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Universidad Nacional Del Santa

Facultad de Ciencias
E.A.P: BIOTECNOLOGIA
Curso: Anlisis instrumental

Cromatograf
a
INTEGRANTES:

Abad Ruiz Berenice


Colan Romero Kimberly
Dvila Escudero Yeik
Quezada Miranda Carolina
Urcia Esteves Joselyn
Zuleta Cortez Brigdtte

Que es la Cromatografa?
Es un conjunto de
Tcnicas basadas en el
principio de retencin
selectiva, cuyo objetivo
es separar los distintos
componentes de una
mezcla, permitiendo
identificar y determinar
las cantidades de dichos
componentes

Que es la Cromatografa?
Fase
Mvil

Fase
Estacion
aria

Consiste en un liquido o gas


que es arrastrado a travs
de la fase estacionaria

Consiste en un solido o un
liquido fijado a un solido por
donde el cual pasa la fase mvil

Tipos de Cromatografa

En
Columna

Plana

En papel

En capa fina

Intercambi
o Inico

Por Afinidad

Por Exclusin
Molecular

Tipos de Cromatografa: Cromatografa


Plana
Anlisis cualitativos

En
Papel

La fase estacionaria
se representa por
un papel de filtro y
la mvil por un
disolvente.

Aplicaciones de la cromatografa en papel

Tiene como
celulosa.

soporte

un

papel

de

Es una tcnica sencilla y presenta la


ventaja de poder utilizar cantidades
pequeas de muestra (miligramos y
microgramos).

separacin de clorofilas
mediante cromatografa
en papel

su aplicacin es sencilla, sirve para


identificar mezclas de sustancias en
tintas y cosas por el estilo.

Tipos de Cromatografa: Cromatografa


Plana
Separar Componentes Puros

En Capa
Fina
Una
fase
mvil
(normalmente,
undisolvente) y a una
fase estacionaria (la
llamada capa fina, que
puede serpapel ogel
deslice)

Aplicaciones de
cromatografa en capa fina
Es una tcnica cualitativa que se utiliza para los
siguientes fines:
Monitorizacin de una reaccin, poniendo un
punto en el cromatograma cada cierto tiempo.
Identificacin de un compuesto, comparando el
Rf del compuesto a investigar con el del
compuesto conocido.
Comprobacin de la pureza del compuesto,
comprando la muestra con el producto puro.
Eleccin del disolvente
cromatografa preparativa.

adecuado

Anlisis de fracciones recogidas


cromatografa en columna.

en

para

una

Tipos de Cromatografa: Cromatografa


en Columna
Depsi
to
Protena
Simple
(Fase
Mvil)
Matriz
porosa
slida
(Fase
Estacionari
a)

Soport
e
Poroso
Efluido

Tipos de Cromatografa: Cromatografa en Columna

Cromatogr
afa de
Exclusin
Molecular

La
cromatografa
de
filtracin molecular es un
mtodo de cromatografa
en columna por el cual las
molculas se separan en
solucin segn su peso
molecular.

Separa protenas segn su


tamao.
La fase slida consiste en
pequeas
perlas
que
contienen unos poros o
cavidades
de
tamao
calibrado.
Las protenas de mayor
tamao no pueden entrar en
las cavidades.
Las
protenas
mas
pequeas penetran en las
cavidades.

Tipos de Cromatografa: Cromatografa


en Columna
A)
Cambios
de
buffers.
Despus
de
cromatografas de intercambio inico, afinidad
o de interaccin hidrofbica.
B)
Desalado.
Protenas,
polisacridos,
polipptidos etc. Pueden ser
desalados antes de ser concentrados o
liofilizados.
C) Eliminacin de fenol de las preparaciones de
cidos nuclicos.
D) Para reacciones entre macromolculas y
reactivos de bajo peso
molecular.
E) Eliminacin de productos,
inhibidores, etc. De las enzimas.

cofactores,

F) Purificacin de macromolculas.
G) Determinacin del peso molecular de las
protenas.

APLICACIONES de la
cromatografa de
exclusin molecular

Tipos de Cromatografa: Cromatografa en Columna


Partculas ms
pequeas
Partculas ms
grandes

Espacio
interno entre
partculas
Fibras de la
matriz
polimrica
Volumen de
intersticio entre
partculas

Representacin de un lecho comatogrfico formado por micropartculas


porosas como las empleadas en cromatografa de exclusin molecular.

Tipos de Cromatografa: Cromatografa en Columna

Cromatograf
a de
Intercambio
Inico

El intercambio inico es un proceso


por el cual los iones retenidos en un
slido, esencialmente insoluble, se
intercambian con los iones de una
solucin que se pone en contacto
con el slido.
Se
basa
en
la
interaccin
electrosttica
entre
los
grupos
cargados del soluto y los grupos
cargados del adsorbente.

MEDICIN DE LA HEMOGLOBINA GLICOSILADA.

APLICACIONES de la
cromatografa de
intercambio inico

DETERMINACIN DE PBG Y ALA EN ORINA

EXTRACCIN Y PURIFICACIN DE CIDOSNUCLEICOS


PURIFICACIN DE AGUA
PURIFICACIN DEL FIBRINGENO DE LA LECHE
DETERMINACIN
DE
ANTICONVULSANTES
EN
SUERODESPUS DE LA EXTRACCIN DE LA FASE SLIDA.

EL

ANLISIS DE ANTIBITICOS DE POLITER


DETERMINACIN DE PESTICIDAS.
IDENTIFICACIN DE CIDOS ORGNICOS EN LA FRUTA Y EN
EL JUGO.
DETECCIN DE DERIVACIN-FLUORESCENCIA POST-COLUMNA
PARA
ANLISIS
PARA
VARIOS
TIPOS
DEPESTICIDAS
AGRCOLAS .
DETERMINACIN DE
ELSUERO UMBILICAL

METABOLITOS

DE

TRIPTOFAN

EN

Tipos de Cromatografa: Cromatografa en Columna

Partculas polimricas con


grupos funcionales
cargados negativamente

En el caso de los
intercambiadores
catinicos, las
protenas con carga
neta negativa se
desplazan ms
rpido y eluyen
antes.

Se aade la mezcla de protenas


a la columna que contiene
intercambiadores de cationes
Las protenas se desplazan a travs de la columna a
velocidades determinadas por su carga neta al pH que se
esta utilizando.

Tipos de Cromatografa: Cromatografa en Columna

La cromatografa de
afinidad
permite la
separacin
de
mezclas proteicas por
su
afinidad
o
capacidad de unin a
un
determinado
ligando

Cromatogra
fa por
Afinidad

LECTINAS

INHIBIDORES
ENZIMATICOS

COFACTORES

ANTICUERPOS

LIGANDO DE AFINIDAD

Tipos de Cromatografa: Cromatografa en Columna

Mezcla de
protenas

Protena
de Inters

Polmero
con
Ligando

Tipos de Cromatografa: Cromatografa en Columna

Caracterst
icas de la
Cromatogr
afa de
Afinidad

CAMPO DE APLICACIN
RESTRINGIDO
SEPARACIN DE UN SOLUTO
ANALTICO ( PROTENA)

ALTA SELECTIVIDAD EN EL MECANISMO DE


RETENCIN

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