ASPEK FISIKA DALAM

BIOMOLEKUL
1. MENGUKUR TRANSPOR MOLEKUL TUNGGAL
2. ELEKTROFORESIS
3. KROMATOGRAFI
4. FLOWCYTOMETRY

SASARAN PEMBELAJARAN
1. MAHASISWA DAPAT MENGEMBANGKAN PEMBELAJARAN DAN
KEMAMPUAN MENGGUNAKAN ASPEK FISIKA DALAM
BIOMOLEKUL.
2. MAHASISWA DAPAT MENGEMBANGKAN INSTRUMENTASI
UNTUK MENGUKUR BIOMOLEKUL.
3. MAHASISWA DAPAT MENGEMBANGKAN TEKNIK MIKRO
UNTUK
MEMISAHKAN MOLEKUL.

Hukum ohm dan power

Hubungan dengan parameter listrik
V=IR
V= tegangan sebagai pembangkit energi
i= arus dialirkan kedalam rangkaian
R = tahanan untuk mengatur arus listrik
Power (P) = I V = i2R
Arus yang dialirkan melalui gel terjadi perpindahan
muatan.

Bergeraknya muatan dalam medan listrik.

TRANSPORT MOLEKUL
MEKANISME TARIKAN DAN TOLAKAN ANTAR

MOLEKUL, KARENA ADANYA GAYA LISTRIK.

SECARA UMUM YANG TERJADI DIDALAM ATOM
DAN MOLEKUL KARENA ADA GAYA LISTRIK.

MEKANISME INTERAKSI
ADA DUA JENIS INTERAKSI MOLEKUL:
1. INTERAKSI van der WALLS DISEBUT INTERAKSI
LEMAH
ATAU RESIDU, TERJADI PADA IONIK ATAU
METABOLIK.
2. INTERAKSI KUAT, YANG TERJADI PADA MATERIAL
ORGANIK SEPERTI ENZIM.

MENGUKUR MOLEKUL TUNGGAL

V

MOLEKUL

MENGUKUR
BAGAIMANAKAH BENTUK KURVA I(V) UNTUK MOLEKUL
I(V) TIDAK LINEAR
EMAS

EMAS

MOLEKUL
A

MENGUKUR
METODE PENGUKURAN
CARA MENGUKUR MOLEKUL BIOLOGIS
PROSES KIMIA
MEMILIH MOLEKUL YANG BERBEDA
MEMILIH ALAT YANG SESUAI
MENENTUKAN KARAKTERISTIK
MENGOLAH
MENGANALIS

Elektroforesis
Metode elektroforesis berkembang akhir abad ke19 setelah ditemukan penelitian yang
menunjukkan adanya efek dari listrik terhadap
partikel-partikel atau molekul-molekul yang
bermuatan listrik terutama protein
Menurut PASSTEUR dkk (1988) elektroforesis
berasal dari bahasa yunani yang mempunyai arti
transport atau perpindahan melalui
partikel-partikel listrik.

Prinsip Kerja Elektroforesis

Elektroforesis adalah suatu cara analisis kimiawi

yang didasarkan pada pergerakan molekulmolekul protein bermuatan di dalam medan listrik
(titik isoelektrik).
Pergerakan molekul dalam medan listrik
dipengaruhi oleh bentuk, ukuran, besar muatan
dan sifat kimia dari molekul.
Pemisahan dilakukan berdasarkan perbedaan
ukuran berat molekul dan muatan listrik yang
dikandung oleh makro-molekul tersebut.

