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Corynebacterium

Gardnerella
Listeria
Bacillus

REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA


UNIVERSIDAD DEL ZULIA
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE MEDICINA
CTEDRA DE MICROBIOLOGA
UnCBACTERIOLOGA Y VIROLOGA

Bacilos
Gram
positivo

Bacterias
singulares

Tema 9:
Otras
bacterias de
importancia
clnica

Bacilos
curvos o
espirales

Micobacterias

Bacterias
Anaerobias
estrictas
MARACAIBO, FEBRERO DE 2016

Corynebacte
rium

C. diphtheriae

Produjo grandes epidemias en los siglos XVI y XVII.


1821 Pierre Bretonneau (antomo patlogo) describi
la clnica de la difteria y su diferenciacin de otras
enfermedades respiratorias.
En 1883 Klebs descubri cocos y bacilos en cadenas en
los cortes microscpicos de membranas diftricas.

Gnero Corynebacterium

La pared celular contiene cido meso-diaminopimlico y cadenas


cortas de cidos miclicos de 22 a 36 tomos de carbono.
El contenido G+C varia de 46 a 76 mol%.
Al colorearse con Gram, se observan como bacilos Gram positivo
ligeramente curvos, sus lados no son paralelos y sus extremos
pueden ser ligeramente ms anchos, dndoles en ocasiones forma
de raqueta, esta morfologa se observa en los verdaderos
Corynebacterium.

Gnero Corynebacterium
En medios lquidos se pueden
observar como clulas aisladas, en
pares, en forma de V, formando
empalizadas
o
en
grupos
formado letras chinas.
Son catalasa positiva y las
especies mdicamente relevantes
son inmviles.

Hbitat Natural
La
mayora
de
las
especies
de
Corynebacterium forman parte de la flora
normal de piel y mucosas de humanos y
mamferos.
C. diphtheriae puede aislarse de la
nasofaringe y de lesiones en piel, lo que
actualmente representa el principal reservorio
de diseminacin de la difteria.

Importancia Clnica
La importancia clnica de las bacterias corineformes
aisladas de muestras clnicas frecuentemente es confusa,
debido principalmente a su hbitat natural, que puede
conducir a su aislamiento en muestras mal tomadas.
Deben considerarse como probables patgenos cuando
son aislados:
De sitios anatmicos normalmente estriles.
De muestras clnicas tomadas adecuadamente si es el
microorganismo predominante.
De muestras de orina en cultivo puro con un contaje >104
UFC/mL, o como microorganismo predominante con un
contaje >105 UFC/mL.

Importancia Clnica
El significado clnico de los corineformes est
fuertemente relacionado a los siguientes
hallazgos:
Mltiples muestras positivas para el mismo corineforme.
En el examen directo de la muestra coloreado con Gram
se observan corineformes y una fuerte respuesta
leucocitaria.
Los otros microorganismos aislados de la muestra son
de baja patogenicidad.

Corynebacterium
diphtheriae
Es un bacilo pleomorfo (0,3 a 0,8 x 1 a 8 m) que se tie
de manera irregular (grnulos metacromticos).
Se subdivide en cuatro biotipos (morfologa colonial y
propiedades bioqumicas).
Diferentes cepas pueden o no producir la toxina diftrica
/DT).

Es un modelo clsico de virulencia bacteriana


Exotoxina El gen tox se introduce en las
cepas mediante un bacterifago lisognico.
El microorganismo no necesita penetrar en la
sangre para producir los sntomas sistmicos
de la enfermedad.

Accin de la Toxina Diftrica

Factor de crecimiento
epidrmico de unin a la
heparina

Tomado de: Ryan y col. Sherris Microbiologa Mdica. 5ta ed. 2011. McGrawHill.

Corynebacterium
diphtheriae

La toxina es un polipptido termolbil (PM 62000).


Dosis letal 0,1ug/Kg.
El fragmento B se divide en dominio receptor y de
translocacin.
La unin del dominio receptor a las protenas de la
membrana CD-9 y al precursor parecido al factor
de crecimiento fijador de heparina (HBEGF)
desencadena la entrada de la toxina por
endocitosis (corazn, clulas nerviosas).

