Introduction

La microbiologie est la science qui tudie les microorganismes. soit:

Certains eucaryotes
Champignons et certaines algues.
Protozoaires (tres unicellulaires animaux).

Tous les procaryotes

Cyanophyces ou algues bleues .
Bactries.

Les Virus
Les virus ne sont pas des micro-organismes car ils ne sont pas
autonomes, ils ne peuvent pas se reproduire sans dtourner la
machinerie cellulaire d'un autre individu.

La microscopie
La microscopie est un ensemble de techniques
permettant d'obtenir une image des structures biologiques.
Le principe est dans tous les cas le mme : une onde est
envoye sur la prparation ou mise par la prparation.
Aujourd'hui la microscopie est divise en deux grands
groupes, diffrents par la nature de la particule
lmentaire implique :
Le microscope optique
Le microscope lectronique

1. La microscopie optique
Le premier microscope fut sans doute fabriqu par Hans
et Zacharias Janssen, deux fabricants de lentilles
nerlandais, en 1590, mais le modle final fut invent par
Antoine van Leeuwenhk en 1664, puis fut amlior
par Christian Huygens.
La microscopie optique regroupe:
Le microscope fond clair
Le microscope fond noir
Le microscope contraste de phase
Le microscope fluorescence

1-1. La microscopie fond clair

Utilise des les rayons lumineux.
Permet le grossissement de 1500-2000 fois.
paisseur de coupe ( 1-5 m).
Observation vitale et colore.

Bactrie

Microscope fond clair

Paramcie

1-2. La microscopie en contraste de phase

Cette technique permet d'observer les cellules sans
prparation ni coloration dans leur milieu d'origine.
Le principe est bas sur le fait que les structures biologiques
sont transparentes (nabsorbe pas la lumire transmise).
Ncessite un clairage trs prcis dite clairage de Koehler.
A lobservation, on voit une image en noir et blanc o les
diffrentes structures apparaissent bordes de blanc dun
ct et de noir de lautre.

Culture cellulaire

1-3. La microscopie fond noir

Utilise les rayons lumineux dans un fond noir.
Les zones de la prparation qui diffusent la lumire
apparaissent lumineuses ( claires ) sur ce fond noir.
Utilis pour les lments trop transparents.
Les lments observs apparaissent trs brillants
( les flagelles, les fibres ).
N'est pas utilis pour l'observation d'objets colors.

Bulles d'air dans l'eau

Le microscope fond noir

1-4. La Microscopie fluorescence

Cette technique est utilises pour
certaines molcules qui mettent de
la lumire quand on les claire avec
une lumire de longueur d'onde
suprieure.
On claire l'chantillon avec une
lumire ultraviolette, violette ou
bleue.

Consiste utiliser une coloration fluorescente. Deux

colorants trs utiliss sont : la rhodamine (met une lumire
rouge) et la fluorescine (lumire verte).

Culture cellulaire

Le microscope fluorescence

Legionella pneumophila

2. La microscopie lectronique
Il existe deux variantes de la microscopie
lectronique :
La microscopie transmission
La microscopie balayage

2-1. La microscopie lectronique transmission

Utilise comme rayonnement des lectrons.
Observation sous ultravide.
Permet le grossissement de 75000 5000000 fois.
Les chantillons sont sous forme de lames extrmement fines
nanomtre ).

( 50

L'image obtenue peut tre vue sur un cran.

L'chantillon biologique apparat plus clair que ce qui l'entoure, d'o le
nom de coloration ngative. L'chantillon apparat blanc sur un fond
sombre.

Le microscope lectronique
transmission

Bactriophage

2-2. La Microscopie lectronique balayage

Utilise des lectrons.

Observation sous ultravide.
Permet le grossissement de 75000 5000000 fois.
Fournis des images en 3D.
Permet lobservation des coupes dune paisseur
de 300 600 A.

Le microscope lectronique
balayage

Bifidobacterium adolescentis

Dfinition
La strilisation est l'opration qui consiste liminer les
micro-organismes d'un objet, et de manire durable.
En microbiologie, le but de la strilisation est:
D'une part de matriser les micro-organismes introduits
dans le milieu d'tude.
D'autre part d'viter la contamination du milieu
extrieur et des personnes.

Le choix dune mthode de strilisation est en fonction

de:
La nature de la substance ou lobjet striliser.
Sa pollution prsume.
Lquipement disponible au laboratoire.

La strilisation peut tre ralise par:

1.

Des procds physiques:

Strilisation par la chaleur
Chaleur sche
Chaleur humide
Pasteurisation
Tyndallisation
Strilisation par filtration
Strilisation par radiations

2.

