Bioprocesos

Biotecnologa

Biotecnolo
ga

La biotecnologa se refiere a toda

aplicacin tecnolgica que utilice
sistemas biolgicos y organismos vivos
o sus derivados
para la creacin
o modificacin de productos o procesos
para usos especficos

Convention

on Biological Diversity, Article 2.

Use of Terms, United Nations. 1992).

Biotecnologa

Es un rea multidisciplinaria
Emplea la biologa, qumica y procesos
Uso en agricultura, farmacia, ciencia
de los alimentos, ciencias
ambientales, ingeniera, ciencias
forestales, veterinaria y medicina.
Probablemente el primero en usar este
trmino ingeniero hngaro Karl
Ereky, en 1919.

Biotecnologa
Productos
Farmacuticos: insulina, antibiticos,
hormonas
Desarrollo de reactivos de diagnstico
Control biolgico de plantas
Procesos yogurt, cervezas, vinos, vacunas
Servicios biorremediacin

tratamiento de efluentes
Uso de microorganismos naturales (levaduras,
hongos o bacterias), existentes en el medio para
descomponer o degradar sustancias peligrosas en
sustancias de carcter menos txico o bien
inocuas para medio ambiente y salud humana.

Introduccin a los Bioprocesos

El pueblo egipcio 6000 aC

Fabricacin de la cerveza y
el pan (levadura)

Sumerios y babilonios - 6000 aC

Produccin de alcohol por
fermentacin de los granos de
cereales.

1876, demostr que la causa de la accin

de estas fermentaciones fueron los seres
diminutos, microorganismos.

Louis Pasteur

Pasteur se comprob, adems, que cada

tipo de fermentacin se llev a cabo por un
microorganismo especfico que podran
vivir y reproducirse en ausencia de aire.

Pastuer, Robert Koch y Fleming (1920)

descubrimiento de los antibiticos

1953
1973

Bioprocesos y
biotranformaciones
Bioprocesos
Son los procesos mediante los cuales determinados
SUSTRATOS (nutrientes) son transformados por accin
biolgica (biocatalizadores como microorganismos,
clulas, tejidos) en BIOMASA y PRODUCTOS
DIVERSOS
biocatalizador

Glucosa + amonio + sales + oxgeno

Molculas sencillas
Fuentes de carbono y
energa, fuente de
Nitrgeno y sales

BIOMASA + PRODUCTOS + calor

Molculas complejas
Antibiticos, drogas, vacunas,
efluente tratado, vitaminas, cidos
orgnicos, aminocidos,
protenas, hormonas,

BIOTRANSFORMACIN
Procesos ms sencillos en los que
sustratos naturales o sintticos son
MODIFICADOS por medio de una
actividad enzimtica

Enzimas,
esporas,
clulas
Sustrato + agua

Sustrato modificado

PROCESO BIOTECNOLGICO
Es una SECUENCIA de OPERACIONES o etapas
que resulta en la obtencin de un producto

PRODUCTO

Antibiticos, drogas, vacunas, efluente tratado, vitaminas, cidos

orgnicos, aminocidos, protenas, hormonas,
ELEMENTO DISTINTIVO DEL BIOPROCESO

Uso

Catalizador biolgico
Enzima,
Biorreactor
microorganismos,
La reaccin ocurre en
clulas vegetales,
forma controlada
clulas animales,
esporas de hongos
Biorreactor
artificial

Biorreactor natural
Animales transgnicos

Catalizadores biolgicos

Clulas
vegetales

bacterias

Clulas animales
Virus
Levaduras

Biorreactor

Biocatlisis vs Catlisis qumica

Ventajas Biocatalizadores

Desventajas

Alta especificidad

Alta complejidad molecular

Elevada actividad en
condiciones moderadas de
reaccin

Elevado costo de
produccin

Nmero de recambio elevado

Labilidad intrnseca

Biodegradables

Solvente acuoso

Son de origen natural

Ejemplo

Interesterificacin

Proceso por el cual se modifican grasas y aceites por el

intercambio de AG. Cambiando sus caractersticas fsicoquimicas

Puede ser catalizado tanto por catalizador

qumico como por biocatalizadores.

Catalizador qumico: CHONa.

Biocatalizador: lipasas.

-Medio anhidro.
-Altas T: 200C.
- Intercambio de AG al azar.
-Es mas barato.
-Confiere un color oscuro
indeseable.
-Subproductos indeseables.

- No requiere que el medio

sea anhidro.
-T Moderadas: 70C.
- Especficas y selectivas.
-No requiere blanqueo.
- No produce subproductos
indeseables.