La acidificacin del dominio translocacin dentro


del endosoma crea un canal de protena que
facilita el desplazamiento del fragmento A al
citoplasma.

Corynebacterium
diphtheriae
La subunidad A inhibe la elongacin de la cadena polipeptdica, al
inactivar el factor de elongacin 2 (EF-2), catalizando una reaccin que
produce NAD libre + complejo de ADP-ribosa-EF2 inactivo (ADPribosilacin), por lo que no se produce la translocacin del ARNt desde
el sitio aceptor al donador en el ribosoma, inhibiendo as la sntesis de
protenas.

La sntesis de la toxina est regulada por el represor de la


toxina diftrica (DTxR) codificado en el cromosoma.
Esta protena se activa en presencia de concentraciones
elevadas de hierro, se une al operador del gen de la toxina y
evita su produccin.

Epidemiologa de C. diphtheriae
La difteria es una enfermedad de distribucin universal,
fundamentalmente en zonas urbanas con condiciones de
hacinamiento y un nivel de inmunidad bajo inducido por la
vacuna.
C. diphtheriae se mantiene en la poblacin como
consecuencia del estado de portador asintomtico en la
orofaringe o en la piel de las personas inmunizadas (por la
exposicin a C. diphtheriae o vacunacin).
Se transmite de una persona a otra a travs de gotitas
respiratorias o mediante contacto cutneo.
El ser humano representa el nico reservorio conocido de
este microorganismo.

Enfermedades clnicas de
C. diphtheriae
La presentacin clnica de la difteria
determinada por:
1) el lugar de la infeccin;
2) el estado inmunitario del paciente y
3) la virulencia del microorganismo.
La

exposicin a C. diphtheriae
asintomtica de las personas
respiratoria leve en personas
enfermedad fulminante, y algunas
inmunizados.

viene

puede originar colonizacin


con inmunidad, enfermedad
parcialmente inmunizadas o
veces mortal, en pacientes no

DIFTERIA
RESPIRATORIA
DIFTERIA CUTNEA

DIFTERIA RESPIRATORIA

DIFTERIA CUTNEA

DIAGNSTICO DE LABORATORIO

DIAGNSTICO DE LABORATORIO

DIAGNSTICO DE LABORATORIO

Cultivo
Muestras: nasofaringe y garganta.
Pruebas para la Identificacin de Gnero:

Catalasa
Metabolismo Fermentativo/Oxidativo
Reduccin de Nitratos
Ureasa
Hidrlisis de la Esculina
Lipofilismo
Pirazinamidasa
Reaccin de CAMP
Produccin de cido a partir de:

Glucosa
Maltosa
Sucrosa
Manitol
Xilosa

PRUEBAS DE TOXIGENICIDAD

Prueba de Elek anlisis de inmunodifusin in vitro.


Ensayo de neutralizacin de cultivo tisular que emplea
una antitoxina especfica.
Ensayo de neutralizacin in vivo (cobayos).
Prueba de amplificacin de cidos nucleicos (deteccin
del gen tox en cepas y muestras clnicas).

No se deben pasar por alto las cepas no toxignicas de


C. diphtheriae, ya que se pueden asociar a diversas enfermedades
con significacin clnica, como septicemia, endocarditis, artritis
sptica, osteomielitis y la formacin de abscesos.

Tratamiento, prevencin y control


ASPECTO MS IMPORTANTE DEL TRATAMIENTO
DE LA DIFTERIA administracin precoz de la
antitoxina diftrica para neutralizar la exotoxina
antes que se una a la clula del organismo
anfitrin. La muerte celular es inevitable tras la
internalizacin de la toxina.
TRATAMIENTO ANTIBITICO penicilina o
eritromicina para destruir las clulas de C.
diphtherae e inhibir la produccin de exotoxina.
TAMBIN ES IMPORTANTE: reposo en cama, el
aislamiento para evitar una diseminacin
secundaria y, en los pacientes con difteria
respiratoria,
el
mantenimiento
de
la

