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Introduction

Pour isoler les bactries du milieu qui


les contient, les identifier, tudier leurs
proprits et, ventuellement, les
conserver, pour prparer les vaccins,
les microbiologistes utilisent des
milieux de culture.

Dfinition
Prparation nutritive destine la
croissance de microorganismes en
laboratoire.

Exigences de la bactrie
Les micro-organismes doivent trouver dans le milieu
de culture et son atmosphre tous les lments
ncessaires pour survivre, se dvelopper et se
reproduire (exigences).
Les exigences dune bactrie sont :
Besoins nutritifs.
Besoins nergtiques.
Substances spcifiques.
Conditions physico-chimiques.

1. Besoins nutritifs
Substances minrales et organiques dites substances
lmentaires.
Ncessaire llaboration de leur structure .
Leau: qui reprsente 75 % de leur poids total.
En grande quantit: loxygne, lazote,
le carbone, le phosphore et le soufre.
En quantit plus faible: des ions minraux
( Mg, K, Cl, Fe)
Sous forme de traces: des oligo-lments
( Cu, Zn, Mn)

2. Besoins nergtiques
Indispensable la synthse de leurs constituants.
Selon la source dnergie utilise on a deux
catgories de microorganismes :
lumineuse

Phototrophe
(photosynthtiques)

Source dnergie
chimique

Chimiotrophe
(chimiosynthtiques)

Phototrophe (photosynthtiques):
Se sont des microorganismes qui utilisent comme
source dnergie les rayons lumineux.
Chimiotrophes (chimiosynthtiques):
Les bactries utilisent lnergie de loxydation
des produits organiques ou minraux.

3. Substances spcifiques
Certaines bactries exigent pour se multiplier des substances
appeles substances spcifiques
( facteurs de
croissance).
Elles sont incapables de les synthtiser par dfaut enzymatique.
Facteurs de croissance englobe trois catgories:
Les acides amins
Les vitamines;
Les bases puriques et pyrimidiques.

En fonction de leurs besoins en substances spcifiques


on classe les bactries en trois catgories:
1. Prototrophe: bactries qui nexigent pas de facteur
de croissance, ex: E. coli.
2. Auxotrophe: bactries qui ncessite un facteur
de croissance pour leur dveloppement,
ex: Proteus bulgaricus.
3. Synthrophie: une bactrie qui peut synthtiser un
facteur de croissance pour une autre bactrie,
ex: Hmophilus influenzae.

4. Conditions physico-chimiques
Les facteurs physiques interviennent au cours
de la nutrition,
peuvent lempcher, linhiber ou la favoriser. Parmi ces
facteurs:

Oxygne.
Temprature.
pH.
La pression osmotique.
Lhumidit.

1. Oxygne
Selon le comportement vis vis de loxygne, on distingue:
Les arobies strictes: Ne se dveloppent qu'en prsence
d'air, ex: Pseudomonas, Acinetobacter, Neisseria.
Les bactries microarophiles: Se dveloppent mieux ou
exclusivement lorsque la pression partielle d'oxygne
est infrieure celle de l'air, ex: Campylobacter,
Mycobacteriaceae).
Les bactries aro-anarobies facultatives: Se
dveloppent avec ou sans air, ex: E. coli, Salmonella, les
streptocoques, les staphylocoques.
Les bactries anarobies strictes: Ne se dveloppent qu'en
absence totale d'oxygne, ex: Fusobacterium, Clostridium

Bactries arobies
strictes

Bactries aro-anarobies
facultatives

Bactries microarophiles

Bactries anarobies
strictes

2. Temprature
Selon le comportement vis vis de la temprature on distingue:
Bactries msophiles: T optimale entre 20 - 37C,
ex: bactries pathogense pour lhomme, les bactries de
lenvironnement.
Bactrie thermophiles: T optimale entre 45 - 55C,
ex: Enterococccus, Streptococcus thermophilus .
Bactries hyperthermophiles: T de croissance suprieures
80C ex: Archaea.
Bactries psychrophile: T optimale entre 4 - 20C,
ex: les bactries pouvant contaminer les produits laitiers
conservs au rfrigrateur.
Bactries cryophiles: Se dveloppent moins de 4C,
ex: bactries des eaux de mer et des glaces.

3. pH
La plupart des bactries se dveloppent de prfrence dans
des milieux neutres ou lgrement alcalins.
On distingue les bactries:
Neutrophiles: Se dveloppent pour des pH sont compris
entre 5,5 et 8,5 avec un optimum voisin de 7. ex:
Escherichia coli.
Alcalinophiles: Prfrent les pH alcalins,
ex: Pseudomonas et Vibrio.
Acidophiles: Se multiplient mieux dans des milieux
acides ex: Lactobacillus.

