UNIVERSIDAD NACIONAL DE

LOJA
AREA DE LA SALUD HUMANA
CARRERA DE MEDICINA
MODULO VIII

CATEDRA DE PATOLOGA

Docente: Dr. Manuel Pea.

Alumnos: Elizabeth Torres. Alejandro
Valle. Andrea Tenezaca. Edgar Villalta.

DIAGNSTICO MICROBIOLGICO
MTODOS DIRECTOS

M TO D O S D E
D IA G N STIC O
M IC R O B IOTiene
Lcomo
GI
CO
objetivo primordial

DIAGNOSTICO
DIRECTO

identificar al microorganismo
especfico que est causando el
dao o la patologa

1. OBSERVACIN
Podemos distinguir dosMICROSCOPICA:
tipos
diferentes de muestras
a. Se emplean para
observar la
morfologa de
bacterias,
especialmente de
espiroquetas.

biolgicas:

1.Preparaci
ones en
fresco o in
vivo.
Tambin sirve para
observar inclusiones
(grasas, etc.)

b. Sirve tambin para

observar la movilidad
de las bacterias y
para observar
cambios citolgicos;
mitosis,
esporulacin.

EJEMPLOS:

Suero
fisiolgic
o

Solucin
de KOH
(10%)

Demostrar la
presencia de
Tricomonas y
Treponemas

Identificacin
de Hongos

Tinta
china
El frotis se
hace con la
nigrosina

Sirve para observar

la cpsula de
bacterias,
indicadora de
virulencia.

para identificacin
del
CryotococcusNeofor
mans.

Son las ms
utilizadas en
Microbiologa por
dos razones:

2.Preparaci
ones fijadas
y teidas
1. La tincin
facilita la
visualizacin de la
bacteria

2. Con varios
colorantes
clasificamos la
bacteria en
distintos grupos

Tincin Simple:
con azul de metileno

Tincin de Ziehl-Neelsen

Tincin de Gram

Se observan estreptococos gram + y bacilos gram -

Tincin de Wirtz-Conklin:

MTODOS

DIRECTOS

MEDIO DE
CULTIVO

CULTIVO

CULTIVO

MTODOS

DIRECTOS

MEDIOS DE CULTIVO
Condiciones
de los Medios
Cultivos

Luz

humedad

Temperatura

PH: acidez o
alcalinidad

Presin de
Oxgeno

MTODOS

DIRECTOS

MEDIOS DE CULTIVO

Clasificacin
Clasificacin

Slidos
Slidos

Agar
Agar 15%
15%

Semislidos
Semislidos

Agar
Agar 5%
5%

Lquidos
Lquidos

No
No contienen
contienen
agar
agar

MTODOS

DIRECTOS

Agar
nutritivo

Agar chapman
Staphylococcus

Agar de
Sabourand

MEDIOS DE CULTIVO

Agar
en
Sangre

MTODOS

DIRECTOS

MEDIOS DE CULTIVO

Hemocultiv
o
Coprocultivo

Urocultiv
o

MTODOS

DIRECTOS

IDENTIFICACIN
DEL
MICROORGANISMO

MTODOS

DIRECTOS
Identificacin
del
Microorganismo

Exmen
Microscpico

Cultivo de
Bacterias

Pruebas
bioqumicas para
identificar la
bacteria

Pruebas de
sensibilidad ante
los
antimicrobianos

METODOS INDIRECTOS
Son aquellos que reconocen la respuesta
inmune (humoral o celular) que desarrolla
el husped. Se basan en la deteccin de
anticuerpos especficos mediante tcnicas
inmunolgicas. Se va a buscar la
respuesta
del
sistema
inmune
del
hospedador frente al agente infeccioso.
(EIA, IF, western blot, etc.).

PRUEBAS DE
INMUNODIAGNSTICO
Conjunto de pruebas inmunoqumicas basadas en la
reaccin antgeno-anticuerpo (Ag-Ac) aplicadas al estudio
de procesos infecciosos.
Evalan la respuesta inmune (humoral o celular) con el fin de
determinar
una
infeccin.
Con
muestras
biolgicas
(principalmente suero) para saber si un paciente est infectado
(infeccin aguda), o ha respondido inmunolgicamente a una
infeccin (infeccin pasada) o a una vacuna.

