NUTRIO EM

BACTRIAS
CULTIVO
DE
Dra. Maria
Ceclia Pereira Soares
Fevereiro, 2014
BACTRIAS

Agenda
Aspectos essenciais quanto (ao/):
Nutrio microbiana (bacteriana) Captulo 3
(TRABULSI)
Crescimento Bacteriano Captulo 4 (TRABULSI)
Resistncia bacteriana Captulo 9 (TRABULSI)

Controle de crescimento de microrganismos

por:
Agentes fsicos Captulo 7 (TRABULSI)
Agentes qumicos Captulo 7 (TRABULSI)

Voc lembra o que

falamos quanto
nutrio/respirao
dos microrganismos?

Nutrio/Respirao
Podem
ser
auttrofos
ou
hetertrofos (parasitas, saprfitas,
simbiontes)
Podem ser aerbios, anaerbios e
facultativos

Algumas particularidades (Fontes de

Energia)
Bactrias auttrofas apresentam bacteriofila (no
h produo de oxignio; a gua no funciona como
doadora de eltrons).
Algumas bactrias so quimiotrficas (por meio de
reaes qumicas de oxidao).
Algumas
bactrias
so
litotrficas
(oxidam
compostos inorgnicos, ex. S, auxiliam na
degradao de materiais), outras so organotrficas
(oxidam compostos orgnicos, maior grupo)

Algumas particularidades (Fontes de

Material Plstico)
Fontes de Carbono: ons bicarbonato (auttrofas),
carboidratos, aa, lipdios, etc (hetertrofas)
Fontes de Nitrognio: por simbiose (leguminosas),
nitratos
ons inorgnicos essenciais:
Macronutrientes: P (PO4-3, S (aa), K (enzimas, regulador
PO, Mg (Ribossomos), Fe (pigmentos).
Micronutrientes: Co, Zn, Mn, Na, etc.

 gua
Oxignio

O que so meios de
cultura?

Definio
Material nutriente preparado no
laboratrio para crescimento de
microorganismo

Agar nutriente
Caldo nutriente

Agar
inclinado

Meio Quimicamente Definido

(Sintticos)
EX:
Componentes
Quantidades
Glicose
Fosfato de amnia monobsico
Cloreto de sdio
Sulfato de Magnsio
Fosfato de potssio dibsico
gua

5,0g
1,0g
5,0g
0,2g
1,0g
1 litro

Meio Complexo
Ex: Agar nutriente
Componentes
Quantidades
Peptona (Protena parcialmente digerida)
Extrato de carne
Cloreto de sdio
Agar
gua

5,0G
3,0G
8,0G
15,0G
1 Litro

Meio de cultura Seletivo e

Diferencial
Seletivo elaborados com o objetivo
de favorecer o crescimento da
bactria de interesse e impedir o
crescimento de outras bactrias
Diferencial utilizado para fcil
identificao da colnia de bactria
de interesse quando existem outras
bactrias crescendo na mesma
placa

 Exemplo: Agar MacConkey

Considerado seletivo e diferencial
Composio Sais biliares e cristal
violeta- Inibidores do crescimento de
bactrias gram-positivas Seletivo
Lactose Permite diferenciar bactrias
fermentadoras de lactose ( colnias
vermelhas ou rosas) das no
fermentadoras( colnias incolores)

Agar MacConkel

Meio de Enriquecimento
Isolamento de bactrias presentes
em pequeno nmero junto com
outras que esto em grande
quantidade geralmente liquido e
contm
todos
os
nutrientes
necessrios
para
favorecer
a
multiplicao
da
bactria
de
interesse

Exemplo: Identificao das Salmonelas

Caldo Selenito - meio de enriquecimento
para o isolamento de Salmonella spp a
partir de materiais clnicos, especialmente
fezes
No meio de cultura, peptona fornece os
nutrientes adequados necessrios para o
crescimento bacteriano, a lactose o
carboidrato fermentvel, selenito de sdio
inibe a flora Gram positivas e a maior
parte da flora intestinal, exceto Salmonella
spp,durante as primeiras 8-12 horas de

Temperatura:

Psicrfilas (0 a 18 C)

Mesfilas (25 a 40)

Termfilas (50 a 80)

pH: 7,0
Enzimas (passagem de
nutrientes)

Conservao:

Tubos (repique)

Geladeira (meio especfico)

leo mineral

Liofilizao (meio/
suspenso/ congelamento
30C/ sublimao/
fechado hermeticamente)

Nitrognio liquido (-179C)

CRESCIMENTO
BACTERIANO
Dra. Maria Ceclia Pereira Soares
Fevereiro, 2014

MAS AFINAL, O QUE

CRESCIMENTO?

Definio:
Somatrio
dos
processos
metablicos
progressivos que conduz diviso (reproduo).
Considerar que
largura e altura

pode

ser:

em

comprimento,

Inferido como individual e populacional.

Posso medir? Pode!