4. La pression osmotique
Les bactries sont insensibles aux variations de la
pression osmotique grasse leur paroi rigide
qui constitue un vritable mur bactrien.
Certaines espces sont osmotolrantes,
ex:
staphylocoques,
Vibrio
cholerae).

5. Lhumidit
Les micro-organismes exigent un certains seuil
dhumidit , une diminution de AW (activity of
water) entrane une baisse de lactivit enzymatique.

Les milieux de cultures se prsente sous


deux formes:
Les milieux liquides
Ils permettent une culture plus facile et plus rapide, mais les
bactries sy trouvent disperses. Ces milieux sont rpartis
dans des tubes essais.

Les milieux solides


Ils permettent la sparation des espces bactriennes.
Chaque microorganisme donne naissance une descendance
de plusieurs milliards dindividus constituant un amas ou une
colonie visible lil nu.
La forme, la couleur, la dimension dune colonie sont
caractristiques de lespce bactrienne.

Agents solidifiant
La solidification du milieu est presque toujours
obtenue par addition un milieu liquide dune
substance glifiante qui peut tre :
La glose (Agar-agar)
Lagar-agar est un polysaccharide extrait dune algue
marine.
Capable dabsorber et de glifier 300 500 fois son
poids deau.
Elle se dissout dans leau 80C et se prend en
masse 40 C.

Classification des milieux de culture


On peut classer les milieux de culture en
fonction de Leurs utilisation

Milieux usuels (de base).

Milieux disolement.
Milieux didentification.
Milieux de conservation.

1. Milieux de base
Ces milieux permettent la culture dune grande
varit de bactries.
Les plus utiliss sont :
Le bouillon nutritif
Cest une macration de de viande additionne
de peptone (15 20 g/l) et lgrement sale (5 g/l).
La glose nutritive
Bouillon additionn de glose raison de (20 g/l).

2. Milieux disolement
Ces milieux permettent dobtenir les bactries
contenues dans un produit naturel ltat de culture
pure.
Les plus utiliss sont :
Les milieux de base.
Les milieux de base enrichis de produits
biologiques : sang, srum, polyvitamines
Les milieux slectif ou lectif qui favorisent la
culture dune espce ou dun groupe despce
bactriennes alors que la croissance des autre
bactries est difficile, entrave ou nulle.
Contiennent des agents inhibiteurs ( ATB, sel,
colorant).

Milieu Mac Conkey

Aspect du milieu avant utilisation

Aspect du milieu aprs utilisation

Milieu slectif pour l'isolement des bacilles


Gram- Salmonella et Shigella

3. Les milieux didentification


Lidentification des bactries est base sur ltude de
leur proprits biochimiques. Cette culture se fait
dans plusieurs tubes contenants des milieux
spciaux.

Milieu mannitol
mobilit

Fermentation du
mannitol

Milieu rouge
pH est neutre ou basique
MANNITOL -

Milieu jaune
pH est acide
MANNITOL +

mobilit

Piqre centrale
avec le fil droit

Bactries uniquement au niveau


de la piqre centrale
Elles sont IMMOBILES

Les bactries ont


diffus dans le milieu
Elles
sont MOBILES

4. Les milieux de conservation


Milieux pauvre qui maintiennent les bactries dans
un tat de vie ralentie.
Conservation dune culture bactrienne peut tre
ralise par:
Rfrigration
Surglation
Lyophilisation

Rfrigration
Mthode qui permet de ralentir
le mtabolisme bactrien sans tuer les
microorganismes.
Conservation entre 4 et 7C (frigo).
Permet de conserver des cultures
bactriennes pendant un court laps de
temps.

Conglation et surglation
Refroidir rapidement des T entre 50 et 95 C
( - 18 C pour conglation).
Conservation pour une plus longue priode.
Permet de dcongeler la culture et de la faire
crotre, mme aprs plusieurs annes.

Lyophilisation ou cryodshydratation
Conglation rapide dune suspension microbienne
des T entre 54 et -72C tout en liminant leau,
ce qui donne une poudre.
Les bactries sont toujours vivantes
dpourvues dactivit mtabolique.

mais

Poudre peut tre conserve pendant des annes.

Peptones
Les peptones constituent la source essentielle de molcules
organiques azotes des milieux de cultures bactrien et myclien.

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