CARACTERSTCAS DE LAS PRUEBAS DE

INMUNODIADNSTICO
Sensibilidad: Capacidad de la prueba para detectar
la enfermedad.

Especificidad: Es la capacidad de la prueba para

clasificar a los individuos sanos como tales.

Valor predictivo: Puede ser positivo o negativo. El

VPP (valor predictivo positivo) indica la capacidad de
la

prueba

para

confirmar

la

presencia

de

una

enfermedad (probabilidad de padecer la enfermedad

si la prueba a resultado positiva); mientras que el
VPN

seria

(probabilidad
negativa).

la
de

capacidad
estar

sano

para

descartarla

si

prueba

la

es

ELABORACIN DE LA RESPUESTA
INMUNE
Desde que se produce el contacto con
un antgeno, la respuesta inmune
humoral tarda en desarrollarse y
detectarse de una a tres semanas.
La primera clase de inmunoglobulinas
que aparece son los anticuerpos de la
clase
M,
que
por
lo
general
desaparecen pronto.

INMUNIDAD HUMORAL

Las inmunoglobulinas de la clase G

aparecen despus y persisten mas
tiempo, en algunos casos se detectan
durante toda la vida, de ah su inters
en epidemiologa.

RESPUESTA INMUNE DEL

ORGANISMO
Video sistema inmunolgico y agente
patgeno:

Test de aglutinacin en ltex:

Las partculas de ltex son esferas de

poliestireno que se unen fcilmente
al Fc de las IgG y las IgM. Los
fragmentos de unin del anticuerpo
(FAb)
quedan
expuestos
y
son
capaces de unirse al antgeno que se
encuentra en la muestra. Cuando los
antgenos tienen varios eptopes (o
estructuras antignicas repetitivas),
los
anticuerpos
multivalentes
acoplados a mltiples partculas de
ltex se unen al antgeno y se
produce
un
entramado
de
las
partculas de ltex que dan como
resultado una aglutinacin visible.

Inmunoensayo:

Son inmunoensayos en fase slida

donde se fijan los anticuerpos
especficos para el antgeno en la
superficie de una matriz, tubo o
microplaca y luego se pone en
presencia del suero o muestra que
contiene el antgeno que se quiere
demostrar; una vez ocurre la
reaccin
antgeno-anticuerpo,
se
hace un lavado y se agrega un
anticuerpo marcado. Estas pruebas
pueden ser radioinmunoensayo (RIA)
o inmunoensayo ligado a enzimas

Fijacin del Complemento (FC):

Este mtodo emplea el complemento

para lisar eritrocitos que a su vez funcionan como indicadores. La interpretacin de la
prueba de fijacin de complemento es que la lisis es resultado negativo de la prueba y la
ausencia de lisis un resultado positivo.

HEMOAGLUTINACIN INDIRECTA:
Para realizar esta prueba se utilizan antgenos ligados a eritrocitos, para
detectar anticuerpos especficos. Los eritrocitos se pueden sensibilizar con
diversos antgenos y se pueden utilizar como sistema indicador.

Inhibicin de la
Hemoaglutinacin (IH):

Esta prueba demuestra la capacidad de

algunos
antgenos
para
aglutinar
eritrocitos. La interpretacin de la prueba
de IH se lee de la siguiente manera:
aglutinacin positiva (se forma un
recubrimiento rojo granular difuso en el
fondo del tubo) o aglutinacin negativa
(botn rojo compacto en el fondo del tubo
que se desliza al inclinarlo).

Inmunofluorescencia
Indirecta (IFI):

Es un mtodo rpido y confiable que

permite la deteccin de anticuerpos en el
suero de paciente. Se basa en la unin de
anticuerpos presentes en el suero del
paciente a los antgenos expresados en la
superficie
de
clulas
infectadas.

Inmunoensayo Ligado a Enzimas (ELISA):

La prueba ELISA indirecta tiene un principio semejante al de ELISA

directa, slo que en este caso, un antgeno especfico est unido a una
fase slida que puede ser un tubo, microplaca o perlas de vidrio; luego
se aade el suero del paciente que posee los anticuerpos y despus se
adiciona el conjugado constituido por un anti-anticuerpo IgG o IgM
unido a una enzima; posteriormente se adiciona el sustrato especfico
para la enzima, que lo va a modificar y produce un compuesto
coloreado, cuya intensidad es proporcional a la concentracin de
anticuerpo en el suero del paciente.