Tratamiento, prevencin y control


La vacunacin con el toxoide es necesaria tras la
recuperacin del paciente, ya que un gran nmero de
sujetos no logra fabricar anticuerpos protectores con
posterioridad a una infeccin natural.
La difteria sintomtica se puede prevenir mediante
la vacunacin activa de las personas con toxoide
diftrico.
El toxoide, no txico e inmunognico, se prepara
tratando la toxina con formalina.
Inicialmente, los nios reciben cinco inyecciones de
esta preparacin con antgenos del ttanos y de la tos
ferina (vacuna DPT) a los 2, 4, 6,15 y 18 meses de
vida, as como a las 4 y 6 aos.
Se recomienda la administracin de vacunaciones con
el toxoide diftrico combinado con el toxoide tetnico

Gardnerella
vaginalis

No est relacionada genticamente con ninguno de


los
gneros
de
Bacilos
Gram
positivos
(Bifidobacterium).
Es la nica especie perteneciente al gnero
Gardnerella.
Posee una capa de peptidoglicano similar a la de los
Gram positivo, pero ms delgada.
Lisina es el diaminocido de la pared celular y su
contenido G+C es de 42-44 mol%.
A la coloracin de Gram se muestran como bacilos o
cocobacilos Gram variable.
Son catalasa negativa, inmviles y un metabolismo
fermentativo lento.

Gardnerella vaginalis
Forma parte de la flora anorectal de individuos sanos de
ambos sexos; tambin forma parte de la flora vaginal
endgena de la mujer en edad reproductiva.
El pH ptimo de crecimiento est entre 6 y 7.
Est asociada con vaginosis bacteriana y su rol en esta
entidad clnica es controversial.
En mujeres embarazadas la vaginosis bacteriana puede
conducir a parto pretermino, ruptura prematura de
membranas y corioamnionitis.
Tambin se ha recuperado de sangre de pacientes con fiebre
postparto o postabortal y puede ocasionar infecciones en el
recin nacido.

Gardnerella vaginalis
Menos frecuente como agente causal de infecciones
serias en otras localizaciones diferentes al tracto genital
y complicaciones obsttricas.
DIAGNSTICO: Cultivo bacteriolgico
Aislamiento e identificacin:
Directo de secreciones vaginales
Presencia de clulas clave
Presencia de flora mixta, predominantemente Gram negativos
pequeos (Prevotella y Porphyromonas)
Bacilos y cocobacilos Gram variable (G. vaginalis)
Lactobacillus spp. ausentes o muy escasos.

Test de aminas (KOH 10%)


Identificacin de biotipos (8)

Pruebas de Susceptibilidad
El metronidazol es la droga de eleccin.
Las infecciones sistmicas pueden tratarse con
ampicilina o amoxicilina ya que la produccin de
betalactamasas no se ha observado hasta el
momento.
No se recomienda la realizacin de pruebas de
susceptibilidad y no existen lineamientos para
su realizacin e interpretacin.

Listeri
a

Listeria
Familia Listeriaceae: Brochothrix y Listeria.
Especies:
L. monocytogenes (hombre)
Listeria ivanovii (animales)
L. innocua
L. seeligeri
L. welshimeri
L. grayi
Bacilos Gram positivo cortos, regulares, no ramificados
dispuestos solos o en cadenas.
Temperatura ptima de crecimiento: entre 30 y 37 C;
pueden crecer a 4 C.

Listeria
Son anaerbicos facultativos, generalmente catalasa
positiva y oxidasa negativa, producen cido a partir
de D-glucosa y otros carbohidratos.
Mviles a 28 C por la presencia de 1 a 5 flagelos
peritricos, pero son inmviles a 37C
Son Voges-Proskauer, rojo de metilo y esculina
positiva.
Son urea, gelatina, indol y H2S negativo.
Su pared celular posee m-DAP y cido lipoteicoico,
pero no cido miclico.
Contenido G+C 36-42 mol%.