Operaciones de un
proceso biotecnolgico

Operaciones previas (preparacin del

medio y del microrganismo elegido,
esterilizacin )
Upstream Process

Proceso biotecnologico (biocatalizador)

Produccion en biorreactor

Operaciones posteriores (Recuperacin del

producto: separacin, ruptura, purificacin,
acondicionamiento final)
Downstream Process

Upstream Process

Produccion

en bioreactor

Downstream Process

Productos Biotecnolgicos
Tradicionales: cidos, alcoholes, Antibiticos, vacunas, enzimas,
aminocidos
Modernos: Hormonas, factores de crecimmiento, vacunas acelulares,
Antibiticos de ltima generacin

Procesos tecnolgicos

Productos tecnolgicos

Producto de segunda generacin

SELECCIN DE UN PROCESO BIOTECNOLGICO

ASPECTOS QUE INTERVIEN
EN LA SELECCIN DE UN PROCESO
A) ECONMICO
Relacionados con el mercado y especificaciones del
producto
Evaluar el potencial econmico del producto

B) TCNICO
Relacionados con el diseo del proceso
Desarrollar y evaluar varios esquemas de
operacin
para obtener el Diseo ptimo

DESARROLLAR UN DISEO COMPLETO DEL

BIOPROCESO

Secuencia de operaciones de
separacin
El equipamiento requerido

Una vez definido

El producto
La pureza deseada
La concentracin
deseada
A) ASPECTOS
ECONOMICOS

B) ASPECTOS TCNICOS
i) y ii) Definir las operaciones y secuencia de
separacin
Iii) Etapas o tiempo por operacin
iv) Escala
v) Costo

PRODUCTO

DEFINIR EL PROCESO

Cules son las OPERACIONES alternativas?

Depender del TIPO de producto y la ESCALA de

produccin

Operacin y Secuencia ms
frecuente

1.-

2.-

3.-

5.-

1.- Remocin celular:

Centrifugacin
Filtracin
2.- DISRUPCIN CELULAR Y
SEPARACIN DE RESTOS CELULARES

La tcnica ms recomendada para

alta escala son los homogeinizadores
(Gaulin homogenizer)

2. DISRUPCIN CELULAR
Homogeinizacin:
- suspensiones celulares 15-20% (peso seco)
- concentracin celular no afecta la eficiencia
- es necesario refrigerar (4-5C)
- Modelos ms grandes 6,000 L/h (levaduras y bacterias)
Molinos de perlas
- pequeas perlas de vidrio (0.3-0.4mm )
- diferentes diseos de agitadores
- concentracin de clulas afecta la eficiencia
- concentracin ptima 30-60% peso hmedo
- modelos mas grandes 2000 L/h
Disrupcin qumica o enzimtica
limitado a baja escala (Lysozyme, Triton, otras)

2.- SEPARACIN DE RESTOS

CELULARES

centrifugacin (no adecuada)

ultrafiltracin (300,000 500,000 o mayor)
Microfiltracin (0.1 m.)
particin en dos fases acuosas
(clulas rotas y restos quedan en fase inferior)

CDR (cell Debris Remover: Whatman)

3.- Concentracin:
Los productos deben concentrarse hasta
10-50 veces.
Tcnica preferida : Ultrafiltracin
Particin lquido-lquido: Extraccin con
solventes
Precipitacin (sulfato de NH4)
Evaporacin
Destilacin

4.- PRETRATAMIETNO
O EXTRACCIN DEL PRODUCTO :
Adsorcin
Intercambio inico
Cromoatografa
de intercambio
hidrofbico

5.- PURIFICACIN DE ALTA

RESOLUCIN

Cromatografa de interaccin
hidrofbica (HIC)
Cromatografa de intercambio inico
de alta resolucin
Cromatografa de afinidad
Cromatografa metal quelante (IMAC)
Otras cromatografas: dye-ligand
chromatography(triazine-colorante)

6. ACABADO del producto

Esterilizacin
Estabilizacin del producto
deshidratacin, liofilizado,
estabilizacin (sales)

PROCESO DE SNTESIS Y
OPTIMIZACIN

Definir las operaciones y secuencia de separacin

Objetivo de este paso es explotar al mximo las
propiedades fisicoqumicas que diferencian al
producto deseado del resto de los productos
contaminantes de la manera ms econmica
i) Elegir entre OPERACIONES alternativas
ii) Diseo de una SECUENCIA PTIMA para obtener
mximo rendimiento con el menor nmero de
pasos
-Existen muchas alternativas y en diferente orden
(es un problema de combinatoria)

PROCESO DE SNTESIS Y
OPTIMIZACIN
Cmo elegimos las
operaciones y
secuencias?
1. Solucin rigurosa o solucin algortmica
Resuelve qu operaciones son apropiadas
pero NO SECUENCIA
2. Utilizacin de las reglas de oro de la
purificacin - Mtodo Heurstico.
Resuelve las OPERACIONES y la SECUENCIA

PROCESO DE SNTESIS Y
OPTIMIZACIN
Cmo elegimos las
operaciones y
secuencias?