Western Blot:

A partir de una mezcla antignica se realiza una separacin

previa de los diferentes antgenos por electroforesis en un gel
de poliacrilamida. A continuacin se realiza el transporte, por
capilaridad o electroforesis, a un soporte generalmente de
nitrocelulosa. La bsqueda de anticuerpos frente a los diversos
antgenos transferidos se suele realizar en la membrana
soporte por una tcnica inmunoenzimtica.

QUE SON LAS

INMUNOGLOBULINAS?
Molculas
respuesta
20%
de
individuo

proteicas solubles. Responsables de

inmunolgica humoral. Constituyen un
las
protenas
plasmticas
de
un
sano.

INMUNOGLOBULINAS
Su funcin es unirse al
antgeno, actuando como
receptoras de seales
antignicas o bien colaborar
en la destruccin antignica.

La primera funcin se presenta cuando las

inmunoglobulinas se encuentran insertas
en la membrana de los linfocitos B
(inmunoglobulinas de membrana),
Para la segunda requieren la colaboracin
del complemento, macrfagos, neutrfilos
y clulas NK, que tienen la propiedad de
unir las inmunoglobulinas por su extremo
Fc.

INMUNOGLOBULINA M (IgM)

Representa del 5 al 10 % de las Ig.

sricas totales (1.5mg/mL).

Se forma mas rpidamente se en

respuesta a un estmulo antignico
(Respuesta primaria).

Tiene
capacidad
neutralizante,
precipitante,
aglutinante,
fijar
complemento, activar la respuesta
inmune,
ejerce
su
accin
normalmente
en
los
espacios
intravasculares.

No
se
encuentra
de
modo
significativo
en
el
espacio
intersticial, se encuentra confinado
a la sangre y no atraviesa la
placenta

INMUNOGLOBULINA G (IgG)

Son las inmunoglobulinas ms abundantes y

representan ms del 70 % de las sricas totales
(8 a 16 mg/mL), constituyen la principal
inmunoglobulina en sangre.

Las diferentes subclases se presentan en

proporciones muy diferentes. La IgG1 es la
subclase ms frecuente (ms del 60 %), seguida
de la IgG2 (aproximadamente un 18 %), mientras
que IgG3 e IgG4 se encuentran en mucha menor
proporcin.

Esta
Ig
posee
capacidad
neutralizante,
precipitante, de fijar complemento, de unirse a
clulas NK y a macrfagos (opsonizacin) y son
capaces de atravesar activamente las membranas
biolgicas.

INMUNOGLOBULINA A (IgA)

Concentracin: 1.4 a 4 mg/mL.

Posee capacidad neutralizante y precipitante,

mientras
que
su
capacidad
de
fijar
complemento y de opsonizacin son muy
dbiles, limitndose su efecto a neutrfilos y no
a macrfagos.

La
propiedad
ms
importante
viene
determinada por su capacidad de unirse por el
extremo Fc a la pieza secretora, gracias a la
cual puede ser secretada por las mucosas y
glndulas exocrinas, ejerciendo su accin ms
importante en la superficie de mucosas y
lquidos biolgicos (sobre todo IgA2).

Esto es importante porque as protegen

precisamente los puntos ms vulnerables del
organismo, esto es, las puertas de entrada al
mismo, como son ojos, boca, aparato digestivo,
sistema respiratorio, vagina, etc.

Esta inmunoglobulina se encuentra tambin en

la leche materna, ejerciendo un importante
papel de defensa a nivel de todo el aparato
digestivo del lactante.

INMUNOGLOBULINA D (IgD)

La concentracin de esta
inmunoglobulina en suero es
muy baja (20 ug/mL).

Vida media corta: 3 das por su

susceptibilidad a protelisis.

INMUNOGLOBULINA E (IgE)

La Ig. menos abundante en suero, 0.3 ug/mL.

Mediadora de reacciones de hipersensibilidad inmediata o alergias. El

estmulo para su sntesis puede proceder de una gran variedad de
antgenos, a los que en este caso se conocen como alrgenos.