Hbitat Natural
Ampliamente distribuidos en la naturaleza.
Suelo, materia vegetal en descomposicin, granos, aguas
(potables y servidas), animales y alimentos (pollos y gallinas
frescos y congelados, carnes frescas y procesadas, leche
cruda, queso), desechos de mataderos.
L. monocytogenes ha sido aislada de numerosas especies de
mamferos, aves, peces, crustceos e insectos (portadores
gastrointestinales animales y humanos).
Debido a su amplia diseminacin, L. monocytogenes posee
muchas oportunidades de entrar en los ambientes de
produccin y procesamiento de alimentos, y su habilidad de
crecer a 4 C, le permite producir enfermedad en personas
que ingieren alimentos colonizados.

FACTORES DE VIRULENCIA
Toxina (Listeriolisina O)
Hemolisinas
Fosfolipasas
ActA
Internalinas
Otros factores de virulencia: p60,
factores antioxidantes, consumo de
iones metales,
mediadores de
respuesta al stress.

Patogenia e inmunidad
L. monocytogenes es un patgeno facultativo
intracelular que puede crecer en macrfagos,
clulas epiteliales y fibroblastos en cultivo.
La infeccin se inicia en los enterocitos o en las
clulas M de las placas de Peyer.
Entrada: mediada por seis o ms protenas
ricas en leucina, las internalinas (p. ej., InlA,
InlB, InlC), que interaccionan con glucoproteinas
de la superficie de las clulas.
Luego el pH cido del fagolisosoma activa una
toxina bacteriana (Iisteriolisina O) y la enzima
fosfolipasa C, que conlleva la liberacin de las
bacterias en el citosol de la clula.

PATOGENIA

Tomado de: Ryan y col. Sherris Microbiologa Mdica. 5ta ed. 2011. McGrawHill.

Patogenia e inmunidad
Las bacterias se replican y posteriormente se mueven a
travs de la clula hasta la membrana celular.
Este movimiento est mediado por una protena bacteriana,
ActA, que se localiza en la superficie celular en un extremo
de la bacteria y coordina el ensamblaje de la actina.
Por tanto, la bacteria es empujada hacia la membrana
celular, formando una una protrusin (filpodo) que obliga a
la bacteria a pasar a la clula adyacente.

La entrada en los macrfagos despus de


haber atravesado las clulas que recubren el
intestino conduce a las bacterias hasta el
hgado y el bazo, lo que produce la
diseminacin de la enfermedad.

Patogenia e inmunidad
La inmunidad humoral es poco importante en el
desarrollo de las infecciones por L. monocytogenes.
La bacteria se replica en los macrfagos y se mueve
en el interior de las clulas, evitando as la
eliminacin mediada por anticuerpos.
Pacientes con deficiencias de la inmunidad celular,
son especialmente susceptibles a las infecciones
graves.

Importancia Clnica
L. monocytogenes posee un elevado tropismo
por el sistema nervioso central, lo que produce
enfermedades severas con una elevada tasa de
mortalidad (20-50%) o secuelas neurolgicas
entre los sobrevivientes.
En adultos no embarazados, L. monocytogenes
produce principalmente meningitis, encefalitis y
septicemia.
En
mujeres
embarazadas
produce
una
enfermedad bacterimica tipo influenza y
placentitis y amnionitis e infeccin del feto
(abortos y nacimientos prematuros).

Importancia Clnica
Raramente
ocurren
Infecciones
localizadas
despus de un episodio de bacteriemia.
Sin embargo, se ha descrito listeriosis primaria
cutnea con o sin bacteriemia en veterinarios y
trabajadores del campo, quienes adquieren la
enfermedad a travs del contacto con tejidos
animales infectados.

Son infrecuentes las infecciones como endocarditis,


artritis, abscesos intrabdominales, endoftalmitis e
infecciones pleuropulmonares.

Epidemiologa
La enfermedad se asocia con el consumo
de alimentos contaminados (p. ej., queso
no curado, leche, pavo, vegetales crudos
[especialmente
repollo])
o
con
la
diseminacin transplacentaria de la madre
al neonato.
Los casos espordicos y epidmicos
ocurren durante todo el ao pero tienen un
mximo en los meses ms clidos.
Los jvenes, los ancianos y las mujeres
gestantes, as como los pacientes con

Diagnstico e Identificacin
Seguridad en el laboratorio.
Muestras
Clnicas
Alimentos
Aislamiento
Cultivo
Deteccin rpida
DIAGNSTICO PRECOZ Deteccin de L. monocytogenes en
sangre de la madre y en diferentes muestras del recin nacido (LCR,
sangre, lquido amnitico, secreciones respiratorias, placenta, heridas
cutneas, aspirado gstrico o meconio).
La observacin microscpica de bacilos Gram positivo en estas
muestras es de invaluable ayuda en el diagnstico temprano de esta
patologa.