Mtodos diretos:
Centrifugaco
Peso seco

Mtodos indiretos:
Estimativas colorimtricas ou espectofotomtricas
Medida de consumo de susbstncias/ acmulo
Turbidimetria (leva em conta a absorbncia)

Mtodos de contagem de partculas

Direto: Coulter, cmaras de contagem, esfregaos corados
Indireto: Diluio seriada, plaqueamento

RESITNCIA
BACTERIANA
Dra. Maria Ceclia Pereira Soares
Fevereiro, 2014

Definio:
No reao diante de antibioticoterapia por:

Inexistncia de um alvo
Quando um alvo no atingido (parede celular lactmicos,
glicopeptdeos [vancomicina]; membrana polimixinas; sntese de
protenas cloranfenicol, eritromicina, estreptomicina; sntese de DNA,
RNA metronidazol, rifamcinas)
No inativao de um processo

Curiosidade:

Bactericida: causa morte

Bacteriosttico: impede o crescimento

Resistncia bacteriana
A bactria pode ser:
Sensvel
Resistente

A resistncia pode ser:

Natural (todas mesma caracterstica)
Adquirida (apenas uma amostra se altera) Seleo?

Ocorre por meio de:

Mutaes
Processos
de
recombinao
transduo, conjugao)
Transposons (DNA mvel)

gentica(transformao,

Resistncia bacteriana
Estafilococos
Enterobactrias
Micobactrias

Mutao
Plasmdeos

INTERVALO????

O que j vimos?
1

Nutrio Bacteriana

Crescimento
bacteriano

Resistncia
bacteriana

O que veremos
1

Controle de
Microrganismos:

Agentes fsicos

Agentes qumicos

CONTROLE DE
CRESCIMENTO
Dra. Maria Ceclia Pereira Soares
Fevereiro, 2014

Definies:
Esterilizao:

Processo de destruio, inativao definitiva e/ou remoo de

todas as formas de vida de um objeto ou material. No h graus
de esterilizao.

Desinfeco:

Destruio de microrganismos capazes de transmitir infeces.

Utiliza-se neste caso substncias qumicas em objetos ou
materiais Reduzem ou inibem o crescimento, mas no esterilizam
necessariamente.

Anti-sepsia:

um tipo particular de desinfeco, pela utilizao de substncias

qumicas aplicadas na pele, mucosa ou tecidos vivos.

Definies:
Germicida:
Especfico para cada tipo de germe:
virucida,
bactericida,
fungicida,
esporocida. Mata os referentes germes.

Assepsia:
Ausncia de microrganismos em uma
rea. Previnem a entrada de um
microrganismo.

Mtodos fsicos
Calor mido (desnaturao
de protenas)
a) Fervura (mata bactrias,
fungos e vrus em 15 minutos)
Caseiro
b) Autoclavao (mtodo de
esterilizao) Laboratorial
c)
Pasteurizao
(mata
bactrias patognicas) leite,
creme de leite, vinho,etc) (30
a 63C ou 72C + 5 a 140C
+ resfriamento)

Autoclaves (trinmio Tempo x P x

T)

Mtodos fsicos
Calor

seco

(Oxidao

do

material)
a) Flambagem (mtodo de
esterilizao)

Laboratorial,
utiliza-se ala e fio de platina
b)
Incinerao
(mtodo
de
esterilizao)

Industrial,
Hospitalar; para papis, carcaa
de animais, restos hospitalares
c)
Fornos
(mtodo
de
esterilizao

estufas)

Laboratorial;
Vidraria
dentre
outros materiais

Flambagem

Fornos (binmio Tempo x

T)

Mtodos fsicos
Filtrao (Remoo mecnica)

Separao de bactrias e fungos em meios

ou solues lquidas/gases

Radiao (Destruio do DNA)

Tem seus efeitos dependendo do tempo,

comprimento de onda e distncia da fonte
Ionizantes (raios gama): mais energia,
comprimento de onda curto, geram radicais
super-reativos;
material
descartvel
hospitalar
No ionizantes
(UV):
menos
energia,
comprimento de onda mais longo, baixa
penetrao

Baixas temperaturas (Microbiosttico)

Geladeira
(0);
congelador
Nitrognio lquido (-179C)

(-20C);

Filtros HEPA Utilizados em Cmaras

de Fluxo Laminar

Unidades de Membranas Filtrantes Descartveis,

Pr-Esterilizadas e Montadas

Micrografia Eletrnica de Varredura de Bactrias e Algas

Aquticas Retidas em um Filtro Nucleopore

Capela de fluxo laminar com uma fonte de radiao ultravioleta

utilizada para a descontaminao das superfcies internas

Mtodos qumicos
Podem ser:

Esterilizantes (matam)

Desinfetantes (reduzem
carga microbiana)

Curiosidades:
nem
sempre cheiro forte
quer
dizer
que

excelente bactericida,
por exemplo; mesmo
sendo baratos podem
ser txicos e corrosivos;
estudar o local onde
ser utilizado

Mtodos qumicos
lcoois:
Desinfetantes,
Bactericida,
Desnatura protenas (se lcool +
gua e previamente limpos), Lise das
clulas,
se
isoproplico
menos
corrosivo, glicis so usados para
desinfeco de cmaras, quartos e
salas

Halognios:
Iodo: tintura bactericida, fungicida
e esporocida; se combina com
aminocidos de forma irreversvel
Cloro: em formato, por exemplo de
hipoclorito, que oxida os grupos SH
de certas enzimas vitais

Mtodos qumicos
Agentes de superfcie:
Sabes,
inativam,
inibem
respirao, alteram a permeabilidade
da
membrana

clorohexidine
(bacteriosttico, que se liga parede,
provoca danos e libera contedo
citoplasmtico)

Agentes oxidantes:
Libera
oxignio,
extremamente
reativo, e oxida sistemas enzimticos
gua oxigenada (soluo a 3%),
usada para lavagem de feridas e
produz gs, por efeito da catalase,
facilitando limpeza; permanganato
de potssio (1:5.000-2.000)

DVIDAS?????
??