Teknik Elektroforesis
Dapat dibedakan menjadi dua cara, yaitu :
o elektroforesis larutan (moving boundary

electrophoresis)
o elektroforesis daerah (zone electrophoresis).
Pada teknik elektroforesis larutan, larutan penyangga
yang mengandung makro-molekul ditempatkan
dalam suatu kamar tertutup dan dialiri arus listrik.
Padat5eknik elektroforesis daerah, menggunakan
suatu bahan padat yang berfungsi sebagai media
penunjang yang berisi (diberi) larutan penyangga

PRINSIP PELAKSANAAN

ELEKTROFORESIS ADALAH PROSES YANG

TERJADI DALAM SEBUAH SEL KARENA
DIBERIKAN PULSA ARUS LISTRIK. PULSA INI
TERJADI TEMPORARI DALAM MEMBRAN SEL ,
BERUPA MOLEKUL ATAU PARTIKEL YANG
MASUK KEDALAM SEL.
ELEKTROPORE ADALAH LOKASI UTAMA PADA
PERMUKAAN SEL SANGAT DEKAT DENGAN
ELEKTRODE. BILA MEDAN LISTRIK MEMPUNYAI
SIFAT PARAMETER, PORE SEL DAPAT

PROSES ELEKTROFORESIS
BAGIAN KHUSUS DARI SEL ADALAH DESTABILIZED
HASIL STRUKTUR YANG DIPEROLEH BERUPA
PORES TEMPORAL DALAM MEMBRAN.
MENAMBAH PERMEABILITAS MEMBRAN SEL :
TERJADI PENINGKATAN DIFUSI,ELEKTROPORETIK,
DAN TEKANAN UNTUK MENDORONG MOLEKUL AIR
Dan ION-ION.
TERJADI KEBOCORAN ION, MELEPASKAN
METABOLIT, DAN MEMPERCEPAT PENYALURAN OBAT,
PROB MOLEKULAR , DAN DNA OLEH SEL
HASIL ELEKTFORESIS DAPAT DIPELAJARI
MEMBAWA MOLEKUL BIOLOGIS.

PROSES ELECTROFORESIS
TERJADI ELEKTROPORESIS BILA MOLEKUL YANG

DIBAWA TERINDUKSI OLEH MEDAN LISTRIK LEBIH

BESAR DARI TEGANGAN AMBANG.
o PHASE SATU : PORES SEL YANG DIBENTUK PADA
RUANG MEMBRAN SEL ELEKTRODE POSITIP.
OLEH KARENA PADA SEL ELEKTRODE NEGATIP
ADA KAPASITANSI MEMBRAN PERTAMA APABILA
DIBERIKAN SUATU MEDAN LISTRIK DARI LUAR.
o PHASE DUA: PORES SEL YANG DIBENTUK PADA
RUANG MEMBRAN SEL ELEKTRODE NEGATIP.

DIELEKTROFORESIS

MEDAN LISTRIK LUAR DAPAT MENGINDUKSI PORE DALAM

MEMBRAN, BERGERAKNYA SEL OLEH DIELEKTROFORESIS,
MEMBRAN FUSI.
INTERAKSI MEDAN LISTRIK LUAR DENGAN HASIL MATERIAL
POLARISASI DALAM GAYA YANG KEMUDIAN TERJADI INDUKSI
GERAK DIDALAM PARTIKEL.
GERAK DIDALAM MEDAN LUAR DAPAT MENGUBAH STRUKTUR
ATAU KERUSAKAN MEKANIK YANG DAPAT DILAKUKAN DENGAN
ELEKTROFORESIS DAN ELEKTROFUSI.

Pemisahan molekul DNA

Dengan teknik elektroforesis, molekul DNA bermuatan

negatip bergerak melalui gel ke elektrode bermuatan
positip.

KEUNTUNGAN ELEKTROFORESIS
ELEKTROFORESIS MEMBERIKAN SEJUMLAH

KEUNTUNGAN DIBANDINGKAN DENGAN METODE

KONVENSIONAL PERMEABILISASI SEL.
METODE NON-KIMIA Dan NON-INVASIF.
TIDAK BERUBAH DALAM BIOLOGIS ATAU FUNGSI
TARGET SEL.
TANPA RACUN SEBAGAI PEMBANDING BAHAN
KIMIA ATAU METODA BIOLOGIS.
BESARNYA EFISIENSI ELEKTROFORESIS ADALAH
UMUMNYA LEBIH BAIK DARI PADA METODA
ALTERNATIF.
DAPATKAH DIGUNAKAN LEBIH LUAS UNTUK
MENSELEKSI JENIS SEL.