Diagnstico e Identificacin
Identificacin
Gnero:
Bacilos Gram positivo
Motilidad en vueltas de payaso en gota pendiente
Catalasa positiva
Esculina positiva
Crecimiento a 4 C y 37 C
Especie
Hemlisis
CAMP (S. aureus y R. equis)
Hipurato
Acido a partir de:

Manitol
D-metil-manosido
L-rhamnosa
Almidn
D-xilosa
Ribosa
N-acetil--D-manosamina

Pruebas de Susceptibilidad
In vitro es susceptible a AM, GM, E, Te, Ra y C,
pero presenta susceptibilidad moderada a
quinolonas.
Penicilina o ampicilina con o sin un aminoglicsido
son el tratamiento recomendado.
Plsmidos de resistencia a TE, C y macrlidos en
infecciones graves por L. monocytogenes.
Las cefalosporinas son inactivas in vitro, sin
embargo in vivo al parecer poseen cierto efecto,
por lo que no se recomiendan para el tratamiento
de listeriosis.

Bacillus

B.
anthraci
s
B. cereus
Son
bacilos
Gram
positivo
aerbicos, formadores de esporas
de resistencia, a excepcin de B.
infernus que es anaerbico
estricto.
Son catalasa y motilidad positiva.

Bacillus
La mayora de las especies son mesfilos, pero existen
especies termfilas y psicrfilas.
Ampliamente distribuidos en la naturaleza, pero algunas
especies son oportunistas y patgenos obligados de
mamferos e insectos.
El principal habitad es el suelo (cidos, alcalinos, fros,
calientes, frtiles, desrticos) y las columnas y fondos de los
cuerpos de agua (dulce, marina).
Sus esporas fcilmente sobreviven en el polvo, aerosoles y
en alimentos secos (especies, leche en polvo).
B. anthracis es un patgeno obligado de animales y el
hombre, ya que su multiplicacin en el ambiente es muy rara.
B. cereus es un patgeno oportunista que produce
principalmente intoxicaciones alimentarias.

Importancia Clnica

La mayora de los miembros del gnero poseen poco o ningn poder


patgeno y no estn asociados con infecciones en el humano y otros
mamferos.
Las excepciones son B. anthracis, B. cereus y B. liqueniformis.
La alta resistencia de las esporas a la desecacin, radiacin,
desinfeccin y al calor permiten que estos se comporten como
contaminantes de quirfanos, instrumentos quirrgicos, productos
farmacuticos y alimentos.
Muchas especies son de utilidad biotecnolgica:
B. licheniformis y B. subtilis (bacitracina)
P. polymyxa (polimixina)
B. megaterium (vitamina B12 y B2)
B. subtilis (biotina y riboflavina)
B. cereus, B. circulans, B. megaterium, B. pumilis,
B. subtilis, G. stearothermophilus (ensayo de antibiticos)
B. cereus (validacin de desinfectantes)
B. subtilis (monitoreo de fumigaciones)
G. stearothermophilus (esterilizacin por calor)
B. pumilis (esterilizacin por radiacin).

Bacillus cereus
Bacillus cereus es el segundo en importancia dentro del gnero
como patgeno humano.
Produce principalmente intoxicaciones alimentarias e infecciones
oportunistas.
Produce dos tipos de intoxicacin alimentaria:

Tipo diarreica: caracterizada por dolor abdominal, con diarrea


de 8 a 16 horas despus de la ingestin del alimento
contaminado, esta asociada a una amplia diversidad de
alimentos como carnes, vegetales, pastas, tortas, salsas y leche.
Tipo emtica: caracterizada por nauseas y vmito de 1 a 5
horas despus de la ingesta del alimento contaminado, est
asociada principalmente a la ingesta de arroz chino,
ocasionalmente se asocia a cremas pasteurizadas, pudines de
leche, pastas y formulas lcteas reconstituidas.

