UNIVERSIDAD

TECNOLOGICA
EQUINOCCIAL
INTEGRANTES:
DIEGO CUESTA
CATHERINE PAZMINO
JORGE MEDINA
DIEGO PEREZ
DAYANA RIVERA
JOSE ANTONIO ROSALES
MAYRA VEINTIMILLA

BIOTECNOLOGIA VERDE
La biotecnologa vegetal es una extensin de la tradicin de
modificar las plantas
Permite la transferencia de una mayor variedad de informacin
gentica de una manera ms precisa y controlada.
Permite la transferencia selectiva de un gen o unos pocos genes
deseables.
Con su mayor precisin, esta tcnica permite que los mejoradores
puedan desarrollar variedades con caracteres especficos
deseables.
Muchos de estos caracteres desarrollados en las nuevas variedades
defienden a las plantas de insectos, enfermedades y malas hierbas
que daan el cultivo.

Incorporan
mejoras de
calidad,
tales como
frutas y
legumbres
ms
sabrosas;
ventajas
para su
procesado

Estas
mejoras en
los cultivos
pueden
contribuir a
producir
una
abundante
y saludable
oferta de
alimentos

Proteger el
medio
ambiente
para las
futuras
generacion
es.

En la base de las
nuevas biotecnologas
desarrolladas estn:

Las tcnicas de
aislamiento de clulas,
tejidos y rganos de
plantas y el crecimiento
de estos bajo
condiciones
controladas (in vitro).

Existe un rango
considerable de
tcnicas disponibles
que varan
ampliamente en
sofisticacin y en el
tiempo necesario para
producir resultados
tiles.

APLICACIONES DE LA
BIOTECNOLOGIA AGRARIA
Resistencia a herbicidas.
La resistencia a herbicidas se basa en la
transferencia de genes de resistencia a partir de
bacterias y algunas especies vegetales
Se ha conseguido que plantas como la soja sean
resistentes al glifosato, a glufosinato en la colza y
bromoxinil en algodn.
As con las variedades de soja, maz, algodn o canola que
las incorporan, el control de malas hierbas se simplifica
para el agricultor y mejoran la compatibilidad
medioambiental de su actividad, sustituyendo materias
activas residuales.

Suponen un incentivo
para que los agricultores
adopten tcnicas de
agricultura de
conservacin, donde se
sustituyen parcial o
totalmente las labores de
preparacin del suelo.

Esta sustitucin permite

dejar sobre el suelo los
rastrojos del cultivo
anterior, evitando la
erosin, conservando
mejor la humedad del
suelo y disminuyendo las
emisiones de CO2 a la
atmsfera.

A largo plazo se consigue

mejorar la estructura del
suelo y aumentar la
fertilidad del mismo.

RESISTENCIA A PLAGAS Y ENFERMEDADES.

Gracias a
la
biotecnolo
ga ha sido
posible
obtener
cultivos
que se
autoprote
gen en
base a la
sntesis de
protenas
u otras
sustancias
que tienen
carcter
insecticida
.

Este tipo
de
proteccin
aporta una
serie de
ventajas
muy
important
es para el
agricultor,
consumido
res y
medio
ambiente:

Reduccin
del
consumo
de
insecticida
s para el
control de
plagas.

Proteccin
duradera y
efectiva
en las
fases
crticas del
cultivo.

Ahorro de
energa en
los
procesos
de
fabricaci
n de
insecticida
s, as
como
disminuci
n del
empleo de
envases
difcilment
e
degradabl
es.

Hay estimaciones de que en

EEUU gracias a esta
tecnologa hay un ahorro
anual de 1 milln de litros de
insecticidas (National Center
for Food and Agricultural
Policy), que adems
requeriran un importante
consumo de recursos
naturales para su fabricacin,
distribucin y aplicacin

Se aumentan las
poblaciones de
insectos beneficiosos.

Se respetan las
poblaciones de fauna
terrestre.

Este tipo de resistencia

se basa en la
transferencia a plantas
de genes codificadores
de las protenas Bt de la
bacteria Bacillus
thuringiensis, presente
en casi todos los suelos
del mundo, que
confieren resistencia a
insectos, en particular
contra lepidpteros,
colepteros y dpteros.

Las protenas Bt no son

txicas para los otros
organismos. La Bt es una
exotoxina que produce la
destruccin del tracto
digestivo de casi todos
los insectos ensayados.

Este gen se ha
incorporado a varios
cultivos. Destacan
variedades de algodn
resistentes al gusano de
la cpsula, variedades de
patata resistentes al
escarabajo y de maz
resistentes al taladro.

