Universidad Inca Garcilaso de la Vega

Biotecnologia

INMOVILIZACION DE
CELULAS
Q.F. Carlos Chinchay Barragn

ASPECTOS GENERALES
La inmovilizacin de enzimas es un proceso en el que se
confina o localiza a la enzima en una regin definida del
espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen
su actividad cataltica y que pueden ser reutilizadas
repetidamente

Ref. bibliografica: Wingard, L.B. (1972) Enzyme Engineering, Interscience Publishers, New York.

VENTAJAS DEL EMPLEO DE ENZIMAS INMOVILIZADAS

1. El aumento de la estabilidad de la enzima;
2. La posible reutilizacin del derivado, por lo que disminuyen los
costes del proceso.
3. La posibilidad de disear un reactor enzimtico de fcil manejo y
control, adaptado a la aplicacin de la enzima inmovilizada. Estos
sistemas pueden incluir el reciclado, lo que permite la obtencin de
productos con mayor pureza.
Hartmeier, W. (1985) Immobilized biocatalysts: from simple to complex systems. Trends Biotechnol. 3: 149153.

INCONVENIENTES DEL PROCESO DE INMOVILIZACIN

1. La alteracin de la conformacin de la enzima respecto de su estado
nativo.
2. La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde pueden
existir distintas fracciones de protenas inmovilizadas con un diferente
nmero de uniones al soporte.
3. Siempre suele haber una prdida de actividad de la enzima durante la
movilizacin.
4. El biocatalizador es ms caro que la enzima nativa.

Martinek, K.; Mozhaev, V.V. (1987) Immobilization of enzymes: an approach to fundamental studies in biochemistry.
Adv. Enzymol. 57: 179-249.

METODOS DE INMOVILIZACIN
1. Retencin fsica

2. Unin qumica

METODO DE INMOVILIZACIN DE ENZIMA

POR RETENCIN FSICA

ATRAPAMIENTO
Consiste en la retencin fsica de la enzima en las cavidades
interiores de una matriz slida porosa constituida por
polmeros del tipo poliacrilamida, colgeno, alginato,
carraginato o resinas de poliuretano.
En el primer caso (capas), la enzima queda atrapada en el
interior de un gel, mientras que en el segundo caso la
enzima se encuentra ocluida dentro de las microcavidades
de una fibra sinttica.

INCLUSION EN MEMBRANAS
Microencapsulacin: En esta tcnica, las enzimas estn rodeadas de
membranas semipermeables que permiten el paso de molculas de
sustrato y producto, pero no de enzima.
Estas membranas semipermeables pueden ser permanentes
(originadas por polimerizacin interfacial) o no permanentes
(generadas por surfactantes, tambin llamadas micelas reversas).
Reactores de membrana: Estos reactores emplean membranas
permeables al producto final, permeables o no al sustrato inicial y
obviamente impermeables a la enzima. Mediante una bomba se
establece un flujo lquido de sustrato que atraviesa el reactor.

METODO DE INMOVILIZACIN DE ENZIMA

POR UNIN QUMICA

UNION A SOPORTES
gran variedad de materiales como soportes para la inmovilizacin de numerosas
enzimas. Estos materiales difieren en tamao, densidad, porosidad y forma, aunque
generalmente nos los encontramos en forma de cilindro, hojas, fibras y ms
corrientemente en forma de esferas.
Soportes inorgnicos: pueden ser naturales (arcillas como la bentonita, piedra
pmez, slice, etc.) o materiales manufacturados (xidos de metales y vidrio de tamao
de poro controlado, vidrio no poroso, almina, cermicas, gel de slice, etc.)
Soportes Orgnicos: Se pueden clasificar en:
Polmeros naturales: a su vez divididos en: polisacridos (celulosa, almidn, dextranos,
agar-agar, agarosa, alginatos, quitina, chitosan, etc).
protenas fibrosas (colgeno, queratina, etc).
Polmeros sintticos: divididos en: Poliolefinas (como el poliestireno)
Polmeros acrlicos (poliacrilatos, poliacrilamidas, polimetacrilatos, etc.)
Otros tipos (alcohol polivinlico, poliamidas, etc).

Las enzimas se pueden unir a estos soportes mediante

adsorcin o por unin covalente
Adsorcin
mediante interacciones inicas fuerzas de Van der Waals y por puentes
de hidrgeno.
Como principales ventajas de este mtodo destacan:
su preparacin sencilla,
su bajo coste,
no hay cambios de especificidad enzimtica,
Los inconvenientes de la adsorcin son principalmente:
los derivados obtenidos son poco estables desde el punto de vista
mecnico,
la unin al soporte es dbil.

Las enzimas se pueden unir a estos soportes mediante

adsorcin o por unin covalente
Unin covalente
La metodologa de la unin covalente se basa en la activacin de
grupos qumicos del soporte para que reaccionen con nuclefilos de
las protenas
ventajas:
La manipulacin de los derivados inmovilizados es sencilla;
La carga de enzima permanece constante despus de la
inmovilizacin;
Una mayor resistencia a la desactivacin por el efecto de la
temperatura, de los disolventes orgnicos o del pH, al tener
estabilizada su estructura terciaria.

RETICULADO O ENTRECRUZAMIENTO
El mtodo del reticulado consiste en uso de reactivos bifuncionales que
originan uniones intermoleculares entre las molculas de enzima. Como
reactivos bifuncionales se pueden emplear dialdehdos, diiminosteres,
diisocianatos, sales de bisdiazonio e, incluso, diaminas si estn activadas
con carbodiimida.
El resultado del reticulado son enzimas con enlaces intermoleculares
irreversibles capaces de resistir condiciones extremas de pH y temperatura
CO RETICULADO: Un procedimiento mixto de inmovilizacin muy comn
consiste en inmovilizar la enzima por adsorcin sobre una resina de
intercambio inico o un soporte polimrico (con lo que se consigue una
elevada carga enzimtica) y posteriormente aadir el reactivo bifuncional.