Patogenia Bacillus cereus


Ambos sndromes se deben a la capacidad de las esporas de sobrevivir a
los procedimientos de coccin durante la preparacin del alimento y malas
condiciones de almacenamiento que permite la germinacin de las
esporas.

1) Toxina necrtica (enterotoxina


termolbil)
2) Cereolisina (hemolisina)
3) Fosfolipasa C (lecitinasa)

Bacillus anthracis
Factores de Virulencia

Plsmidos de Virulencia
pX01
Gen cya (factor de edema)
Gen lef (factor letal)
Gen pag (antgeno protector)

pX02
Genes necesarios para la
sntesis de la cpsula de cido
poli-D-glutmico

Toxina del ntrax


Toxina letal (LeTx)
Toxina de edema (EdTx)

Bacillus anthracis
https://www.youtube.com/watch?v=T1mlakCyscM

Tomado de: Ryan y col.


Sherris Microbiologa
Mdica. 5ta ed. 2011.
McGrawHill.

Una protena llamada antgeno protector (AP) transporta otras dos protenas, el factor
edema (FE) y el factor letal (FL) al receptor de la protena de morfognesis capilar 2 (PMC-2)
en la membrana celular de un macrfago blanco, donde AP, FE y FL viajan a un endosoma.
AP transporta a FE y FL del endosoma al citoplasma, donde ejercen sus efectos txicos.

La cpsula inhibe la
fagocitosis de las clulas en
fase de replicacin.
La actividad adenil ciclasa de
la toxina de edema origina la
acumulacin de lquidos
caracterstica del carbunco.

La actividad de la metaloproteasa de zinc de la toxina letal estimula la liberacin de factor


de necrosis tumoral e interleucina, as como otras citocinas proinflamatorias, por parte de
los macrfagos. Esta toxina interviene, igualmente, en la lisis de macrfagos en ciertos
cultivos celulares.
PA (Antgeno protector) es la protena dotada de una mayor inmunogenicidad (de donde
proviene su nombre) de las principales protenas de B. anthracis. Tanto Factor letal como
Factor Edema inhiben el sistema inmunitario del organismo anfitrin.

Bacillus anthracis
El ntrax es la condicin clnica ms conocida y
estudiada, ocasionada por las especies de Bacillus.
Manifestaciones clnicas
ntrax cutneo
ntrax respiratorio
ntrax gastrointestinal

Aislamiento e identificacin

Muestras clnicas.
Coloracin de Gram
Aislamiento
Crecen y esporulan a 37 C en los medios de rutina
utilizados en un laboratorio clnico.
Consideraciones de bioseguridad.
Muestras con flora mixta.

Identificacin
Dimetro del bacilo (m)
Cadenas de clulas
Motilidad
Esporangio: Forma, posicin, etc.
Crecimiento en anaerobiosis.
Crecimiento a 50 y 65 C.
Reaccin en amarillo de huevo agar
Hidrlisis de la casena, almidn y gelatina.
Arginina dehidrolasa
Produccin de indol
Reduccin de nitratos
Gas de carbohidratos
Acido a partir de: D-arabinosa, Glicerol, Glicgeno, Inulina, Manitol,
Salicin, D-trealosa.

Pruebas de Susceptibilidad
Bacillus anthracis es susceptible a la penicilina, solo cinco
trabajos han reportado la aparicin de resistencia a
penicilina.
Es susceptible a GM, E y V.
Es generalmente susceptible a estreptomicina pero
resistente a cefalosporinas.
El tratamiento de eleccin es una fluoroquinolona
combinado con otro antibitico al que el microorganismo
sea sensible.
B. cereus y B. thuringiensis producen betalactamasa por lo
tanto son resistentes a
penicilina, ampicilina y
cefalosporinas, tambin son resistentes a TMP, pero casi
siempre sensibles a CC, E, C, Va, Te, Sulfas y
aminoglicsidos.

Gracias por su