MEJORA DE LAS PROPIEDADES NUTRITIVAS Y

ORGANOLPTICAS.
El conocimiento del metabolismo de las plantas
permite mejorar e introducir algunas caractersticas
En el tomate, se hadiferentes.
logrado mejorar la textura y la
consistencia impidiendo el proceso de maduracin,
al incorporar un gen que inhibe la formacin de
pectinasa, enzima que se activa en el curso del
envejecimiento del fruto y que produce una
degradacin de la pared celular y la prdida de la
consistencia del fruto.
En maz se trabaja en aumentar el contenido en
cido oleico y en incrementar la produccin de los
En tabaco y almidones
soja, se ha especficos.
conseguido aumentar el

contenido en metionina, aminocido esencial,

mejorando as la calidad nutritiva de las especies. El
gen transferido procede de una planta silvestre que
es abundante en el Amazonas (Bertollatia excelsia)
y que posee un alto contenido en ste y otros
aminocidos.

RESISTENCIA A ESTRS
ABITICO

Las bacterias
Pseudomonas
syringae y Erwinia
herbicola, cuyos
hbitat naturales son
las plantas, son en
gran parte
responsables de los
daos de las heladas
y el fro en muchos
vegetales, al facilitar
la produccin de
cristales de hielo con
una protena que
acta como ncleo
de cristalizacin.

La separacin del
gen implicado
permite obtener
colonias de estas
bacterias, una vez
inoculadas en
grandes cantidades
en la planta, le
confieren una
mayor resistencia a
las bajas
temperaturas.

En cualquier caso,
la resistencia a
condiciones
adversas como fro,
heladas, salinidad,
etc., es muy difcil
de conseguir va
biotecnologa, ya
que la gentica de
la resistencia suele
ser poligentica,
interviniendo
mltiples factores.

OTRAS APLICACIONES.
En el campo de
la horticultura
se han obtenido
variedades
coloreadas
imposibles de
obtener por
cruzamiento o
hibridacin,
como el caso
de la rosa de
color azul a
partir de un gen
de petunia y
que es el
responsable de
la sntesis de
delfinidinas
(pigmento
responsable del
color azul).

Se ha
conseguido
mejorar la
fijacin de
nitrgeno por
parte de las
bacterias
fijadoras que
viven en
simbiosis con
las
leguminosas.

Transferencia a
cereales de los
genes de
nitrificacin de
dichas
bacterias.

En colza y tabaco, se ha logrado obtener plantas androestriles

gracias a la introduccin de un gen quimrico compuesto por dos
partes: una que slo se expresa en el tejido de la antera que
rodea los granos de polen y otra que codifica la sntesis de una
enzima que destruye el ARN en las clulas de dicho tejido.

Este procedimiento permitir la obtencin de hbridos comerciales

con mayor facilidad.

En la industria auxiliar a la agricultura destaca la produccin de

plsticos biodegradables procedentes de plantas en las que se les
ha introducido genes codificadores del poli-b-hidroxibutirato, una
sal derivada del butrico. Cuando estos genes se expresan en
plantas se sabe que de cada 100 gr de planta se puede obtener 1
gr. de plstico biodegradable.

CONCLUSIONES
La biotecnologa verde
permite la transferencia
selectiva de una mayor
variedad de informacin
gentica de una forma
precisa y controlada
mediante la utilizacin
de tcnicas que
permiten desarrollar
variedades con
caracteres especficos
deseables y sin
incorporar los que no lo
son.

Las tcnicas de la
manipulacin gentica
son importantes en el
contexto general de la
agricultura moderna;
donde la biotecnologa
agrcola conecta areas
como:
Biologa Molecular y
Celular con prcticas
agrcolas tradicionales
produciendo nuevas
variedades de plantas y
tcnicas de
multiplicacin que se
utilizaran a futuro.

Desarrollo de una nueva metodologa

de
transformacin
gentica
no
tradicional, como estrategia potencial
para inducir resistencia a infecciones
fngicas en vainilla (Vanilla planifolia)

Vainilla (vanilla planifolia)

Orqudea de inters
comercial de su fruto,
rgano donde se extrae la
vainilla
Sustancia se la
emplea como
saborizante natural

Contiene tejidos ricos en

nutrientes, son muy
susceptibles a infecciones
causadas por hongos y
bacterias
Fusari
um

 Pruebas de transformacin gentica

con PLBs
( Protocorm Like Bodies ) de cultivos
in vitro de V. planifolia

Agrobacterium
tumefaciens

Vehculo de
trasformacin

Objetivos
Desarrollar y optimizar el Sistema
de Aceleracin de Liposomas
Cristalizados.
Transformar
genticamente
material vegetal a partir de cultivos
in vitro de vainilla, empleando la
tcnica de biobalstica, para incluir
resistencia a hongos patgenos.
Establecer
y
optimizar
las
metodologas
de
micropropagacin clonal de las
plantas de vainilla.