3. Uso de TECNICAS DE INTELIGENCIA

ARTIFICIAL: SISTEMAS EXPERTOS (SE)

Utilizan el conocimiento emprico

Escanean toda la informacin acerca de las
propiedades de la muestra y las operaciones
Tiene en cuenta las reglas de oro de la purificacin
utilizan correlaciones matemticas y bases de datos

Encuentran una solucin ptima al problema del

proceso de purificacin y la secuencia

1.- Solucin rigurosa o solucin algortmi

Utilizacin de mtodos numricos
clsicos, ecuaciones de diseo.
Permite elegir entre operaciones
alternativas.
Emplea tcnicas de programacin
matemtica.
Crean un diagrama de flujo que
contiene todas las posibles
alternativas de diseo

2.Utilizacin de las reglas de oro de

la purificacin Mtodo Heurstico
Resuelve OPERECIONES Y SECUENCIAS
Emplea reglas desarrolladas a travs

Diseos previos y experiencia exitosas de otros

procesos
Antecedentes del mismo proceso
Sentido comn

2. Utilizacin de las reglas de oro

de la purificacin
REGLA 1
Los procesos de separacin sucesivos elegidos
deben estar basados en diferentes propiedades
fsicas, qumicas o bioqumicas
REGLA 2
Separar las impurezas ms abundantes primero
Es importante eliminar el agua en las primeras etapas del
proceso. Tratar de reducir el material de trabajo hasta un 90%
del volumen inicial

2. Utilizacin de las reglas de oro de la

purificacin
REGLA 3
Seleccionar un procesos que permita aprovechar
al mximo las diferencia entre las propiedades
fisicoqumicas del producto y los contaminantes.
- Se deben conocer las propiedades del producto
y de las principales impurezas
REGLA 4
Realizar las separaciones ms caras y difciles al
final
KEEP IT SIMPLE!

Ejemplo REGLA 1
REGLA 1
Elegir procesos de separacin basados en diferentes
propiedades fsicas, qumicas o bioqumicas
En el caso que el producto sea una protenas
en los proceso de separacin y purificacin debemos tener
en cuenta

Propiedades fsico qumicas de la protena

Punto isoelctrico
Carga, curva de valoracin
Tamao, PM
Especificidad por ligandos
Propiedades de superficie (hidrofobicidad)
Estabilidad

Operaciones de Separacin y Purificacin de protenas en gran escala

Mtodos de Recuperacin y purificacin y las correspondientes propiedades
fsicoqumicas involucradas en la operacin [*]
Operation

Physico-chemical property

Centrifugation

Sedimentation Velocity

Filtration

Particle size

Microfiltration
Homogeneization

Particle size
Intracellular nature (pressure gradient)

Bead milling
Ultrafiltration

Intracellular nature (liquid/solid shear)

Molecular size

Two phase extraction

Precipitation

Partition coefficient
Solubility (hydrophobic interaction)

Adsorption
Ion-exchange
Hydrophobic interaction

Van der Waals forces, H bonds, polarities,

dipole moments
Charge (titration curve)
Surface hydrophobicity

Affinity chromatography

Biological affinity

Gel filtration

Molecular size

Reversed phase liquid chromatography

Hydrophilic and hydrophobic interactions

[*] Prokopakis and Asenjo (1990)

SINTESIS DE UN PROCESO DE BIOSEPARACIN

aproximacin Heurstica (reglas de oro)
Intracelula
remocin del
r
1. SEPARACIN CELULAR
componente
ms abundante
2. DISRUPCIN CELULAR

PASOS

1. Desarrollar un
diagrama de
bloques con las
principales
operaciones o
etapas
2. Seleccionar para
cada etapa las
operaciones
alternativas

REMOCIN DE RESTOS
CELULARES Y DESECHOS

Extracelular
3. CONCENTRACIN

4. PRETRATAMIENTO

REGLAS
5. PURIFICACIN DE ALTA
RESOLUCIN
6 ACABADO

3. Uso de TECNICAS DE
INTELIGENCIA ARTIFICIAL:
SISTEMAS EXPERTOS (SE)

utilizan el conocimiento emprico

escanean toda la informacin acerca de las
propiedades de la muestra y las operaciones
toma en cuenta las reglas de oro de la purificacin
utilizan correlaciones matemticas y bases de
datos

Encuentran una solucin ptima al problema

del proceso de operaciones y la secuencia

Muestra la implementacin de dos criterios para seleccionar la

mejor secuencia de operaciones para la purificacin de una
mezcla simple de protenas y otra compleja (sobrenadante de
cultivo):
selection separation coefficient (SSC criterion)
final level of purity (Purity criterion)

????

The design of downstream processes for large-scale

protein purification

PROCESO DE SNTESIS Y
OPTIMIZACIN
i. Elegir entre OPERACIONES alternativa
ii. Diseo de una SECUENCIA PTIMA para
obtener mximo rendimiento con el
menor nmero de pasos
iii.Escala de operacin
Ver la compatibilidad entre la operacin y la escala
en la cual se va a disear
Analizar el lmite que poseen las operaciones elegidas

PROCESO DE SNTESIS Y
OPTIMIZACIN
iv. Nmero de etapas
Debe considerarse en el diseo si los procedimientos
seleccionados requieren de alguna etapa de
regeneracin, elusin del producto deseado, etc

v. Costos

Costos de operacin
Costos fijos
Gastos de planta
Administracin (impuestos)
Investigacin y desarrollo