Des procds chimiques:

Antiseptiques
Dsinfectants
Antibiotiques

I. La chaleur
1. Chaleur sche
Bec Bunsen (chauffage direct):
Cre un globe virtuel strile de 10 cm de rayon de la
flamme.
A utiliser pour les objets en verre ( pipettes, baguettes
de verre...), pour certains objets en mtal (anse , pince).

Fours Pasteur, Poupinel ( strilisateurs air chaud ):

C'est un four classique utilis pour la verrerie,
porcelaine et instruments mtalliques.
Les spores et germes sont dtruits en chaleur sche, par
un chauffage de : 4 heures 140 C ; 2 heures 160C ;
30 min 180C.

Bec bunsen

Four Pasteur

2. Chaleur humide
2-1. Autoclavage:

Cette technique consiste faire bouillir de l'eau dans

une enceinte close pour augmenter la pression et donc
dpasser les 100C dbullition. Ceci est ralis
121C pendant 15 minutes au minimum.
A utiliser pour les milieux de culture, matriel en
caoutchouc, la verrerie

2-2. Les bain-marie ou bain- thermo stats ( bullition ):

Un chauffage de 30 minutes 100C par bullition ou

un maintien dans la vapeur d'eau bouillante suffit
dtruire toutes les formes vgtatives.
A utiliser pour la strilisation des produits liquides
dlicats : milieux albumineux, lait, glatine, solutions
concentres de glucides, ...

Autoclave

Bain marie

2-3. Pasteurisation:
Conservation des produits naturels pendant un temps
limit, ne dtruit que les formes vgtatives mais pas
les spores.
Le liquide est port rapidement 90C pendant 30s,
par exemple,puis on le refroidit brusquement 10C.
Conservation des produits alimentaires.

2-4. Tyndallisation:
La tyndallisation est une srie de chauffages brefs
des tempratures de 70C intervalles rguliers
(3 chauffages d'une heure, 24 h entre 2
chauffages), ceci afin de laisser aux formes rsistantes
la possibilit de germer pour les tuer au chauffage
suivant.
Utilisation trs limite aux substances thermolabiles
non filtrables (mulsion de jaune d'oeuf, vaccins),
prparation de milieux base de srum ou de jaune
d'oeuf.

2. Strilisation par filtration

La filtration consiste faire passer le liquide striliser
travers une paroi poreuse ou une membrane qui retient les
bactries.
Il existe plusieurs types de filtration:
Les bougies de type Chamberland: tubes fond arrondi
dont les parois sont poreuses, en porcelaine. la dimension
de ces pores varie de quelques m au 1/10me de m.
Disques: disques en verre fritt de porosit de 150 1
m.
Membranes: membranes plastiques minces comportant
des millions de pores par cm2 dont la taille, trs uniforme,
varie de 8 0.01 m.

Striliser des liquides altrables par la chaleur: srums,

solutions hydrolysables, solutions glucidiques, vitamines

Diffrents filtres

3. Strilisation par radiations

C'est la lumire U.V qui est la plus souvent utilise
( lampes germicides ou strilampes ).
Strilisation des surfaces et de l'air ambiant, dans des
locaux ou des hottes, servant aux manipulations en
atmosphre strile.
Utilisation en virologie, cultures cellulaires, prparation
et conditionnement des produits pharmaceutiques,
ensemencements bactriens, prparation de milieux.
Les rayons X ou y sont utiliss pour la conservation de
certains produits alimentaires.

3-1. Antiseptiques:
Tuent les cellules vivantes, microorganismes et autres.
Leur action est instantane. ex: teinture
d'iode, permanganate de potassium, eau oxygne ...
Utilisation locale chez les tres vivants, au niveau des
plaies et des muqueuses.

3-2. Dsinfectants:
Empche les contaminations humaines et animales.
Vapeurs ( formol, gaz sulfureux, oxyde d'thylne )
Liquides ( phnols, sulfate de cuivre, de fer, eau de Javel )
Utiliser pour tous les milieux extrieurs l'Homme: eau,
air, sol .

3-3. Antibiotiques:
Les antibiotiques bactriostatiques: stoppent
la multiplication des bactries sans les dtruire.
Les antibiotiques bactricides: qui tuent les bactries
Utilisation in vivo.

Pipette gradues

Pipette jauges

Pipette pasteur

Ballon

Erlenmeyer

Verre pied

Becher

prouvette

Fiole

Cristallisoir

Flacon

Boite de
ptri

Entonnoir

Dessiccateur

Tube essai