MATERIALES Y
MTODOS

ESTUDIO

El estudio se realiz en el Laboratorio de Biologa

Molecular de la Escuela de Ciencias y Letras y en el

Laboratorio de Biotecnologa de Plantas Tropicales de la
Escuela de Agronoma, Instituto Tecnolgico de Costa Rica,
Sede San Carlos.

LAS ACTIVIDADES DE ESTE ESTUDIO

CONSISTIERON EN TRES FASES

Obtencin de las races de vainilla in vitro

Transformacin gentica por medio del bombardeo de

micropartculas

Regeneracin de las terminales radicales a brotes

 Se utiliz el plsmido
pHAGG est constituido
por los genes que
codifican
para
la
quitinasa (TACH) y la
glucanasa de la clase I
de tabaco, utilizados
para inducir resistencia
a Fusarium.
Vector

Los genes estn clonados bajo el control

del promotor constitutivo 35S del virus del
mosaico de la coliflor (CaMV 35S) y el
terminador nopalina sintasa (nos).

Se utiliz un sistema de aceleracin de

partculas de biobalstica a baja presin por
medio del sistema de aceleracin PIG
(Particle Inflow Gun)

Obtencin de las races de vainilla in vitro

El cultivo in vitro (de un medio slido), se cortaro microestacas
conteniendo un nudo y se 4 colocaron 20 de las mismas en cada
frasco erlenmeyer de 250 ml para un total de 36, conteniendo
cada uno 50 mL de medio de cultivo MS lquido y 30 g/L de
sacarosa.
Los erlenmeyers se colocaron en agitacin (80 rpm) y en la
oscuridad, a una temperatura de 272oC y se mantuvieron bajo
estas condiciones por un mes. 16 horas antes de realizar el
bombardeo, se cortaron las terminales de las races
provenientes de frascos en medio de cultivo lquido en agitacin,
con una longitud de 0.5 a 1.0 cm y se colocaron en la parte
central de una placa de Petri conteniendo medio osmtico
slido.

Obtencin de las races de vainilla in vitro

Al momento de realizar el bombardeo se coloc sobre
la placa de Petri una tapa perforada de 10 cm de
dimetro de acero inoxidable que presentaba un
orificio central de aproximadamente 5 cm de
dimetro y orificios laterales de 1 cm de dimetro,
para disminuir la dispersin de los explantes.
El medio osmtico slido contiene las sales MS, y
est suplementado con 18 g/L de manitol y 18 g/L de
sorbitol. Las races se bombardearon con el plsmido
y fueron colocadas en el medio de cultivo
suplementado con el regulador de crecimiento
Benciladenina (BA) a las concentraciones de 1 y 3
mg/L.

SE INCLUYERON TRES CONTROLES DIFERENTES A

PARTIR DE LAS TERMINALES RADICALES OBTENIDAS
DEL MEDIO DE CULTIVO MS LQUIDO:

Un
grupo
se El segundo grupo se
traslad al medio
traslad
osmtico
y
directamente
al
posteriormente las
medio de cultivo
terminales radicales
suplementado
fueron transferidas
con el regulador
al medio de cultivo
de crecimiento BA
suplementado con el
a
las
regulador
de
concentraciones
crecimiento BA a las
de 1 y 3 mg/L
concentraciones de
(control sin medio
1 y 3 mg/L (control
con medio osmtico)
osmtico

Un tercer grupo
que se traslad al
medio regulador
osmtico,
que
posteriormente
fueron
bombardeadas sin
el
plsmido
y
finalmente
colocadas en el
medio de cultivo
suplementado
con el regulador
de crecimiento BA
a
las
concentraciones

Se bombardearon un total
5 de 18 placas, doce de
las mismas bombardeadas
con el plsmido para los 6
tratamientos
por
duplicado, distribuidos en
las tres presiones (80, 100
y 110 psi) y las dos
distancias de disparo (5.5
y 8.0 cm).

Las seis placas restantes

correspondieron
a
las
placas del control de
bombardeo
sin
el
plsmido para cada uno
de los tratamientos de
distancia-presin.