La vida media de la IgE en sangre perifrica es de 24-48 horas.

No tiene capacidad de atravesar la placenta, por lo tanto, las reacciones

de hipersensibilidad inmediata no pueden transferirse de manera pasiva
de la madre al feto.

La IgE se encuentra en forma libre en sangre en donde se observa que los

niveles cambian a lo largo de la edad. Tambin la IgE se encuentra en
otros lquidos biolgicos as como unida a basfilos y clulas cebadas.

CONCENTRACIONES DE
INMUNOGLOBULINAS EN
SUERO

DIAGNSTICO MICROBIOLGICO
RECOLECCIN Y MANEJO DE LAS
MUESTRAS

SANGRE
- Hemocultivo es importante en la sepsis, la
bacteriemia, tromboflevitis infecciosa, los
aneurismas fngicos
Los parsitos son detectados en frotis de
sangre perifrica
La sangre debe ser recogida antes de la
antibioticoterapia

Venopuncin se prepara con:

- Alcohol etlico
- Despus clorhexidina
- Dejar secar 1 a 2 min
La tcnica para detectar todos los
microorganismo en sangre es la flevotoma

Deteccin de bacterias y hongo

Recoleccin
hemocultivo

Almacenamient
o

Medio de
cultivo. No
congelar

Almacena
r

Recoleccin
despus de la
fiebre y
catarro

Depende de
bacteriemia Numero
transitoria,
de
intermitente y muestras
continua
2a3
hemocultivos
con intervalos Hemocultivo
de 30 a 60 min s separados
o de pocos
minutos

- En adultos se
recoge 20 a 30
ml de sangre
- Recien
nacidos y
nios de 1-5ml

Contaminant
es de
muestra
Streptococcu
Streptococcu
s
s viridans
viridans

Bacillus
Bacillus

Corinebacteriu
Corinebacteriu
m
m

Propionibacteriu
Propionibacteriu
m
m

Deteccin de bacterias y hongo

Venopunci
Venopunci
n
n perifrica
perifrica

Muestra
Muestra
arterial
arterial

Tcnicas de
recoleccin de
sangre

Neutralizacin de
anticuerpos, leucocitos y
antimicrobianos

Catter
Catter
intravascular
intravascular
Diluir la sangre en un medio en proporcin 1:10

Incorporar 0.025% a 0,05% de Na

polianetalsulfonato

Mtodos que contrarrestan los antimicrobianos:

- Aadir penicilinasas (penicilinas)
- Usar resinas (adsororben antibiticos)
Centrifugacin

Deteccin de bacterias y hongo

Sistemas para
analizar cultivos
Convencional:
- Bajo costo de material
- Menor ndice de contaminacin
de muestra
- El inconveniente es el tiempo
prolongado

Medio de cultivo con agar

- Se utiliza para el cultivo de
colonias y test de sensibilidad
- Es igual que los otros sistemas
- Rentable para anaerobios

Centrifugacin
- La muestra puede retrasarse 8 hora sin efectos
adversos
- Mayor recuperacin de Staphylococcus aureus,
algunas enterobacterias y hongos (Histoplasma
capsulatum
- Disponibilidad directa de colonias para el test de
sensibilidad
- No se
puede encontrar S. pneumoniae,
Haemophylus influenzae o anaerobios
- Mayor riesgo de contaminacin

Deteccin de virus

Viremia se produce
en la incubacin o
los 2 primeros das
de los sntomas

La recoleccin de
sangre con
venopuncin o un
catter
intravascular son
adecuadas

Para separar:
- leucocitos se
recoge sangre con
anticoagulante.
- Suero se recoge
sin anticoagulante

Las muestras
deben ser llevadas
rpidamente al
laboratorio o dejar
a 4C en la noche
(excepto VIH,
llevar en 6 horas)

Deteccin de parsitos
Recoleccin
En tubos con anticoagulantes y transportadas
rpidamente al laboratorio
Si se envan despus se deben fijar con alcohol

Tcnicas para detectar

parsitos

Frotis directo
Diagnstico definitivo con tincin de las
muestras
( Giemsa)

Observacin
Primero con bajo aumento para detectar
microfilarias
Despus se examina en el lente con aceite de
inmersin

