Universidad Nacional Hermilio

Valdizn
Facultad de Medicina
E.A.P. Medicina Humana

TCNICAS
DE
BIOLOGA

James Watson y Francis

Crick
en
1953
transformaron
la
biologa
con
su
descubrimiento
del
ADN.

Kary
Banks
Mullis,
bioqumico
estadounidense,
conocido por la invencin
de
la
tcnica
PCR
(Polymerase
Chain
Reaction) para amplificar

TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR

Aislar ADN o extraerlo en alta pureza

Uso
s

Visualizar el ADN para ver su estado,

cortarlo y pegarlo
Amplificar una regin en una enorme
cantidad de molculas.
Cortar una determinada regin con enzimas de
restriccin para ver si por una mutacin se
gana o se pierde un sitio de restriccin

ALTA ESPECIFICIDADUsar iniciadores que reconocen una

secuencia nica de c/microorganismo
ALTA SENSIBILIDADCapaz de
multiplicar los c.nucleicos
Detectar presencia de c.nucleicos en
Ventaj
una gran variedad de muestras
Capacidad de determinar la cantidad de
s
a
cidos nucleicos especficos
Rapidez
La probabilidad de falsos (-) inhibidores o inconvenientes
en los diferentes pasos de las tcnicas.
La probabilidad de falsos (+) contaminacin
j
a
nt
con Amplicones
e
v
s
e
Cos
D

AISLAMIENTO DE ADN
Es el principio de muchos mtodos
de: Ingeniera gentica, Medicina
forense,
Bioinformtica,
Nanotecnologa de ADN, Historia y
antropologa
2.
Degr
ada
cin

1.
Lisis
3.Puri
ficaci
n

PASOS PARA AISLAR EL ADN

Lisis
r
a
l
u
cel

Las
sales
caotrpicas rompen
la
estructura
tridimensional
de
macromolculas
como las protenas o
los cidos nucleicos

Es la
rotura de
la
membran
a celular.

CONSIGUIENDO SU
DESNATURALIZACIN

de
n
ci
a
d
ra ccin
g
e
D
ra ca
f
a
l
i
e
t
o
al
pr
a
d
ia
c
o
as
ADN

Aceta
to de
amon
io

Se consigue
mediante la
adicin de una
proteasa

La fraccin
proteica
puede
precipitarse
mejor con la
ayuda de

Acet
ato
sdi
co

ac
c
fi
i
Pur
in

3
F
A
S
E
S

Precipi
tacin
del
ADN

Acetato

Lava
do
de
Pell
sdico
et

ADN RECOMBINANTE
Actualmente
el
desarrollo
nuevas tcnicas a permitido
estudio
de una
forma ms fcil
Una tcnica
muy
til es la del ADN
recombinante
que ha hecho
posible
investigar ms a
fondo
la
estructura
y
funcin de los
genes, a partir

de
su

CLONACIN
La clonacin
molecular se refiere
al proceso de aislar
una secuencia de
ADN de inters y
obtener mltiples
copias de ella en un
Los organismo.
plsmidos son
fragmentos de ADN
circular bacteriano
extracromosmico
que pueden albergar
un pedazo de ADN. El
plsmido funciona
como vector.

VECTORES
Los vectores son molculas de DNA usadas
como
transporte
para
transferir
nuevo
material gentico a una clula, con ellos
puedes insertar segmentos nuevos de DNA a
organismos que anteriormente no los tenan.

GENOTECA

Una genoteca
es una
coleccin
masiva de
secuencias del
ADN
clasificadas y
dispuestas
para su uso.
Con la
secuenciacin
de genomas
completos se
han ido
desarrollando
genotecas
correspondien
tes a los genes
de organismos

REACCIN EN
CADENA DE
POLIMERASA

PCR (Polymerase Chain

Reaction)
Reaccin en cadena de la
polimerasa Kerry Mullis
en 1983 desarroll esta
tcnica.
Amplificacin de un gran
nmero de copias a
partir de un fragmento
molde de ADN, utilizando
una reaccin enzimtica

Componentes de la PCR
DNA molde.
Exceso de ambos cebadores especficos o

primers.
Los 4 Desoxinuclesidos
trifosfatos(dNTP).
DNA polimerasa estable al calor taq
polimerasa.
El proceso de
PCR incluye 3
pasos bsicos
que se repiten
25 veces o ms.

En el PCR hay una amplificacin

exponencial

Cmo preparar una PCR

Variantes de la
PCR
Variacin
de
la
PCR
convencional.
Para estudiar ARNm.
Emplea
una
transcriptasa
inversa para realizar la sntesis
de un ADN complementario al
A ste
mayor
ARN
(ADNc)
a
continuacin
Permite,
a
cantidad
de
PCR
EN
se amplia con PCR.
diferencia
DNA
en
la
del
PCR
convencional
,
la
cuantificaci
n de
la

TIEMPO
REAL

muestra,
mayor
la
sntesis
de
nuevo DNA
en la reaccin
de PCR, pues

APLICACIONES

VENTAJAS DEL PCR

DESVENTAJAS
DEL
PCR
Se puede reproducir solamente partes

del genoma en donde se conoce por lo

menos una mnima secuencia de 20 40
pb.
Se necesitan primers especficos que sean
complementarios al fragmento que se desea
sintetizar.

CULTI
VO
CELUL

CULTIVO CELULAR
El cultivo celular es una tcnica que se basa en la obtencin

de clulas individuales en suspensin a partir de un tejido,

ya sea por mtodos mecnicos o enzimticos y su posterior
incubacin en un medio de cultivo lquido o slido.

Usos de los Cultivos

celulares

MUCHA
S
GRACIA
S POR
SU
ATENCI
N