ELECTROPORATOR
BLOK DIAGRAM
ELEK- TROFORATOR
DARI
Puc M., Flisar K.,
Reberek S. and
Miklav.i. D.
Electroporator for in
vitro cell
permeabilization.,
ELEKTROPORATOR TERDIRI DARI KOMPUTER, PULSA
Radiol Oncol 2001;
GENERATOR, APLIFIER TEGANGAN, PENGUAT ARUS
35(3):DAN
203-7.
TEGANGAN PULSA RENDAH.. MENSELEKSI PARAMETER PULSA
MELALUI KOMPUTER. SEMUA PARAMETER PULSA, KECUALI
PULSA AMPLITUDO, KEMUDIAN DITERUSKAN KEPULSA
GENERATOR. MENGGANTIKAN SUB-UNIT KE SINYAL DIGITAL
KEMUDIAN DIPERKUAT DALAM PENGUATAN TEGANGAN KE
POTENSIAL YANG DITEMPATKAN DILUAR.. PENGUATAN SINYAL
MELALUI PENGUATAN ARUS YANG DINYATAKAN DENGAN POWER

ELEKTROFUSI

MENGEMBANGKAN APLIKASI ELEKTROFORESIS ADALAH

ELEKTROFUSI.
SEL FUSI DAPAT TERJADI DALAM ELEKTROFORESIS BILA
DIBAWA BERSAMA UNTUK DISALURKAN PULSA MEDAN
LISTRIK.
ARUS AC MENYEBABKAN DIELEKTROFORESIS DAN
TERJADI KONTAKAN DENGAN SEL.
SETELAH DIBERIKAN ARUS, PORE BERDEKATAN SATU
DENGAN YANG LAINNYA.

APLIKASI/KEGUNAAN
1. INTRODUKSI DNA ASING ATAU RNA DALAM SEL
HIDUP UNTUK TRANSFEKSI GEN
TERAPI GEN
2. FUSI SEL

MANIPULASI EMBRIO

FORMASI HYBRINOMA

FUSI TRANPROTOPLAST PLANT

3. MASUKAN PROTEIN DALAM MEMBRAN SEL .
4. IMPROVISASI PENYALURAN OBAT
KEMOTRAPI SEL KANKER
5. TRANSDERMAL PENYALURAN OBAT.

Kromatograf
Kromatograf adalah salah satu

metode pemisahan kimia yang

didasarkan pada adanya perbedaan
partisi zat pada fasa diam (stationary
phase) dan fasa gerak (mobile phase).
Kromatograf berasal dari bahasa
Yunani yaitu yang berarti warna
dan yang berarti menulis

KROMATOGRAFI
Kromatograf dapat bersifat preparatif
maupun analitik.
Tujuan kromatograf preparatif biasanya
adalah untuk memisahkan senyawa dalam
campuran (biasanya digunakan untuk
pemurnian).
Kromatograf analitik digunakan untuk
mengetahui perbandingan senyawa dalam
campuran.

ISTILAH2 DALAM
KROMATOGRAFI
Analit adalah zat yang dipisahkan.
Kromatogram adalah output visual

yang diperoleh dari hasil pemisahan.

Adanya puncak karakterisitik yang
berbeda menunjukkan adanya
senyawa yang berbeda.
Eluen adalah pelarut yang digunakan
untuk memisahkan analit.

ISTILAH2 DALAM
KROMATOGRAFI
Fasa gerak adalah fasa zat yang bergerak

pada arah tertentu.

