CAPACIDAD

ANTIOXIDANT
E
INTEGRANTES
Condormango Cabanillas
Crisanto Ugaz
Marquinez Rojas
Tapia Celis

METODOS PARA DETERMINAR

CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
Los mtodos de determinacin de la
capacidad antioxidante se basan en
comprobar cmo un agente oxidante
induce dao oxidativo a un sustrato
oxidable, dao que es inhibido o reducido
en presencia de un antioxidante.

Mtodo FRAP. (Benzie & Strain)

ESPECTROFOTOMETRIA

Preparacin de la muestra

La
extraccin
de
antioxidantes
se
realiza
preferentemente sobre muestras de polvo seco de
material vegetal. Para ello, frutas y verduras se someten
a liofilizacin y molienda (tamao partcula = 0,5 mm.).

Para el secado de la muestra, caso de carecer de

liofilizador,puede
emplearse
secado
a
varias
temperaturas (mximo 60C). Otros tipos de secado, y
cualquier proceso trmico en atmsfera no modificada,
conllevan
prdidas
significativas
de
capacidad
antioxidante.

Por la misma razn, para la molienda se recomienda el

uso de molino centrfugo, o cualquier otro sistema
(criomolienda, molienda en atmsfera reductora) que
implique mnimo calentamiento de la muestra y tiempo
de permanencia en atmsfera oxidante.

Extraccin de antioxidantes

0,5 g de muestra son tratados con 20 mL de

metanol/agua acidificados con HCl 2N (50:50
v/v, pH 2), tras lo que se agita durante 1h.

Tras centrifugar, se recoge el sobrenadante y

el residuo se trata con 20 mL de acetona/agua
(70:30 v/v) y se vuelve a agitar durante 1h.

Tras centrifugar,
combinan.

La determinacin de capacidad antioxidante

se lleva a cabo en las dos fracciones: lquida
(sobrenadantes de la extraccin)y slida

(residuos de la extraccin)

La determinacin de capacidad antioxidante

en los sobrenadantes se efecta directamente
tomando alcuotas de los mismos.

ambos

sobrenadantes

se

MATERIALES Y REACTIVOS
para el METODO
Muestras de nectares
Reactivo
FRAP
=
2,4,6-Tris(2-piridil)-striazina + FeCl3 + tampn acetato
Agua destilada
Sulfato ferroso
Bao maria
Pipetas
Tubos de ensayo
Espectrofotometro
Todos los reactivos fueron de grado para anlisis.

PROCEDIMIENTO

La capacidad antioxidante de las diferentes

bebidas se determin utilizando la tcnica
descrita por Benzie y Strain, adaptada por
Szollosi y Varga.

Mtodo FRAP. (Benzie & Strain, 1996)

900 L del reactivo FRAP, que contiene TPTZ,

FeCl3 y tampn acetato, se mezclan

Con 90 L de agua destilada y 30 L de la

muestra o el blanco (los disolventes usados
para la extraccin).

Tras incubar a 37C, se toman los valores de

absorbancia a 595 nm a los 30 min, dado que a
los
4
min,
el
tiempo
que
se
toma
habitualmente, la reaccin para formar el
complejo hierro-TPTZ an no ha terminado

Adaptacion por Szollosi y Varga.

En forma breve, la determinacin se realiz

midiendo 1.0 mL del reactivo 2,4,6- Tris(2-piridil)s-triazina, 0.1 mL del nctar previamente
diluido y 0.9 mL de agua destilada. Se prepar
el blanco densidad ptica a 593 nm en un
espectrofotmetro Spectronic modelo Genesys 6.

Todas las determinaciones se realizaron por

triplicado.

Se prepar una curva de calibracin utilizando

diversas concentraciones de sulfato ferroso que
sirvi para realizar los clculos.

RESULTADOS