CROMATOGRAFA

Mtodos de separacin donde una mezcla de solutos

disueltos en un solvente son separados por distribucin
diferencial entre dos fases .
Equilibrio continuo de un soluto entre dos fases

Una fase, el solvente, es mvil y lleva a los solutos a travs

de otra fase fija estacionaria.
La fase mvil : lquido o gas.
La fase estacionaria: Un slido como hojas de papel de
celulosa, capilares de tubos de vidrio rellenos con
polmeros orgnicos complejos; o un Lquido.
Existe una interaccin de solutos con la fase estacionaria:
Adsorcin, particin, exclusin por tamao e interacciones
electrostticas.

RAMAS DE LA CROMATOGRAFA
De acuerdo con la fase mvil y los aparatos fsicos
CROMATOFRAFA
Cromatografa lquida (CL)
Mtodos planos
Cromatografa
en papel (CP)

Cromatografa en
capa delgada (CCD)

Cromatografa
en placa delgada
de alta resolucin
(CPDAR)

Cromatografa gaseosa (CG)

Mtodos de columnas
CL de columna
abierta

CL de alta
Presin
(HPLC)

Columna
empaquetada

Columna de pared
recubierta (capilar)

 De acuerdo con el mecanismo de separacin de la fase

estacionaria.
CROMATOFRAFA
Cromatografa lquida
Lquido/slido
(adsorcin L/S)

Lquido/Lquido
(particin L/L)

Intercambio inico
(intercambio inico
electrosttico)
Catin

Anin

Exclusin por tamao

(filtracin molecular FM)
o filtracin por gel (FG)

Cromatografa gaseosa
Gas/lquido
Gas/slido
(Adsorcin G/S) (Particin G/L)

PRINCIPIOS GENERALES
Bases fisicoqumicas del proceso de separacin.
Se describen dos equilibrios diferentes:
Equilibrio de fase : entre slido, lquido y gas.
Sublimacin, destilaciones.
Equilibrio de distribucin: Diferencia de solubilidad y
adsorcin de los Solutos entre dos fases inmiscibles.
Las tcnicas cromatogrficas.
Fundamento FQ : La termodinmica y la interaccin
molecular.

 COEFICIENTE DE DISTRIBUCIN DE
CONCENTRACIONES EN EQUILIBRIO Kd.
La distribucin es un proceso termodinmico.
Ce
Concentracin molar en la fase estacionaria
Kd =
Cm Concentracin molar en la fase mvil.
ISOTERMA DE ADSORCIN DISTRIBUCIN
El equilibrio de distribucin de un soluto que est siendo separado en un
sistema cromatogrfico a temperatura constante (isotrmica) se grafica ,
Cm frente a Ce, , m la pendiente es = a Kd.
La forma de la grfica depende de:
La Entropa So y la Entalpa Ho durante el proceso de interaccin de
Soluto y Fase estacionaria y soluto y solvente.

FACTOR CAPACIDAD k
Indica la forma en que interacta el analito individual
entre las dos fases (estasionaria y mvil ).
Ve - Vo
tr - to
K =
=
Vo
to
Vo = Volumen muerto. Vol.de fase mvil en la columna.
Ve = Volumen de elusin de un soluto desde la inyeccin
hasta la mxima concentracin ( pico)
K pequeo= Los componentes son poco retenidos por FE.
K=Valores altos indican que son bien retenidos y posible demora en
su deteccin.
Pueden ensanchar el pico, elusin difusa, POCA SENSIBILIDAD,
difcil deteccin.No vara con velocidad de flujo ni con la longitud
de la columna.

SELECTIVIDAD &
Factor de separacin. Capacidad de separar dos
solutos. Grado de resolucin obtenida en la separacin.
& = K2 / K1
& = (V2 - Vo ) / ( V1 - Vo)
& no depende de la fuerza de elusin si no de la afinidad
del soluto con la fase mvil y fase estacionaria.
& puede ser variado modificando el componente activo
de la fase mvil , modificando el pH o empleando
aditivos o cambio de fase estacionaria.
En CL se vara la FM
En CG se vara la fase estacionaria.

