Cromatografa

La palabra cromatografa significa grafica de colores y fue diseada por

Michael Tswett en el ao 1903. Llevando a cabo una extraccin de una mezcla
de pigmentos de hojas verdes y luego paso el extracto a travs de un tubo de
vidrio empacado con carbonato de calcio, y de esta forma logr separar los
pigmentos presentes en las hojas.

Actualmente cromatografa es el nombre que se le da a un grupo de tcnicas

utilizadas en la determinacin de la identidad de sustancias, en la separacin
de componentes de las mezclas y en la purificacin de compuestos.

La cromatografa tiene
varias tcnicas, pero
siempre se basa en el
mismo principio

contienen

Fase estacionaria

Fase mvil

Fase estacionaria

Puede ser un solido o un liquido que se queda fijo en la misma posicin

Fase mvil

Liquido o gas que corre a travs de una superficie y de la fase estacionaria.

La rapidez con que viaja una sustancia a travs del sistema de cromatografa
depende directamente de la interaccin relatico entre las sustancias y las
fases mvil y estacionaria.

Cromatografa plana

Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina

Tipos de
cromatografa
Cromatografa en columna

Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercriticos

Cromatografa plana
La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o un papel

Cromatografa en papel
La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira depapelfiltro. La muestra se
deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y evaporando el disolvente.
Luego el disolvente empleado como fase mvil se hace ascender por capilaridad

Cromatografa en capa fina

La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lmina de plstico o aluminio
que previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase estacionaria).
Entonces, la lmina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes
mezclados (eluyente o fase mvil). A medida que la mezcla de disolventes asciende por
capilaridad a travs del adsorbente, se produce un reparto diferencial de los productos
presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente.

Cromatografa en columna
La fase estacionaria se sita dentro de una columna, y la fase mvil se distingue del liquido
empleado, puede ser: liquido, gas, lquidos supercrticos.
Consiste en la aplicacin de una muestra compleja a una columna de cristal.
Contiene una matriz solida porosa que esta inmersa en el solvente.
Se bombea una gran cantidad de solvente a travs de la columna.
Las diferentes mezclas se van retrasando de manera distinta segn su interaccin con las matriz.
Se pueden separar de acuerdo a su carga, su hidrofobicidad, su tamao su capacidad de unirse a
grupos qumicos particulares.
La pureza de las fracciones obtenidas se suele comprobar mediante la electroforesis en geles de
poliacrilamida

Mtodo

LC

Tcnicas

Tipo de
equilibrio

Reparto

Liquido adsorbido
sobre un solido

Distribucin entre
lquidos inmiscibles

Adsorcin

Solido

Adsorcin

Intercambio inico

Resina de
intercambio Inico

Intercambio inico

Exclusin por
tamaos

Liquido en
intersticios de un
solido polimrico

Distribucin/
Exclusin

Gas-Liquido

Liquido adsorbido
sobre un solido

Distribucin entre
gas y liquido

Gas-solido

Solido

Adsorcin

Especies orgnicas
enlazadas a
superficie solida

Distribucin entre
fluido supercrtico y
superficie enlazada

GC

SFC

Fase
estacionaria

Cromatografa de intercambio inico

Se usa en la separacin de molculas grandes(protenas y cidos

nucledos).

Cuando las separaciones exigen condiciones qumicas fuertes se emplean

intercambiadores ionios inorgnicos

Funcionamiento

En unas condiciones determinadas sern retenidas en la columna las

muestras que tenga una carga complementaria a la de la matriz de la ge,
siendo eluidas las restantes

para eluir las muestras retenidas se puede variar la carga inica del
solvente a su pH de forma que se alcance el punto isoelctrico de la
muestra de inters o el de la matriz, neutralizando de este modo la
fuerza que retiene a la muestra en la columna

Cromatografa de exclusin

Separa las muestras en base a su tamao

La matriz de la columna esta formada por un polmero entrecruzado con

poros de tamaos determinados

Las muestras de mayor tamao migran a lo largo de la columna con mayor

velocidad que las de tamao pequeo

Las muestras de menos tamao entran en los poros y se mueven a lo largo de

la columna lentamente porque tienen que atravesar los laberintos que se
encuentran en el interior de las bolas de los polmero en su marcha a lo largo
de la columna

Se emplea en la separacin de protenas de alimentos , determinacin de

glucosa y fructuosa en zumos de frutas, etc.

Caractersticas de las matrices

Deben ser estables

Tener bajo contenido en grupos inicos

Uniformidad e poro y tamao

Los compuestos utilizados pueden ser derivados de:

Dextranos

Agarosa

Acrilamidas

Esferas de vidrio

Cromatografa de afinidad

Permite la separacin de mezclas por su afinidad o capacidad de unin a un

determinado ligando

Las muestras que se retienen en la columna son aquellas que se unen especficamente a
un ligando que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la columna.

Despus de que las muestra que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a travs de
la columna, la muestra de inters que ha quedado retenida en la columna se eluye
mediante el empleo de una solucin que contiene bien ligando libre u otro compuesto
que rompa la interaccin entre el ligando y la protena ligandos de afinidad

Se clasifica segn su :

Naturaleza

Actuacin