Una vez que las terminales

radicales
se
bombardearon,
permanecieron
en
el
medio
osmtico por 24 horas ms, al igual
que las terminales radicales del
control del medio osmtico sin
bombardear.

Se establecieron dos perodos de

medicin del porcentaje de formacin
de estas estructuras, a los 5 y 30 das
de iniciados los cultivos.La formacin
de PLBs a partir de los meristemos
radicales fue analizada por medio de
ANOVA,
utilizando
el
programa
Statistical Analysis System (SAS).

PARA LA EVALUACIN DE LOS

BROTES
Se realiz tomando una muestra de 20 terminales radicales
por tubo, para cada uno de los tratamientos bombardeados
con el plsmido y un total de 5 terminales radicales, para
los controles. La supervivencia de los explantes, la cual est
en funcin de la presencia de contaminacin por hongos o
bacterias presentes en el exudado y por oxidacin
(presencia de tejido necrtico) se determin a las 2
semanas de realizado el bombardeo, tanto en los
tratamientos como en los controles.

Resultados y Discusin

A los 37 das se obtuvieron 20 races por frasco para

un total de 750

Se us una tapa perforada de acero inoxidable para

bombardear las partculas de tungsteno, se observ
dispersin de terminales radicales sobre la placa
Petri con menor contaminacin sobre estas

Despus del crecimiento durante un

mes se observ engrosamiento en
las terminales radicales y una
prolongacin en la parte superior
de las mismas

Se reconoci como una respuesta

inicial a la formacin de PLBs

Terminales radicales de V. planifolia transferidas al medio osmtico, posteriormente

bombardeadas con el plsmido y finalmente colocadas en medio MS suplementado
con 1 y 3 mg/L de BA.

Podra ser que una dosis baja de BA (1 mg/L), sea

suficiente para que las terminales radicales de V.
planifolia induzcan la formacin de estructuras tipo
PLB que conducen a su vez a la formacin de brotes
diferenciados y de color verde.

Concentracin de 1 mg/L permiti el mayor

porcentaje de brotes de vainilla con mayor
elongacin.

Es factible utilizar meristemos radicales de vainilla para

la transformacin gentica de esta especie, debido
principalmente a su potencial para generar estructuras
con alta capacidad de proliferacin como los PLBs.

Se us el agente revelador X-Gluc a las 2 semanas de realizados los

disparos, tanto para los explantes no bombardeados en medio osmtico
como para el material bombardeado con el plsmido (en todas las
condiciones experimentales), se observ una coloracin celeste azulada
evidente en la parte superior de la estructura formada y en la parte central
de la regin interna de la misma estructura

El
contro
l del
bomb
ardeo
prese
nt
0% de
super
vivenc
ia

Contr
ol sin
medio
osmt
ico
fue de
un
100%
de
super
vivenc
ia

Control del medio

osmtico present un
60% de supervivencia

El
control
del
bomba
rdeo
presen
t 0%
de
superv
ivencia

Presi
n de
100 a
distan
cias de
5,5cm
y 8cm
psi se
obtuvo
un
40% y
38%
de
superv
ivencia

Presin de 110 psi, las

distancias de 5,5cm y
8cm se obtuvo 45% y
43% de supervivencia

 La falta de tincin azul debido a la expresin transitoria del gen

marcador en los tejidos bombardeados, se atribuye probablemente
a que el vector de transformacin utilizado no contena el gen
marcador GUS. Esto debido a que no se contaba con un mapa
detallado del vector de transformacin gentica
An con el inconveniente de la ausencia de actividad glucoronidasa en el vector utilizado, este estudio permiti
establecer un protocolo para el bombardeo mediante liposomas
cristalizados como vectores de transformacin gentica los cuales
podran mejorar la eficiencia del proceso de transgnesis.

BIBLIOGRAFIA
ALBERT, A. 1999. Aplicaciones de la biotecnologa en el mundo actual.

Vida rural n 79. pp. 29-31

ALCALDE, E. 2000. Compa CB: un maz mejorado genticamente

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metodologa de transformacin gentica no tradicional, como estrategia
potencial para inducir resistencia a infecciones fngucas en vainilla
(Vanilla planifolia. Recuperado el 10 de Noviembre de 2015, de
http://repositoriotec.tec.ac.cr/bitstream/handle/2238/2929/Informe_Final.p
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Pliego, F. (2011). Biotecnologa y sus efectos en los procesos de

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http://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=3711325