R
e
s
p
u
e
s
t
a
d
e
l
d
e
t
e
c
t
o
r

RESOLUCIN R
Objetivo de la cromatografa: Separar en un tiempo
razonable.
Propsito: Detectar o cuantificar los componentes en forma
pura. Purificar y dilucidar su estructura.
Capacidad de resolver los componentes separando uno de
otro y el grado de esta resolucin.Calidad de separacin.
R es la distancia d , entre el centro de ambos picos ( tiempo
de retencin), dividido entre el ancho promedio de la base,
W.
d2 d1
R =
1/2(W1 + W2)
Se supone una distribucin de las isotermas cercanas a la
linealidad.
Condiciones: Naturaleza de la Fase mvil y de la fase
estacionaria, intervalo de concentraciones del soluto.

 Valores adecuados : R = 1,25 o >

si R = 0,4 o menos no muestra separacin.
El Valor de R depende de dos factores:
Ancho de pico y distancia entre dos picos. Para C en C.
Dimetro de manchas y distancia entre ellas. C plana.
Son indicativos de Eficiencia de un proceso
cromatogrfico.Calidad de separacin entre dos picos.
Aumento de ancho de banda : mayor tiempo de
retencin en la fase estacionaria.
Causas para R= o < 0,4:Fase estacionaria no uniforme,
desequilibrio en la tranferencias de masa del soluto
entre fase mvil y fase estacionaria.
Solucin : Uniformidad en la fase estacionaria.

PLATOS TERICOS N
MEDIDA NUMRICA DE LA EFICIENCIA DE UNA
COLUMNA.
N = 16 ( tr /Wb)2
N = 5,54 ( tr / Wh )2
Tr = Tiempo de retencin o volumen de retencin.
Wb = ancho de banda en la base del pico.
Wh = ancho de banda a de altura del pico.
Ambos medidos en las mismas unidades de tiempo o
distancia.
Segmento microscpico de la columna donde
existe perfecto equilibrio entre el soluto y
las fases estacionaria y mvil.
N > 500.

ALTURA EQUIVALENTE DE PLATOS TERICOS.

AEPT
AEPT = L / N
AEPT lo ms pequeo posible.
L = altura de la columna ( mm)
N = nmero de platos tericos.
N depende :
Dimetro morfolgico y calidad de partculas.
Calidad de empaque y envejecimiento.
Tuberas y celda de flujo.
Velocidad de flujo de la fase mvil (u)
u = L / to
to es el tiempo que tarda una porcin de fase mvil para fluir por
la columna.

Ecuacin de van Deemter

Para una cromatografa gaseosa :
AEPT = A + B/ + C

A,B y C constantes

A= Difusin en remolino.
B/= Difusin longitudinal.
= Velocidad de flujo
C= suma de la transferencia de masa de la fase estacionaria y
la fase mvil a la AEPT

 Para una cromatografa lquida .

AEPT = B/ + ( 1/A + 1 / Cm )-1 + Ce
B,A,Cm y Ce son constantes
B/ = difusin longitudinal.
A = La difusin en remolino.
Cm= transferencia de masa de la fase mvil.
Ce = transferencia de masa de la fase estacionaria..
La relacin entre AEPT y seala la diferencia entre
cromatografa gaseosa y cromatografa lquida.
La difusin del soluto en la fase gaseosa es ms (104 a 105
veces +) que en fase mvil lquida.

INFLUENCIA DE LA POLARIDAD
Interacciones totales de las molculas del solvente con las
molculas de la muestra y de las molculas del solvente o
de la muestra con la fase estacionaria.
Fuerza de atraccin entre molculas.
Fuerzas dispersivas. Van der Waals
Dipolares
Puentes de hidrgeno.
Dielctricas o electrostticas.
La fuerza de un solvente est relacionado con su polaridad.
Esto genera la serie elutrpica ( Constante dielctrica)
Agrupacin por su selectividad.

MECANISMOS DE CROMATOGRAFA
ADSORCIN
Interacciones del SOLUTO o de la FM en la superficie de una
partcula SLIDA de la Fase Estacionaria.
Tipos de adsorbentes: Polares y no polares.
Adsorbentes POLARES : Superficie aceptora de electrones
(cidos) o superficie dadora de electrones . Ejem: Grupos
amino. Ciano y diol.
Adsorbentes NO POLARES : Tienen en el extremo cadenas
hidrocarbonadas, octilo, butilo octadecilo, fenilo.

PARTICIN
La cromatografa de particin est basada en la
separacin de solutos por su diferente distribucin
entre dos fases inmiscibles.
Cromatografa Liquida- lquida, la fase estacionaria est
cubierta con una sustancia polar ( Fase normal) , o una
sustancia no polar de naturaleza orgnica ( Fase
reversa).