SENSORES ON LINE PARA PROPIEDADES CELULARES

Desafortunadamente, existe pocos instrumentos para el monitoreo continuo de

propiedades celulares en un bioreactor.
La medida elemental/bsica requerida es la concentracin de biomasa activa
(contenido de biomasa o concentracin de la misma)
Aunque existe algunos mtodos, una buena aproximacin que brinde confiabilidad de
datos, consistencia, amplia cobertura para organismos y medios, an no se ha
inventado.
En este entorno, los MTODOS PTICOS, basados en absorcin de la luz, como la
espectrofotometra o reflectometra han sido investigados ampliamente, en los cuales
una corriente de la muestra del bioreactor puede hacerse circular a travs de un
espectrofotmetro.
Uno de los problemas principales que se presentan en estas mediciones es la NoLinealidad entre la densidad ptica y la concentracin de la biomasa sobre los 0.5 gr.
Biomasa/litro.
En consecuencia, para mediciones de cultivos densos se diluye la corriente de la
muestra.

SENSORES ON LINE PARA PROPIEDADES CELULARES

SENSORES ON LINE PARA PROPIEDADES CELULARES

El nico monitoreo continuo altamente desarrollado y que proporciona informacin
sobre el estado bioqumico o metablico de la poblacin celular, es la FLUORIMETRA
IN SITU;
SITU para ello la luz ultravioleta (: 366 nm.) es dirigida dentro del cultivo, la
cual excita a los nucletidos de piridina reducidos, que fluorescen con una intensidad
mxima aproximada de 460 nm.
Esta fluorescencia emitida por el cultivo es medida con detectores como fotodiodos o
fotomultiplicadores.
Esta fluorescencia emitida por el cultivo es medida con detectores como fotodiodos o
fotomultiplicadores.
La intensidad fluorescente del cultivo depende de: la densidad celular, estados
metablicos celular promedio, emisores de fluorescencia y la absorcin de luz por el
medio ambiente.
Algunos experimentos en medios particulares libres han demostrado que las medidas
de fluorescencia de cultivo proveen informacin muy til sobre concentraciones de
biomasa, transferencia de oxgeno, tiempos de mezcla del reactor, agotamiento del
sustrato y metabolismo transitorio.

Prueba de Fluorescencia in-situ

Luz
fluorescente

Luz excitante

A: amplificadores
LA: Luz ultravioleta
D: Fotodetector
L1-6: Lentes
F1: filtro permisor UV 336 mm.
F2: filtro permisor 450 mm.
CC:
CC cubeta de calibracin
M: espejo dicroico pasa 460mm. y refleja 336 mm.

A registro y
computadora

Fuente
de Poder

En todas las aplicaciones de mediciones directas en cultivos celulares existen

problemas potenciales que pueden interferir con la interpretacin de medidas como
por ejemplo:
Las superficies pticas en contacto con el fluido del proceso pueden ensuciarse
con compuestos celulares o del medio.
Burbujas de gas y otras partculas,
partculas en los fluidos de reaccin de multifases,
pueden interferir o interrumpir la medida deseada.
En los casos de fluorescencia, ciertos compuestos del medio u otros productos
pueden fluorecer a las mismas longitudes de onda empleados en el estado
intracelular monitoreado, complicando de esta manera la interpretacin de la
medicin.
En vista de la importancia de la determinacin de la concentracin de biomasa y
estados metablicos celulares para el monitoreo, control y optimizacin de los
procesos, estos y otros mtodos pticos pueden esperarse sean mejorados y mas
desarrollados en el futuro

MTODOS OFF LINE DE MEDICIN

Debemos reconocer que la divisin en el empleo del monitoreo continuo ON LINE y el
intermitente OFF LINE, para la toma de mediciones no esta muy claro.
Si el tiempo entre anlisis OFF LINE sucesivos es menor que la escala caracterstica
del tiempo para los cambios en la cantidad medida, entonces el mtodo intermitente
OFF LINE, de alguna manera es empleada como medida continua de tiempo real.

MEDICIONES DE LA PROPIEDADES DEL MEDIO

Las principales mediciones deseadas en un bioreactor son concentraciones de
sustratos, ratios de influencia de sus componentes, as como las concentraciones de
los productos de la reaccin y sus inhibidores.
El anlisis cuantitativo en fase lquida, esta basado principalmente en: la refraccin
de la luz (medida con un detector de ndice de refractancia), absorcin de luz de una
determinada longitud de onda (medida con espectrofotmetro) o fluorescencia
debido a la excitacin a una determinada longitud de onda con la subsecuente emisin
de otra longitud de onda mas grande (medida con un espectrofluormetro).
En todo caso, las mediciones de fluorescencia son usualmente las mas sensibles y
permiten realizar mediciones de bajas concentraciones. Las mediciones
espectrofluorimtricas son las mas populares que las espectrofluorimtricas debido
al alto costo de stas ltimas.