Universidad tcnica del norte

Facultad de ingeniera en ciencias agropecuarias y ambientales

Ingeniera agroindustrial
Microbiologa general
Integrantes: Antamba Lenin
Maldonado Antonio
Quintero Diana
Sandoval Paola
Nivel: Tercero A
Tema: Pruebas Bioqumicas para Identificar Enterobacterias

Identificacin de microorganismos
Se entiende por identificacin de microorganismos, al conjunto de tcnicas y
procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un microorganismo.
Se las clasifica en:
1.

Mtodos basados en pruebas bioqumicas

2.

Mtodos basados en criterios morfolgicos

3.

Mtodos basados en tincin diferencial

4.

Mtodos basados en tipificacin con fagos

5.

Mtodos basados en pruebas serolgicas

6.

Mtodos basados en deteccin molecular

Pruebas bioqumicas Que son ?

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Tipo de pruebas bioqumicas

TIPOS DE PRUEBAS BIOQUIMICAS

CATALASA

EOSINA AZUL DE METILENO

OXIDASA

HECTO-ENTERICO

UREASA

LISINA-HIERRO

DESCARBOXILASA

MALONATO

ROJO DE METILO

NITRITOS

SIM

http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm

CATALASA

El perxido de hidrgeno es el producto final del

metabolismo de los carbohidratos.

Las bacterias producen una enzima llamada

catalasa es una enzima que descompone el
perxido.
Obteniendo as agua y gas.

Reactivo: Perxido de Hidrgeno al 30%

Resultados

Control positivo: Staphylococcus auereus.

Control negativo: Streptococcus pyogenes

OXIDASA

Cultivo de medio nutritivo

Sustrato: Compuesto reducido.

Enzima: Oxidasa.

Producto: Compuesto oxidado.

Se basa en la identificacin de una enzima bacteriana

( citocromoC oxidasa). Esta reaccin se debe a un sistema de
citocromo oxidasa que activa la oxidacin del citocromo
reducido por el oxgeno molecular. La prueba positiva se
observa por la oxidacin del reactivo incoloro en pocos
segundos formndose un producto colorido.

UREASA

Sustrato principal: Urea.

Sostenido de nutrientes: Baja y alto Buffer

Medios de cultivo: Los dos medios utilizados con mayor

frecuencia son el caldo urea de Stuart y el agar urea de
Christensen.

Indicador: rojo de fenol

Los microorganismos que poseen la enzima Ureasa tienen la

capacidad de hidrolizar la urea contenida en el medio con
produccin de amoniaco, para esta prueba se utiliza el caldo
urea de stuart o agar urea de christensen. En donde los
microorganismos debern superar el sistema estabilizador de ph
(8), para poder ver resultados.

Principio

Es una diamida del acido carbnico

Todas las amidas se hidrolizan fcilmente, con

liberacin de amoniaco y dixido de carbono.

El amoniaco reacciona en solucin para formar

carbonato de amonio, lo que produce
alcalinizacin y aumento de pH del medio.

Resultados

Los microorganismos que hidrolizan la urea rpidamente pueden producir reacciones

positivas en l o 2 horas; las especies menos activas pueden requerir 3 das o mas.

DEACARBOXILASAS

Medio base de descarboxilasas u otros medios como LIA o

MIO.

Sustrato: Aminocidos (lisina, ornitina o arginina).

Enzimas: Descarboxilasas.

Producto: Amonaco.

Indicador: Prpura de bromocresol.

Los aminacidos al perder el grupo carboxilo se convierten en

diaminas lo que incrementa el pH del medio y el indicador
(prpura del bromocresol) vira a violeta.

NITRITOS
Esta prueba sirve para determinar la capacidad de los
microorganismos para reducir nitratos a nitritos y a nitrgeno
gaseoso, se da en condiciones anaerobias.
Se debe inocular el medio de nitrato, tomando una parte de la
colonia del microorganismo que est cultivado.
Se incuba durante 24 horas a la temperatura de 37C
Los reactivos que se aaden son soluciones en cido actico de
alfanaftilamina y cido sulfanlico
Resultados
Cuando toma una coloracin roja indica la presencia de nitratos.
Cuando hay ausencia de color indica que el nitrato se redujo a otros
compuestos.
Para confirmar los resultados negativos se aade una gota de zinc.

ACTIVIDAD CITOCROMO-OXIDASA

Los citocromos son Hemoproteinas que contienen hierro y actan como el ultimo
eslabn de la cadena respiratoria aerobia, transfiriendo electrones (Hidrogeno) al
oxigeno, con formacin de agua. El sistema citocromo se encuentra en los
organismos aerobios o anaerobios facultativos, de modo que la prueba de
Oxidasa es importante para identificar aquellos organismos que carecen de esta
enzima (anaerobios obligados). La prueba es muy til para diferencia
Enterobacterias (Todas Oxidasa negativas) de otras especies como Pseudomona o
Neisserias oxidasa positiva.