FLUIDOS CORPORALES

Lquido Cefaloraqudeo
Diagnstico

Meningiti
s
Encefaliti
s vrica

Lquido Cefalorraqudeo

Tejidos

La toma de muestra con

torundas no son
adecuadas

La histopatologa sirve
para diferenciar entre
infeccin y malignidad

Los tintes especiales son

tiles para establecer
etiologa

Las muestras deben

colocarse en un recipiente
estril de boca ancha y
remitirse a histopatologa

Ojo
Muestras
Conjuntivales
Agentes
etiolgicos
S. aureus
S. Epidermidis
H. Influenzae
S. Pneumoniae
C. Trachomatis
Adenovirus

Recoleccin de
muestra
- Se obtienen de la
parte superior e inferior
de la conjuntiva tarsal
con
una
torunda
humedecida
-Se debe inucular la
muestra en el medio de
cultivo
- Si es cultivo viral se
recogen 2 muestras

Deteccin de
Chlamydia
trachomatis
- Se tie con Giemsa y
debe
examinarse
clulas con inclusiones
intracitoplasmaticas
basoflicas

Ojo

Agentes etiolgicos
S. aureus
S. Pneumoniae
Pseudomona aeruginosa
Moraxella

Muestras
Corneales
Recoleccin de muestra
Cuando el cultivo se sospecha
negativo

- Con esptula de platino

- Se prepara extensiones en el
porta
para
teirlas
e - Se realiza una queratectoma
inocularlas en cultivos
superficial o una biopsia
crneal
Se cultiva la conjuntiva del ojo
infectado y del no infectado

Tracto respiratorio
Muestras Nasofarngeas
C. Trachomatis
Sarampion
Neumona
Difteria
Pertussis
S. aureus

Recoleccin de
muestra
Aspirados
Lavados
Frotis

Medio de
transporte
adecuado

Agentes
etiolgicos

Recoleccin de la
muestra con una
torunda con la punta de
polister
Tincin con cuerpos
fluorescentes o con
ELISA

C.
Trachomatis

Infusin de ternera con

0,5 % de gelatina
Solucin salina de Hank
Caldo sucrosa-fosfato

Bordetella
pertussis
Recoge con lavados o
frotis
Cultivo de Agar Regan
Lowe o Agar BordetGengou

Recoleccin de muestra
con una torunda de
polister
Cultivo con agar con el
5% de sangre de oveja
o agar sal de manitol

S. aureus

Tracto respiratorio
Muestras de Garganta
Con frotis con
torunda y se
colocar en un
cultivo para virus
o bacterias
respectivamente

Recoleccin de muestras

Agente etiolgico

Streptococcus de
grupo A
Herpes simple
CMV
Enterovirus
H. Influenzae tipo
B
S. Aureus y S.
pneumoniae
M. Pneumoniae
Angina de Vincent

Esputo y aspirado
traqueal
Recoleccin
Primera hora de la maana
Recoger 5 a 10 ml de muestra con tos profunda o inducir
con aerosoles
Aspirado traqueal

Transporte
Muestras deben someterse a screening
Se tie con Gram

Observacin
Con bajo aumento primero
No se pide screening con M. pneumonia, Lgionella y
micobacterias

LAVAD O BRO N CO ALVEO LAR

til para detectar
patgenos
oportunistas en
pacientes con
neumona e
inmunocomprometido
s
Para recoger el fluido
se introduce la punta
del broncoscopio en
la luz de la va area

Para detectar virus

incluye un examen
microscpico directo
y un cultivo celular

Tincin de Papanicolau para detectar

cambios citopaticos por CMV y tincin
con Gram
La presencia de mas de 10.000
colonias/ml corresponde con la
enfermedad

TRACTO U RIN ARIO

METODOS PARA LA
RECOLECCION DE ORINA

1. Recogida
de la mitad
de la miccin

2. Sondaje

3. Aspiracin
suprapubica

Al principio, un
crecimiento 10 o
mas CFU de
bacterias hera
indicativo de
infeccin.

