaff • Adenine debe aparearse con Thymine • Guanine debe aparearse con Cytosine • Las bases forman enlaces de hidrógeno débiles T A G C .

Watson & Crick built the first model of DNA using Franklin’s x-rays .DNA Structure Rosalind Franklin took diffraction x-ray photographs of DNA crystals In the 1950’s.

G. or T) . C.DNA Nucleotide Phosphate Group O O=P-O O 5 CH2 O N C1 C 4 Sugar (deoxyribose) C3 C2 Nitrogenous base (A.

DNA 5 O 3 3 P 5 O O C G 1 P 5 3 2 4 4 P 5 P 2 3 1 O T A 3 O 3 5 O 9 5 P P .

Cadenas antiparalelas • Una cadena va de 5’ to 3’ (azúcares) • La otra va en dirección opuesta de 3’ a 5’ (azúcares) .

Bases nitrogenadas • Doble anillo PURINES Adenine (A) Guanine (G) A or G • Simple anillo PYRIMIDINES Thymine (T) Cytosine (C) T or C .

60% A-T and 40% C-G . cuánta Cytosine está presente? Answer: There would be 20% Cytosine Adenine (30%) = Thymine (30%) Guanine (20%) = Cytosine (20%) Therefore.Question: • Si hay 30% Adenine.

G1 interphase Mitosis -prophase -metaphase -anaphase -telophase G2 .DNA Replication • S phase during interphase of the cell cycle • Nucleus of eukaryotes S phase DNA replication takes place in the S phase.

LA REPLICACIÓN DEL ADN Cuatro requisitos para ADN sea considerado material genético  Debe ser portador de la información descifrando el código genético  Se debe replicar replicación del ADN  Debe permitir que la información cambie Mutación  Debe regir la expresión del fenotipo la función del gen .

 Las proteínas leer la secuencia de nucleótidos del ADN conforme la hélice de ADN se desenrolla. o iniciar la copia de la misma. .  Las proteínas pueden o bien unirse a una secuencia de ADN.ADN almacena la información en la secuencia de sus bases  Gran parte de la información específica de secuencia de ADN es accesible sólo cuando se desenrolla la doble hélice.

La replicación del ADN se produce con gran fidelidad La estabilidad del ADN celular somático y la estabilidad del ADN de células reproductivas son esenciales.9% sequence identity Genetic diseases Pan troglodytes 99% sequence identity . ¿Por qué? Identity Homo sapiens sapiens 99.

 En eucariotas.  La tasa de replicación en eucariotas es más lento que resulta en una mayor fidelidad / exactitud .REPLICACIÓN DEL ADN Importancia biológica  La precisión extrema de la replicación del ADN es necesario con el fin de preservar la integridad del genoma en las generaciones sucesivas. la replicación sólo se produce durante la fase S del ciclo celular.

E. B. C. F. Semi-conservativa Inicio en el ‘origen’ Síntesis siempre en dirección 5-3’ Puede ser uni or bidireccional Semi-discontinua Se requiere primers RNA . D.Reglas básicas de la replicación A.

DNA replication 3 possible models Una replicación semiconservadora es aquella en que la cadena de dos filamentos en hélice del ADN se replica de forma tal que cada una de las dos cadenas de  ADN formadas consisten en un filamento proveniente .

How do we know that DNA replication is semiconservative? Meselson-Stahl experiments .

La imagen a la izquierda es una fotografía UV mostrando la alineación en bandas del ADN de diferentes densidades después de la centrifugación. coli y el ADN después de una división celular. coli criado en 15N fueron cambiados a 14N y luego fueron cosechados en cinco diferentes puntos de tiempo. Panel de abajo: Los datos actuales. La gráfica a la derecha muestra es un trazo de la intensidad de las bandas en la foto.Figura: La centrifuga del gradiente de densidad de una mezcla de 15N y 14N. . Figura: El gradiente de densidad de E. El ADN fue centrifugado resultando en el patrón de banda que se muestra aquí. E. Panel de arriba: las tres predicciones experimentales de tres modelos competidores de la replicación de ADN. Meselson y Stahl primero mostraron que pueden separar una mezcla de ADN de las dos diferentes densidades.

coli .oriC Eucaryotas – múltiples sitios de origen (replicator) Prokaryotes Eukaryotes .B) Starts at origin Proteínas iniciadoras identificanr secuencias de bases específicas en el ADN llamados los sitios de origen Procariotas .g E.sitio único origen E.

In what direction does DNA replication occur? ynthesis is ALWAYS in the 5’-3’ direction What happens if a base mismatch occurs? Where does energy for addition of nucleotide come from? .

D) Uni or bidirectional Replication forks move in one or opposite directions  .

E) Semi-discontinuous replication Anti parallel strands replicated simultaneously  Leading strand synthesis continuously in 5’– 3’  Lagging strand synthesis in fragments in 5’-3’ .

F) RNA primers required .

seals nick via phosphodiester linkage .synthesis of new strand .Prevents torsion by DNA breaks .Core proteins at the replication fork Topoisomerases Helicases Primase Single strand binding proteins DNA polymerase Tethering protein DNA ligase .stabilises polymerase .separates 2 strands .prevent reannealing of single strands .RNA primer synthesis .

The mechanism of DNA replication Arthur Kornberg. a Nobel prize winner and other biochemists deduced steps of replication – Initiation • Proteins bind to DNA and open up double helix • Prepare DNA for complementary base pairing – Elongation • Proteins connect the correct sequences of nucleotides into a continuous new strand of DNA – Termination • Proteins release the replication complex .

Core proteins at the replication fork Nature (2003) vol 421.pp431-435 Figure in ‘Big’ Alberts too .

Replicación del ADN  .

FIN .

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