EOSINA AZUL DE METILENO EMB

Es una agar selectivo para el aislamiento de Enterobacterias patgenas. Los

colorantes de anilina (Eosina y azul de metileno) inhiben las bacterias Gram
positivas y las Gram negativas exigentes nutricionalmente. Tambin se combinan
precipitndose a pH acido actuando como indicadores de produccin de cidos
de los carbohidratos presentes en el medio (Lactosa y Sacarosa

HECTO-ENTERICO HE

es un medio de cultivo selectivo para la identificacin de bacterias intestinales

patgenas.
La alta concentracin de sales biliares inhibe el desarrollo de las bacterias Gram
positivas. La Fucsina acida junto con el azul de Bromotimol reaccionan virando a
amarillo al bajar le pH del medio por la accin de los cidos producidos a partir de
la fermentacin de los 3 hidratos de carbono (Lactosa, Sacarosa, Salicina) que
contiene el medio. La combinacin de tiosulfato y una sal de hierro dan una
coloracin negra a las colonias H2S positivas

LIA . LISINA-HIERRO

Es un medio que sirve para demostrar la produccin de dos enzimas:

la lisina descarboxilasa
la lisina desaminasa,
adems la presencia de sales de hierro sirve para detectar la produccin de H2S por
algunos microorganismos.

La descarboxilacion de la lisina ocurre en ambiente anaerbico y se pone de

manifiesto por la alcalinizacin del medio.

La presencia de glucosa en los componentes del LIA determina primero una reaccin
de fermentacin, produciendo acidificacin y cambio de color del medio a amarillo y
el pH favorable para la reaccin de descarboxilacion que ocurre despus, volviendo a
su color violeta original la parte del fondo del tubo.

La desaminacion de la lisina que se puede producir por los gneros Proteus tiene lugar
en la parte superior del tubo produciendo acido a cetocarbonico que al combinarse
con la sal de hierro y en presencia de oxigeno forma un color violeta rojizo.

La produccin de H2S se evidencia por la presencia de un precipitado negro por

utilizacin de las sales de hierro

MALONATO

El malonato de sodio, es una sal orgnica que es utilizada por las bacterias como
nica fuente de carbono con formaron de productos alcalinos que se evidencia
por un viraje de verde a azul del indicador del medio, azul de Bromotimol.

Si un microorganismo es capaz de utilizar el malonato de sodio como nica

fuente de carbono, al mismo tiempo que utilizar el sulfato de amonio como
fuente de nitrgeno, se produce un aumento de la alcalinidad que se debe a la
formacin de Hidrxido de sodio (NaOH)

Rojo de Metilo

Indicador de pH.

entre pH 4,2 (R) y 6,3 (A).

Formacin de cidos que se producen durante la

fermentacin de un carbohidrato.

Una reaccin positiva indica que el microorganismo

realiza una fermentacin acido lctica de la glucosa
por la va cido-mixta.

Agar triple azcar y hierro (TSI)

Color: rojo ladrillo
Inhibidores: no tiene
Indicador: rojo fenol
Sustratos Principales:
Lactosa, sacarosa y glucosa

Agar triple azcar y hierro (TSI)

Carbohidratos: cido
Lactosa
Sacarosa
Glucosa
Gas
Sulfuro de hidrogeno

 Superficie inclinada:
fermentacin de
lactosa o sacarosa
amarillo
Indicador: Rojo de
fenol

Profundidad:

Fermentacin de
glucosa
amarillo
Gas burbujas o
fragmentacin del
medio

Sulfuro de
hidrgeno

SIM

Color: crema
Indicador: no tiene
Inhibidor: no tiene
Sustrato principal: peptona
Sustrato secundario: tiosulfato
sodico, hierro y amanio

SIM
cido sulfhidrico
Positivo: negro
Negativo: del color del
medio

 Indol
Positivo: anillo rojo (Reactivo de
Kovacs)
Negativo: anillo amarillo

 Movilidad
Positiva medio opaco
Negativa crecimiento en la linea del
inoculo

CITRATO

Color: verde
Inhibidor: no tiene
Indicador: azul de bromocresol
Sustrato principal: citrato de
sodio

CITRATO
Citrato de sodio
Indicador: azul de bromotimo

Positiva: azul
Negativo: verde

Procedimiento

Rotular tubos

TSI
SIM
Citrato

Mtodos de siembra
TSI: 1 picadura + superficie
SIM: 1 picadura en el centro
Citrato: superficie, picadura

E. Coli

Shigella

Salmonella

E.M.B. Agar.
Utilizado

para el aislamiento selectivo de

bacilos Gram negativos.
Rpido desarrollo.
Escasas exigencias nutricionales.
Permite el desarrollo de todas las especies
de la familia Enterobacteriaceae.

Resultados
Microorganismos

Tipo de Colonia

Escherichia coli ATCC 25922

Verdosas con brillo metlico y centro

negro azulado

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Mucosas, rosa prpura, confluentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Incoloras, pequeas, puntiformes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Incoloras

BIBLIOGRAFIA

MacFaddin, J. (2003). Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de

importancia clnica.

Recuperado de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U3c_PruebasBioquimicas_17461.P
DF

Recuperado de: http://es.slideshare.net/SusanaGG/pruebas-bioqumicas

Recuperado de:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_
Tema_12_identificaci%C3%B3n.pdf