Fasa diam adalah fasa yang tetap pada
tempatnya.
Waktu retensi adalah waktu yang
diperlukan analit untuk melewati sistem.
Volume retensi adalah volume fasa gerak
yang dibutuhkan untuk mengelusi
komponen analit

Dasar Fisika Kromatografo

Pada dasarnya, analit berada dalam

kesetimbangan dalam fasa gerak dan fasa

diam.
AmobileAstationary
Konstanta kestimbangan, K, sering disebut
dengan koefsien partisi.
Koefsien partisi adalah konsentrasi molar
analit pada fasa diam dibagi dengan
konsentrasi molar analit pada fasa gerak.

MEKANISME PEMISAHAN

ADSORPSI
PARTISI
ION-EXCHANGE & ION INTERACTION
UKURAN EKSLUSI
AFINITAS (INTERAKSI ANTIBODI-ANTIGEN);

INTERAKSI KIMIA; ATRAKSI)

KOMPLEKSI - CELASI
ION-EKLLUSI (Separation of weak acids)

KROMATOGRAFI : MEKANISME
PEMISAHAN
ADSORPSI

PARTISI

ION EXCHANGE

KROMATOGRAFI: MEKANISME
PEMISAHAN
AFFINITY

SIZE
EXCLUSION

Jenis Kromatograf
Kromatograf dapat dirancang sesuai sifat

fase zat, yaitu padat, cair, dan gas.

Cair dan gas adalah fase zat (fluida) yang
selalu bergerak (mengalir) sedangkan
padat perlakuannya sebagai stasioner.
Gas-cair dapat digolongkan sebagai
kromatograf gas, sedangkan cair-cair dan
cair-padat sebagai kromatograf cair.

FLOWCYTOMETRY
Flow cytometry adalah metode pengukuran (metri)

jumlah dan sifat-sifat sel (cyto) yang dibungkus oleh

aliran cairan (flow) melalui celah sempit yang ditembus
oleh seberkas sinar laser
Suatu teknik pengukuran fsis cepat dan karakteristik
sel kimia mengalir dalam fle tunggal melalui daerah
perekaman.

Figure adapted
from [1]

Tiga jenis:

KONTROL FLUIDIK: POSISI SAMPEL SEL

hydrodynamic atau
electrokinetic focusing
Deteksi optis: analisis efek
hamburan Dan fluorescence
memancarkan setelah penyinaran
oleh berkas sinar.
Cell Sorting: Aerosol droplet sorting
menggunakan elektrokinetik.
MENGARAH

Figure adapted from [2]

FLUIDICS CONTROL : HYDRODYNAMICS

Teori :

Dua aliran fluida

adalah di fokuskan
pada sampel.
Model rangkaian
dimana aliran =
arus Dan tekanan
= tegangan
Rancangan:
Lajunya aliran
mengarah dan
terkena sampel
dapat mengubah
lebar inti sampel.

FLUIDICS CONTROL :ELECTROKINETICS

TEORI:
SEBUAH PARTIKEL DALAM MEDAN E, DENGAN SUATU GAYA STATIS , qE
DENGAN q BERADA DALAM MEDAN TERSEBUT.
KESETIMBANGAN GAYA GESEK DIKENDALIKAN OLEH FLUIDA ALIR.
PERUBAHAN BEDA POTENSIAL LUAS ELEKTRODE UNTUK SAMPEL.
RANCANGAN:
ELEKTRODE Pt ATAU Al DIGUNAKAN UNTUK MEDAN LISTRIK LUAR.

KEGUNAAN
Secara luas digunakan untuk meneliti ekspresi

permukaan sel dan molekul sellular,

menggolongkan dan mendeskripsikan tipe sel
yang berbeda dalam populasi sel yang heterogen.
Flow cytometry dengancell sorting(fluorescence
activated cell sorter, FACS) memiliki aplikasi
dalam sejumlah bidang, termasuk biologi
molekuler, patologi, imunologi, biologi tanaman,
dan biologi kelautan.