Infecciones
reales con
menos de
10 CFU
pueden
producirse
en:

Bebes y nios; en
hombres y personas
con sonda , que se han
tratado con antibiticos

Ahora mujeres
jvenes con
vida sexual
activa y
sintomatologa
uretral aguda

CULTIV
O DE
ORINA

Comprobar las
muestras de
orina con tincin
de Gram es
rpido y
econmico

10 CFU/ml se
considera
significativo en
presencia de
piuria
En hombres
con
sintomatologa,
un crecimiento
de 10 CFU/ml
o mas se
considera
infeccin

TRACTO G EN ITAL
1.til pra
detectar
detectar
agente
etiologico de la
vulvovaginitis y
vaginosis

4. Tambin son
tiles para el Dx
el pH vaginal y
el test del olfato

SECRECION
ES
VAGINALES

2.En mujeres
pospuberales
los patgenos
mas comunes

3. Una
preparacin en
fresco es el test
mas adecuado
para el
diagnostico

Garderella vaginalis
Candida
Trichomonas vaginalis

MUESTRAS
ENDOCERVICALE
S

1. Se obtienen
con la ayuda
de un
especulo

Determinar
agente
etiolgico
de la
cervicitis

2. Se recogen
con una
torunda o un
cepillo
endocervical

Identificar
personas
asintomticas
con un
organismo que
causa
enfermedad de
transmisin
sexual

3. El manejo
de las
muestras varia
en funcin del
microorganism
o

N. gonorrhoeae
Chlamydia
trachomatis
VHS

EXUDADO
URETRAL

Para diagnostico de
enfermedades de
transmisin sexual

Se recogen por lo
menos 2 horas
despus de la
miccin

Las condiciones en
funcin del tipo de
torunda y
transporte son las
mismas para
muestras
endocervicales

N. gonorrhoeae
Chlamydia
trachomatis

LESIONES VESICULARES
EN LOS GENITALES

Para
confirma
r
infeccin
por VHS

Se
realiza
cultivo
del
liquido
vesicular

El VHS
tambin se
puede
detectar con
tincin
directa

MATERIAL DE ULCERAS
GENITALES
Para identificar:
VHS,
Haemophilus
ducreyi,
Treponema
pallidum,
Chlamydia
trachomatis

Se realiza
cultivo del
liquido
vesicular

El VHS tambin
se puede
detectar con
tincin directa

1. til
para
determi
nar el
agente
Cultivo bacteriano
etiolgi
y deteccin de
co de la
toxinas en las
diarrea
heces
infeccio
sa o
intoxica
cin
aliment
aria
Se recomienda cultivo
celular, test de ELISA y
examen directo en el
microscopio

H ECES
LA RECOLECCION, EL
TRANSPORTE Y EL
ANALISIS SON
DIFERENTES PARA
CADA GRUPO.

2.Diag
nostico
de
botulis
mo
3.
Infecci
ones
causad
as por
adeno
virus,
entero
virus

4.Patog
enos de
transmi
sin
sexual

5.
Protoz
oos
intesti
nales y
helmin
tos

El anlisis incluye
preparar una solucin
salina y de yodo y
teir las muestras
frescas
Observacin
microscpica

PIEL Y LESIO N ES
SU BCU TN EAS
1.El liquido
puede extraerse
con una aguja
y una jeringa o
con una torunda

4.Para detectar
bacterias tincin
con Gram y para
hongos tinte de
plata, calcofluor
blanco o rojo

VEJIGAS,
BULAS Y
PUSTUL
AS

3. El anlisis de
muestras de
vejigas o
pstulas para
detectar virus
incluye un cultivo
celular

El anlisis sirve
para detectar
virus, bacterias y
hongos.

2.Se preparan
las extensiones
y luego se tien

Para virus varicela zoster y posible

VHS ayuda el examen de
extensiones teidas

Causadas por virus,

Bacillus anthracis,
corinebterim diphteriae,
micobacterias u hongos.

Pueden
ser
primaria
s

O de
cbito

ULCERA
S
CUTANE
AS
2.El
manejo
de las
muestr
as para
hongos
y
bacteria
s es
diferent
e

Pueden ser colonizadas por

bacterias aerbicas y
anaerbicas
1.La
recogida,
el
anlisis y
el
trasporte
de los
exudado
s para
virus son
los
mismos
para
vejigas y
pstulas

GRACIAS
BIBLIOGRAFIA

El laboratorio en el diagnostico clinico. Tood-Sanford. Tomo II.

Marbn libros, S.L. madrid- Espaa